HBsAg陽(yáng)性產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV DNA載量分析

鄒 軍，汪永強(qiáng)

(內(nèi)江市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 內(nèi)江 641100)

HBsAg陽(yáng)性產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV DNA載量分析

鄒 軍，汪永強(qiáng)

(內(nèi)江市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 內(nèi)江 641100)

目的 探討HBsAg(+)產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV DNA載量關(guān)系及相關(guān)性，為慢性乙型肝炎產(chǎn)婦母乳喂養(yǎng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法對(duì)148例HBsAg(+)產(chǎn)婦血清和乳汁中乙肝病毒采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQ-PCR)方法檢測(cè)HBV DNA，按產(chǎn)婦血清HBV載量分為HBV DNA載量＜420 IU/ml組、420～104IU/ml組、105～106IU/ml組、107～108IU/ml組，并同時(shí)收取產(chǎn)婦乳汁進(jìn)行HBV DNA檢測(cè)，比較不同組間乳汁HBV DNA陽(yáng)性率以及血清HBV DNA與乳汁HBV DNA的相關(guān)性。結(jié)果148例HBsAg(+)產(chǎn)婦血清HBV DNA陽(yáng)性率為31.8%(47/148)，乳汁陽(yáng)性率為16.2%(24/148)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.355，P＜0.05)；HBsAg(+)產(chǎn)婦血清HBV DNA載量＜420 IU/ml時(shí)，其對(duì)應(yīng)的乳汁中均未檢出HBV DNA；血清HBV DNA載量在420～104IU/ml區(qū)間時(shí)，其對(duì)應(yīng)乳汁中HBV DNA檢出率為14.3%(3/18)；血清HBV DNA載量在105～106IU/ml區(qū)間時(shí)，其對(duì)應(yīng)乳汁中HBV DNA檢出率為71.4%(5/7)；血清HBV DNA載量在107～108IU/ml區(qū)間時(shí)，其對(duì)應(yīng)乳汁中HBV DNA檢出率為84.2%(16/19)(χ2= 20.88，P＜0.05)；當(dāng)血清HBV DNA含量升高時(shí)，乳汁中含量也相應(yīng)增高，二者中度相關(guān)(r=0.628)。結(jié)論HBsAg(+)產(chǎn)婦乳汁有不同載量的HBV DNA存在，其含量低于相應(yīng)血清；隨著血清HBV DNA載量的升高，產(chǎn)婦乳汁中HBV DNA載量有增高趨勢(shì)，母乳喂養(yǎng)有潛在的傳染性。

HBsAg(+)；產(chǎn)婦；血清；乳汁；HBV DNA

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)是嗜肝DNA病毒，人體感染可導(dǎo)致乙型肝炎。孕婦是HBV的易感者，母嬰傳播所致乙型肝炎可達(dá)40%左右。我國(guó)每年約有80萬(wàn)嬰兒通過(guò)垂直傳播感染乙肝，除宮內(nèi)感染及分娩過(guò)程中經(jīng)產(chǎn)道感染外，母嬰之間密切接觸也是重要途徑，而其中母乳喂養(yǎng)是重要因素，其喂養(yǎng)有潛在傳染性，本文探討HBsAg(+)產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV DNA載量關(guān)系及相關(guān)性，為臨床提供科學(xué)依據(jù)，指導(dǎo)產(chǎn)婦安全喂養(yǎng)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年1月至2013年6月在我院婦幼保健院住院和門診就診的乙肝表面抗原陽(yáng)性的產(chǎn)婦，共148例，年齡最小者18歲，最大37歲，平均年齡26.3歲。

1.2 標(biāo)本采集 (1)血清：空腹靜脈采血3 ml，待血液自然凝固后用水平離心機(jī)3 000 r/min離心5 min，吸取上層血清于1.5 ml EP管中，-30℃儲(chǔ)存。(2)乳汁：清潔乳房后，擠乳汁3～4 ml于無(wú)菌杯內(nèi)，立即送檢，3 000 r/min離心10 min，取中層乳清儲(chǔ)存于1.5 ml EP管中，-30℃儲(chǔ)存。

1.3 儀器和試劑 ABI 7500 Real Time PCR system實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)儀，試劑購(gòu)于上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司，配有試劑A和B，A試劑主要含PEG、NaCl，B試劑主要為NaOH、SDS、Tween-20和Chelex-100。

1.4 HBV DNA核酸提取與PCR擴(kuò)增 (1) HBV DNA提?。簭谋渲腥〕龃龣z標(biāo)本平衡至室溫后混勻，取100 μl待檢樣本(血清和乳汁)分別加入100 μl核酸提取液A中，震蕩混勻10 s，低溫13 000 r/min離心10 min，棄上清，再分別加入50 μl核酸提取液B至沉淀中，震蕩混勻10 s，100℃干浴10 min，低溫13 000 r/min離心2 min，保留上清待用。(2)PCR擴(kuò)增：向已配置好的PCR反應(yīng)液中加入7 μl上述DNA提取液，輕輕混勻。(3)擴(kuò)增程序：50℃反應(yīng)2 min，94℃保溫5 min，93℃30 s→60℃90 s循環(huán)40次。60℃采集FAM熒光信號(hào)，陽(yáng)性判斷值為≥420 IU/ml。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)程度用直線相關(guān)分析，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 血清與乳汁中HBV DNA陽(yáng)性率比較 148例HBsAg(+)產(chǎn)婦血清HBV DNA陽(yáng)性率為31.8% (47/148)，乳汁陽(yáng)性率為16.2%(24/148)，兩者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.355，P＜0.05)。

2.2 血清HBV DNA載量與乳汁HBV DNA載量的關(guān)系 HBsAg(+)產(chǎn)婦血清HBV DNA載量＜420 IU/ml時(shí)，其對(duì)應(yīng)的乳汁中均未檢出HBV DNA；HBsAg(+)產(chǎn)婦血清HBV DNA載量在107～108IU/ml區(qū)間時(shí)，其對(duì)應(yīng)乳汁中HBV DNA檢出率為84.2% (16/19)；血清HBV DNA載量在105～106IU/ml區(qū)間時(shí)，其對(duì)應(yīng)乳汁中HBV DNA檢出率為71.4%(5/7)；血清HBV DNA載量在420～104IU/ml區(qū)間時(shí)，其對(duì)應(yīng)乳汁中HBV DNA檢出率為14.3%(3/18)；三組間陽(yáng)性率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=20.88，P＜0.05)。

2.3 血清HBV DNA載量與乳汁HBV DNA載量的相關(guān)性 HBsAg(+)產(chǎn)婦血清和乳汁HBV DNA載量同時(shí)陽(yáng)性時(shí)，兩者間相關(guān)系數(shù)r=0.628，呈中度相關(guān)(如圖1)。

圖1 HBsAg(+)產(chǎn)婦血清、乳汁HBV DNA載量同時(shí)陽(yáng)性時(shí)的相關(guān)性(r=0.628)

3 討論

乙型肝炎病毒屬于DNA病毒，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)全球慢性感染者達(dá)2.4億，我國(guó)是乙型肝炎高流行區(qū)域，一般人群的感染率為9.09%[1]，乙型肝炎病毒通過(guò)體液、母嬰和密切接觸等方式感染人體，導(dǎo)致乙型肝炎，嚴(yán)重危害人類的身心健康。乙型肝炎病毒的母嬰垂直傳播一般有3種途徑：一是妊娠時(shí)經(jīng)胎盤宮內(nèi)感染；二是分娩時(shí)胎兒經(jīng)過(guò)產(chǎn)道，可吞進(jìn)羊水、血、陰道分泌物引起感染；三是密切接觸或母乳喂養(yǎng)時(shí)經(jīng)過(guò)乳汁進(jìn)行傳播。慢性乙型肝炎防治指南在關(guān)于母嬰垂直傳播的預(yù)防中曾指出，新生兒在出生12 h內(nèi)注射HBIG和乙型肝炎疫苗，可接受HBsAg陽(yáng)性乳汁[2]，Meta分析與相關(guān)研究表明：母體HBV感染，母乳喂養(yǎng)不是嬰兒感染乙肝的危險(xiǎn)因素，嬰兒在出生后接受乙肝疫苗可以進(jìn)行母乳喂養(yǎng)[3-4]。

然而，乙肝患者是否可以母乳喂養(yǎng)一直存在較大的爭(zhēng)議，HBsAg和HBeAg同時(shí)陽(yáng)性的母體在胎兒期垂直傳播率為70%至90%，而低滴度HBsAg陽(yáng)性但HBeAg陰性母體垂直傳播率為10%至40%[5-6]，HBV病毒核酸基因是HBV的遺傳基礎(chǔ)，是判斷傳染性最為客觀的指標(biāo)，其病毒載量的高低直接與傳染性相關(guān)。研究表明：孕婦血清高濃度HBV水平是母嬰垂直傳播的危險(xiǎn)因素，所以母嬰垂直傳播與孕婦血清HBV載量明顯相關(guān)[7-8]，為什么乙肝患者是否可以母乳喂養(yǎng)一直存在較大的爭(zhēng)議呢?原因是大多數(shù)研究與指南沒(méi)有區(qū)分血清高濃度HBV含量與僅僅是HBsAg陽(yáng)性。

本研究擯棄傳統(tǒng)用HBeAg分組研究策略，探討血清HBV載量與乳汁HBV載量的相關(guān)性，結(jié)果表明：HBsAg(+)產(chǎn)婦血清HBV DNA陽(yáng)性率為31.8% (47/148)，乳汁陽(yáng)性率為16.2%(24/148)，血清HBV陽(yáng)性率高于乳汁HBV陽(yáng)性率，此結(jié)果與乳汁是否為初乳或成熟乳有很大的關(guān)系，因?yàn)槌跞镠BV載量高于成熟乳汁[9]，因此不能僅用乳汁HBV陽(yáng)性率判斷乙肝母體乳汁陽(yáng)性率。HBsAg(+)產(chǎn)婦血清HBV DNA載量逐步增高時(shí)，其乳汁中HBV DNA陽(yáng)性率隨之增高，當(dāng)HBsAg(+)產(chǎn)婦血清和乳汁HBV DNA載量同時(shí)陽(yáng)性時(shí)，兩者間相關(guān)系數(shù)r=0.628，呈中度相關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道大致一致[10]，因此，在不能確定乳汁是否安全的情況下，對(duì)HBsAg(+)產(chǎn)婦，應(yīng)結(jié)合血清HBV DNA和乳汁HBV DNA來(lái)正確指導(dǎo)母乳喂養(yǎng)，從而降低新生兒乙型肝炎的感染率。

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Analysis on HBV DNA copies in the serum and breast milk of parturients with HBsAg positive.

ZOU Jun,WANG Yong-qiang.Department of Clinical Laboratory,the Second People's Hospital of Neijiang,Neijiang 641100,Sichuan, CHINA

ObjectiveTo study the relationship and correlation between serum HBV DNA and breast milk HBV DNA of HBsAg(+)parturients,and to provide evidence of guiding breast feeding for women infected by chronic hepatitis B virus(HBV).MethodsA total of 148 parturients with HBsAg(+)of HBV were divided into the four groups according to the copies of HBV DNA in serum:＜420 IU/ml group,420～104IU/ml group,105～106IU/ml group, 107～108IU/ml group.The HBV DNA copies in the serum and breast milk from the four groups of women were detected by fluorescence quantitative PCR(FQ-PCR)technique respectively.And the relationship and correlation of the load of HBV DNA were performed between in serum and breast milk from the four groups.ResultsThe HBV positive rate of women with HBsAg(+)was 31.8%(47/148)in serum and 16.2%(24/148)in breast milk(χ2=7.355,P＜0.05). In the parturients with serum HBV DNA＜420 IU/ml,the corresponding breast milk was negative for the expression of HBV DNA.In the women with serum HBV DNA of 420～104IU/ml,105～106IU/ml,107～108IU/ml,the corresponding HBV DNA positive rate in breast milk was 14.3%(3/18),71.4%(5/7)and 84.2%(16/19),respectively(χ2=20.88,P＜0.05).When serum HBV DNA load increased,the content of breast milk increased accordingly,which showed a moderate correlation(r=0.628,P＜0.05).ConclusionHBV DNA is detected in breast milk of HBsAg(+)parturients.Its content is lower than that in the corresponding serum,and it increases when the load of HBV DNA in serum increases, which indicates that baby may be get infected through breast feeding.

HBsAg(+);Parturients;Serum;Breast milk;HBV DNA

R714.251

A

1003—6350（2015）07—1005—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.07.0358

2014-10-22)

吳階平醫(yī)學(xué)基金會(huì)肝病醫(yī)學(xué)部科研基金(編號(hào)：2010-ZD-19)；四川省衛(wèi)生廳科研課題(編號(hào):120294)

鄒 軍。E-mail：709578724@qq.com