足三里、三陰交、大椎配伍治療對(duì)腫瘤化療后升白效果及造血保護(hù)機(jī)制研究?

侯玉鐸

(山西中醫(yī)學(xué)院，太原030024)

足三里、三陰交、大椎配伍治療對(duì)腫瘤化療后升白效果及造血保護(hù)機(jī)制研究?

侯玉鐸

(山西中醫(yī)學(xué)院，太原030024)

目的:探討足三里、三陰交、大椎配伍治療在腫瘤化療過程中對(duì)白細(xì)胞和機(jī)體造血機(jī)制的保護(hù)作用。方法:選用SPF級(jí)小鼠108只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、處方組各36只，對(duì)模型組和處方組均采用環(huán)磷酰胺(CTX)100 mg/kg/d進(jìn)行造模，3 d后空白組蒸餾水灌胃，處方組采用足三里、三陰交、大椎配伍進(jìn)行針灸治療，比較小鼠體質(zhì)量及骨髓造血細(xì)胞變化情況。結(jié)果:造模前3組小鼠的白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、Cyclin D1蛋白積分光密度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;造模組的上述指標(biāo)較空白組在造模后第1、3、7天均有不同程度的下降;處方組上述指標(biāo)隨著時(shí)間均呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，與造模前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:足三里、三陰交、大椎配伍治療對(duì)腫瘤化療過程中的小鼠具有升高白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和保護(hù)骨髓造血功能的作用。

足三里;三陰交;大椎;白細(xì)胞;肌體造血功能

惡性腫瘤嚴(yán)重威脅人類健康，臨床上通常采用手術(shù)以及放化療治療。由于這些治療方法均缺乏特異性，尤其是放化療后易出現(xiàn)不同程度的胃腸反應(yīng)、免疫抑制以及骨髓抑制等副作用，給患者帶來極大的痛苦［1］，常使放化療延期甚至被迫中斷，因此腫瘤放化療后的輔助治療便顯得尤為重要。近年來，針灸在腫瘤放化療后的治療中表現(xiàn)出較高的臨床應(yīng)用價(jià)值［2］。本研究主要以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)小鼠為研究對(duì)象，分析足三里、三陰交、大椎配伍治療在腫瘤化療過程中對(duì)白細(xì)胞和機(jī)體造血機(jī)制的保護(hù)作用，為臨床實(shí)施化療病人減輕副作用提供有效的參考方法，其具體操作如下。

1 材料與方法

1.1 材料

選取健康SPF級(jí)小鼠108只，雌鼠51只，雄鼠57只，體質(zhì)量18～22 g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(中)201308)。將108只小鼠按照雌雄按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、處方組3組各36只，雌雄各17只、19只。本次實(shí)驗(yàn)小鼠于實(shí)驗(yàn)前3 d同一批次購(gòu)入，并進(jìn)行恒溫單獨(dú)喂養(yǎng)，自由進(jìn)食進(jìn)水。

1.2 主要試劑與設(shè)備

5 mg/ml的環(huán)磷酰胺CTX溶液，3%冰乙酸稀釋液，3%醋酸液，奧林巴斯雙目光學(xué)顯微鏡，離心機(jī)SHANDON，冰箱。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

造模方法:參照《新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編》的方法造模［2］，模型組和處方組均采用環(huán)磷酰胺(CTX)100 mg/(kg·d)連續(xù)3 d腹灌胃，空白組給予相同劑量蒸餾水灌胃(造模完成主要依據(jù)CTX的藥代動(dòng)力學(xué)過程，4 h后藥物活性消失)。

治療方法:造模完成后處方組采用足三里、三陰交、大椎配伍進(jìn)行針灸治療，小鼠穴位定位參照小鼠常用針灸穴位［3］:選取小鼠足三里、三陰交、大椎穴位，取小鼠俯臥位將其固定在鼠板上，采用管式進(jìn)針法直刺，管針選擇長(zhǎng)度為5 mm的美容毫針，置于小鼠各個(gè)穴位，進(jìn)針時(shí)針高于針管3 mm，進(jìn)針深度為2 mm，進(jìn)針后使針管上口和針尾持平。每個(gè)穴位均采用直刺的方式，留針6 min，每天1次，持續(xù)治療3 d和7 d。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.4.1 外周血血細(xì)胞計(jì)數(shù)于造模前和造模后第1、3、7天對(duì)小鼠割尾采血20 μ l，分別滴入390 μ l的3%冰乙酸稀釋液，取樣本在普通光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行WBC、紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.4.2 骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)于造模前和造模后第1、3、7天稱重，分別處死9只小鼠，取右側(cè)完整股骨除凈軟組織，用3%醋酸液10 ml沖出全部骨髓，使其成單細(xì)胞懸液在顯微鏡下計(jì)數(shù)骨髓有核細(xì)胞。

1.4.3 骨髓CyclinD1蛋白積分光密度采用SP法，按照試劑盒說明逐步操作。采集小鼠骨髓CyclinD1蛋白免疫組化染色圖像，采用Image-ProPuls圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析，每張圖片在放大40倍的顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行觀察，測(cè)定CyclinD1蛋白積分光密度值(IOD)，取其平均值作為CyclinD1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)錄入Excel2003，在SPSS 10.0中進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用配對(duì)資料t檢驗(yàn)或單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。

2 結(jié)果

2.13 組白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果比較

表1圖1顯示，3組造模前白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);造模后第1、3、7天，造模組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯低于空白組(P＜0.05)，處方組各時(shí)段白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)呈不斷增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，處方組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞第3、7天和造模組、空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表13 組白細(xì)胞各時(shí)段變化情況比較(109/l，±s)

表13 組白細(xì)胞各時(shí)段變化情況比較(109/l，±s)

注:與空白組比較:aP＜0.05，與造模組比較:bP＜0.05，與造模前比較:cP＜0.05

觀察指標(biāo)組別造模前造模后1 d造模后3 d造模后7 d白細(xì)胞(1 0 9/l)空白組14.37±4.6414.24±4.3814.48±4.7314.51±4.76造模組14.35±4.613.66±3.76ac4.82±3.98ac10.51±4.52ac處方組14.39±4.683.73±3.81abc7.88±4.47abc17.86±5.52abc中性粒細(xì)胞(109/l)空白組8.78±1.168.24±1.098.48±1.148.51±1.19造模組8.67±1.181.94±0.89ac1.37±0.88ac6.14±2.34ac處方組8.71±1.211.53±0.88ac3.46±0.89abc16.89±3.37abc淋巴細(xì)胞(1 0 9/l)空白組6.83±1.836.78±1.796.81±1.808.679±1.81造模組6.81±1.801.64±0.86ac2.57±1.08ac4.68±1.48ac處方組6.85±1.791.73±0.88ac2.67±1.14ac7.32±2.37ab紅細(xì)胞(1 0 9/l)空白組10.87±2.4410.84±2.3910.91±2.2810.94±2.38造模組10.85±2.519.21±1.89ac9.41±2.67ac8.47±1.48ac處方組10.89±2.419.23±1.88ac10.79±1.9810.04±2.34b骨髓有核細(xì)胞(109/l)空白組30.86±7.0130.79±6.9830.72±6.8930.88±7.02造模組30.79±6.993.47±1.83ac5.68±2.24ac13.67±3.89ac處方組30.89±7.015.88±2.88abc9.80±3.98abc17.98±5.34abc

圖1 骨髓組織結(jié)構(gòu)HE染色片(×40)，A為空白組、B為模型組、C為處方組

2.2 3組骨髓抑制骨髓CyclinD1蛋白積分光密度

表2顯示，3組造模前骨髓抑制骨髓CyclinD1蛋白積分光密度比較，造模組在第3、7天和空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);處方組在第3、7天和空白組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與造模組在第7天比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表2 3組中骨髓抑制骨髓CyclinD1蛋白積分光密度各時(shí)段變化情況(%)

3 討論

白細(xì)胞減少屬于中醫(yī)學(xué)“虛勞”、“氣血虛”等范疇，臨床表現(xiàn)為四肢乏力、心悸、頭暈等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［3］。中醫(yī)認(rèn)為［4］，白細(xì)胞減少與心、肝、腎、脾等臟器有關(guān)，其中脾、腎兩虛是導(dǎo)致白細(xì)胞減少的根本原因。脾為后天之本，氣血生化之源，具有滋養(yǎng)五臟六腑的功能，脾虛則氣血虧。腎屬于先天之本，可生骨髓，腎氣不足致使骨髓不充［5］。化療后邪毒侵犯機(jī)體，致機(jī)體白細(xì)胞減少，造血功能隨之受損［6］。中醫(yī)辨證認(rèn)為［7］，腫瘤患者化療后白細(xì)胞減少通常兼有氣滯血瘀的臨床表現(xiàn)，屬于本虛標(biāo)實(shí)，治療時(shí)當(dāng)益氣健脾、滋養(yǎng)肝腎、行氣活血，可用中醫(yī)針灸治療以快速緩解患者的疼痛感，補(bǔ)虛扶正，以提高患者機(jī)體免疫力，降低化療副反應(yīng)［8-9］。

多項(xiàng)臨床實(shí)踐證實(shí)，惡性腫瘤患者化療后進(jìn)行足三里、三陰交、大椎配伍針灸治療，可以有效緩解患者的疼痛，提升患者的白細(xì)胞數(shù)目和骨髓造血功能［10］。足三里又稱為“下陵”穴，位于小腿前外側(cè)，具有健脾生津、調(diào)理氣機(jī)、益氣活血、益腎養(yǎng)肝、健脾和胃、益氣活血、扶正培元、通經(jīng)活絡(luò)的作用，對(duì)于惡性腫瘤患者化療后白細(xì)胞減少癥具有較好的功效［11-12］;三陰交乃足三陰經(jīng)交會(huì)穴，功可健脾攝血、補(bǔ)肝益腎，又可理氣血、安心神、通經(jīng)絡(luò)，治療與肝、脾、腎三臟有關(guān)病證;大椎是督脈、六陽(yáng)之會(huì)，可扶正祛邪、振奮陽(yáng)氣、益氣補(bǔ)血13］，三穴配伍針灸治療，可以相互促進(jìn)、活血益氣、調(diào)理氣機(jī)、振奮陽(yáng)氣、扶正祛邪、標(biāo)本兼治，能有效提高患者外周血白細(xì)胞的數(shù)量，緩解化療的胃腸反應(yīng)，調(diào)整免疫功能。相關(guān)研究表明［14］，足三里、三陰交、大椎配伍針灸能有效促進(jìn)化療后動(dòng)物骨髓增生的活躍度，增加外周血的白細(xì)胞，同時(shí)促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫能力，達(dá)到緩解病情的效果。

本研究結(jié)果顯示，足三里、三陰交、大椎配伍進(jìn)行針灸治療在腫瘤化療過程中均可以有效升高小鼠WBC、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、骨髓有核細(xì)胞等數(shù)目，保護(hù)腫瘤小鼠的骨髓造血功能，與以前的報(bào)道一致［15］。由此可見，足三里、三陰交、大椎配伍針灸治療腫瘤患者化療造成的白細(xì)胞降低效果良好，可以有效地保護(hù)骨髓造血功能，升高白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)目。

綜上所述，足三里、三陰交、大椎配伍針灸能有效提高腫瘤患者化療后的白細(xì)胞水平，保護(hù)骨髓造血功能，幫助患者安全度過化療后易感染期，提高患者生活質(zhì)量，值得臨床推廣。

［1］李可馨，曹勇.從健脾補(bǔ)腎化瘀法探析化療后骨髓抑制的治療［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2012，21(4):410-411.

［2］陳敬賢，沈小珩.芪升合劑對(duì)大腸癌患者化療致骨髓抑制的影響［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，8(9):1161-1165.

［3］王振強(qiáng)，陳寶義，謝麗娜.益氣養(yǎng)榮方對(duì)腫瘤化療后骨髓抑制的臨床觀察［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2011，4(1):78-79.

［4］張翔，周郁鴻.中醫(yī)藥防治化療后骨髓抑制研究進(jìn)展［J］.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，33(7):326-328.

［5］馮翠屏，卿晨.補(bǔ)血益氣類中藥對(duì)化療后骨髓抑制小鼠的骨髓保護(hù)作用研究［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2011，56(3):37-38.

［6］章慧，王云啟，梁慧.八珍湯加減治療非小細(xì)胞肺癌術(shù)后化療致骨髓抑制20例總結(jié)［J］.湖南中醫(yī)雜志，2011，7(6):23-25.

［7］Wang Xiaojuan Liu Likun.Professor Liu Likun bone marrow suppression tumor after chemotherapy experience introduction［J］.Chinese and foreign medical，2012，12(18):118.

［8］Zhang Yanjun Cui Dajiang，LeiBaoXia.Spleen-invigorating tonga taste difficultly for the treatment of chemotherapy induced bone marrow inhibition of 32 cases of clinical observation［J］.Journal of modern cancer medicine，2011，32(8):1644-1646.

［9］張曉琴，何東初.補(bǔ)腎健脾方治療白細(xì)胞減少癥療效觀察［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，3(10):9-11.

［10］李可馨，曹勇.從健脾補(bǔ)腎化瘀法探析化療后骨髓抑制的治療［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11(4):410-411.

［11］孫德利，陳漢平，吳煥淦，等.斑蝥天灸對(duì)環(huán)磷酰胺小鼠造血功能的影響及其機(jī)理探討［J］.針灸推拿醫(yī)學(xué):英文版，2011，9(6):340-345.

［12］周鋒，黃君英，薛俐.針?biāo)幒嫌脤?duì)化療后白細(xì)胞減少癥療效觀察［J］.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2010，17(6):1168-1170.

［13］張扶莉，楊利生.升白方與黃芪注射液治療化療后白細(xì)胞減少癥療效觀察［J］.陜西中醫(yī)，2011，32(8):1023-1024.

［14］鄭嵐，沈小珩，周東亮.扶中升白方對(duì)大腸癌化療所致白細(xì)胞減少的治療作用［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，20(15): 1821-1823.

［15］趙喜新，黃喜梅，王和平，等.針灸對(duì)化療后骨髓抑制及白細(xì)胞的影響［J］.針灸推拿醫(yī)學(xué):英文版，2011，9(6):331-335.

R245.31

:A

:1006-3250(2015)05-0578-03

2015-02-10

山西省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2013011046-10)

侯玉鐸(1972-)，女，山西翼城人，講師，醫(yī)學(xué)碩士，從事針灸基礎(chǔ)與臨床研究。