大柴胡顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性豚鼠慢性膽囊炎的保護(hù)作用研究

盧金福 許惠琴 張志芬 王兆龍 蔣舒瑤 杜 萍

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210023；2.江蘇省中藥藥效與安全性評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京210023；3.南通精華制藥股份有限公司，江蘇南通226005；4.江蘇省中醫(yī)院，江蘇南京210029）

大柴胡湯出自張仲景的《傷寒論》，具有外解少陽(yáng)、內(nèi)瀉熱結(jié)的功效，用于治療少陽(yáng)陽(yáng)明合病，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用于治療膽囊炎、膽石癥、胃及十二指腸潰瘍等疾病。大柴胡顆粒是在大柴胡湯基礎(chǔ)上研制而成的現(xiàn)代中藥復(fù)方制劑。文獻(xiàn)報(bào)道顯示，大柴胡湯在治療肝膽疾病方面療效顯著，如膽囊炎、膽石癥、非酒精性脂肪肝等[1-4]，但有關(guān)大柴胡顆粒對(duì)膽囊炎的影響僅見(jiàn)臨床報(bào)道[5-6]。本研究通過(guò)制作實(shí)驗(yàn)性膽囊炎模型豚鼠，觀察大柴胡顆粒對(duì)膽囊炎的治療作用，為其臨床使用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 豚鼠，普通級(jí)，350～450g，雌雄兼用，由南京青龍山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供。

1.2 藥品與試劑 大柴胡顆粒由南通精華制藥有限公司根據(jù)大柴胡湯用現(xiàn)代工藝制備而成，藥物組成：柴胡 15g，黃芩 9g，芍藥 9g，半夏 9g，生姜 15g，枳實(shí)12g，大棗12枚，大黃6g[7]。膽囊炎高脂飼料：在普通飼料中加入酪蛋白1%、蔗糖1.5%、豬油1%、纖維素1%、膽酸0.02%、膽固醇0.05%[8]，由南京青龍山實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供。膽汁生化指標(biāo)測(cè)定試劑盒：TBIL測(cè)定試劑盒（重氮鹽法）、DBIL測(cè)定試劑盒（重氮鹽法），北京利得曼生化股份有限公司。TBA測(cè)定試劑盒（酶循環(huán)法），四川邁克生物科技有限公司。

1.3 儀器 日立7020全自動(dòng)生化分析儀，日本；TP 1020自動(dòng)脫水機(jī)、RM2235型石蠟切片機(jī)，德國(guó)LEICA公司產(chǎn)品；CS-VI型攤片烤片機(jī)，湖北孝感宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司；Tissue-Tek TEL組織包埋中心，日本SAKURA公司產(chǎn)品；LEICA DM 1000光學(xué)顯微鏡，德國(guó)Leica公司產(chǎn)品；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠；MiniSee圖像采集系統(tǒng)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與造模、給藥 取健康豚鼠，在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)1周后隨機(jī)分為正常對(duì)照組與造模組。正常對(duì)照組喂以普通飼料，造模組連續(xù)喂以膽囊炎高脂飼料8周[8]。喂養(yǎng)第5周時(shí)，將造模組隨機(jī)分為模型組和大柴胡顆粒大、小劑量組，大柴胡顆粒組分別給予4g/kg、8g/kg大柴胡顆粒溶液灌胃，正常對(duì)照組和模型組灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)給藥4周，飼料的喂養(yǎng)與給藥前相同。

2.2 指標(biāo)檢測(cè) 末次給藥后禁食12h，豚鼠稱重，脫頸處死，提取膽汁，測(cè)定膽汁中總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）及膽汁酸（TBA）含量。取膽囊用福爾馬林固定，石蠟包埋，HE染色，觀察膽囊形態(tài)學(xué)變化，對(duì)病變程度進(jìn)行賦值統(tǒng)計(jì)，即“+”、“++”、“+++”分別給予 1 分、2 分、3 分，每組累計(jì)統(tǒng)計(jì)。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPASS15.0軟件，所有計(jì)量資料均用（±s）表示并進(jìn)行 stuident-test。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組豚鼠相關(guān)生化指標(biāo)比較 與正常對(duì)照組比較，模型組豚鼠膽汁 DBIL明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，大柴胡顆粒大、小劑量組豚鼠膽汁中 DBIL 含量均明顯降低（P＜0.01，P＜0.05），其中大劑量作用更為明顯（P＜0.01）；大柴胡顆粒小劑量組豚鼠膽汁中TBIL含量明顯降低（P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 各組豚鼠膽囊形態(tài)學(xué)檢查 病理檢查顯示，模型組豚鼠膽囊局部上皮增生，間質(zhì)水腫，可見(jiàn)較多淋巴漿細(xì)胞浸潤(rùn)，局部區(qū)域可見(jiàn)腸上皮細(xì)胞化生；大柴胡顆粒的兩個(gè)劑量組可見(jiàn)少量或散在炎細(xì)胞浸潤(rùn)，膽囊局部上皮輕度增生，顯示對(duì)膽囊炎有較好的治療效果。結(jié)果見(jiàn)表2、圖1。

表1 各組豚鼠膽汁TBIL、DBIL、TBA含量比較（±s）

表1 各組豚鼠膽汁TBIL、DBIL、TBA含量比較（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與大柴胡顆粒小劑量組比較，△△P＜0.01。

組 別 動(dòng)物數(shù)（只）正常對(duì)照組劑 量（g/kg）13 TBIL（mol/L）DBIL（mol/L）-TBA（mol/L）56.21±60.70 20.47±9.701391.61±2387.96 13大柴胡顆粒小劑量組 13 4 32.31±24.59** 30.83±8.03* 818.05±1609.69大柴胡顆粒大劑量組 13 8 55.19±40.22 20.18±6.04**△△ 1577.64±2302.40模型組 - 68.58±38.40 38.24±6.16## 2483.76±2649.44

表2 各組豚鼠膽囊組織形態(tài)學(xué)觀察指標(biāo)比較（±s）

表2 各組豚鼠膽囊組織形態(tài)學(xué)觀察指標(biāo)比較（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù)（只）劑量（g/kg）水腫正常對(duì)照組13炎細(xì)胞浸潤(rùn) 腸化生 上皮細(xì)胞增生 病理改變總值- 0.00±0.000.15±0.38 0.00±0.00 0.00±0.00 0.15±0.38模型組 13大柴胡顆粒小劑量組 13大柴胡顆粒大劑量組 13- 1.15±0.38##1.00±0.00##0.38±0.65 1.15±0.55## 3.69±0.85##4 0.38±0.51**0.69±0.48*0.23±0.44 0.69±0.85 2.00±1.41**8 0.31±0.48**0.46±0.52**0.31±0.48 1.08±0.49 2.15±1.14**

圖1 各組豚鼠膽囊組織學(xué)圖片（HE染色，20×10）

4 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，慢性膽囊炎多因結(jié)石刺激、細(xì)菌感染、病毒性肝炎、化學(xué)性損害、寄生蟲(chóng)及急性膽囊炎遷延等引起，一般采用解痙止痛、控制感染、利膽、手術(shù)等方法治療[9]。西藥的長(zhǎng)期應(yīng)用導(dǎo)致的不良反應(yīng)較為多見(jiàn)；手術(shù)雖然有根治作用，但難免存在后遺癥，如膽道術(shù)后綜合征，不易被患者接受。中醫(yī)藥治療本病在利膽、改善癥狀方面療效顯著。

目前，慢性膽囊炎的動(dòng)物模型主要有飲飼法、石膽酸誘發(fā)等[8，10]。中醫(yī)認(rèn)為，膽囊炎的發(fā)病與飲食不節(jié)、精神抑郁等多種因素相互作用有關(guān)，其發(fā)病機(jī)制為濕熱內(nèi)盛、肝膽氣滯或氣郁化熱，因此本研究從飲食不節(jié)的角度采用飲飼法造模。

肝細(xì)胞分泌膽汁進(jìn)入膽囊臨時(shí)存儲(chǔ)，膽汁具有雙重功能：一是促進(jìn)脂類的消化和吸收；二是作為排泄液，將體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物（膽紅素、膽固醇等）排入腸腔，隨糞便排出體外。膽紅素由衰老的紅細(xì)胞釋放的血色素經(jīng)肝臟轉(zhuǎn)化而成，隨膽汁的分泌進(jìn)入膽囊。膽汁酸則由膽固醇轉(zhuǎn)變而來(lái)，這也是膽固醇排泄的重要途徑之一。中醫(yī)認(rèn)為，肝膽互為表里，肝膽疏泄失常，肝膽氣滯，膽汁郁結(jié)，不通則痛，氣血郁滯，熱結(jié)不散，最終形成膽囊炎?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，當(dāng)肝膽有疾病，膽紅素、膽固醇、膽汁酸等指標(biāo)可出現(xiàn)異常。國(guó)內(nèi)外的文獻(xiàn)均顯示，當(dāng)膽囊有病變時(shí)通常會(huì)累及肝臟，引起肝功能的異?；蚰懼判共粫车龋懼拈L(zhǎng)期滯留和過(guò)于濃縮對(duì)膽囊黏膜直接刺激是導(dǎo)致膽囊慢性炎癥變化的一個(gè)重要因素[11-13]。這些認(rèn)識(shí)與上述中醫(yī)的觀點(diǎn)基本吻合。因此膽紅素、膽汁酸等升高的程度也間接反映了膽囊病變的程度。大柴胡顆粒對(duì)高脂飼料致豚鼠膽囊炎膽汁DBIL、TBIL的升高有顯著的降低作用，對(duì)TBA的升高也有一定的降低趨勢(shì)，提示大柴胡顆粒對(duì)豚鼠膽囊炎有一定治療作用。水腫及炎細(xì)胞的浸潤(rùn)是組織炎癥的重要的特征，組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，大柴胡顆?？娠@著減輕豚鼠膽囊炎病變中的水腫及炎細(xì)胞的浸潤(rùn)，對(duì)腸化生、上皮細(xì)胞增生也有一定的抑制趨勢(shì)。結(jié)合上述生化指標(biāo)的改變，我們認(rèn)為大柴胡顆粒對(duì)膽囊組織的炎癥有較好的抑制作用，該作用的發(fā)揮可能通過(guò)改善肝膽代謝或促進(jìn)膽汁排泄等途徑實(shí)現(xiàn)，至于其詳細(xì)的機(jī)理及作用環(huán)節(jié)將在后續(xù)的工作中進(jìn)一步研究。

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