• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    噬菌體展示技術(shù)在食源性致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用

    2015-04-09 11:45:56胡雨欣陳力力
    食品科學(xué) 2015年11期
    關(guān)鍵詞:檢測(cè)

    胡雨欣,何 早,陳力力,劉 霞*

    噬菌體展示技術(shù)在食源性致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用

    胡雨欣,何 早,陳力力,劉 霞*

    (湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院,食品科學(xué)與生物技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南 長(zhǎng)沙 410128)

    噬菌體展示技術(shù)是20世紀(jì)80年代逐步建立并發(fā)展起來的一種分子生物學(xué)新技術(shù),目前用于構(gòu)建展示文庫的噬菌體主要有絲狀噬菌體、λ噬菌體、T4噬菌體和T7噬菌體。該技術(shù)在篩選噬菌體、單鏈抗體及多肽以建立食品安全檢測(cè)體系方面,具有廣闊的應(yīng)用前景。本文在介紹噬菌體展示技術(shù)系統(tǒng)的基礎(chǔ)上,對(duì)該技術(shù)在食源性致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行綜述。

    噬菌體展示技術(shù);食品致病菌;檢測(cè)

    噬菌體(bacteriophage)是一系列具有感染原核細(xì)胞以完成自身復(fù)制的病毒。噬菌體存在著各種各樣的形態(tài)及遺傳結(jié)構(gòu),因此其在分子遺傳學(xué)中起著歷史性的關(guān)鍵作用。大多數(shù)的噬菌體的寄主范圍是非常有限的,通常只感染單一種類的細(xì)菌[1]。將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到編碼噬菌體衣殼蛋白的基因組中并表達(dá),使目的多肽片段與噬菌體衣殼蛋白形成融合蛋白,同時(shí)外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面,稱之為噬菌體展示(phage display),由Smith[2]于1985年發(fā)現(xiàn)。該項(xiàng)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域,隨著沙門氏菌、大腸桿菌等食源性致病菌的污染造成的食品安全事件的發(fā)生,該項(xiàng)技術(shù)也應(yīng)用于食源性致病菌的檢測(cè)當(dāng)中,目前還處于起始階段。

    1 概 述

    1.1噬菌體展示技術(shù)的原理

    噬菌體展示技術(shù)是一種基因表達(dá)篩選技術(shù),在此過程中噬菌體的衣殼蛋白只是發(fā)揮對(duì)展示肽段的錨定作用,而對(duì)其結(jié)構(gòu)沒有影響;同時(shí),外源多肽的表達(dá)不干擾噬菌體感染和擴(kuò)增的能力,從而達(dá)到特異性分子在同一噬菌體顆粒內(nèi)基因型與表型的統(tǒng)一[3]。這一革命性的技術(shù),是自20世紀(jì)初噬菌體發(fā)現(xiàn)以來最大的革命之一[4]。

    1994年McCarrey等[5]最先構(gòu)建了噬菌體多肽和抗體展示文庫。噬菌體展示文庫(phage display library)是將展示不同特異性抗體片段的一大群重組噬菌體集合在一起,庫中的每個(gè)肽是可以復(fù)制的,當(dāng)噬菌體與靶分子經(jīng)過一段時(shí)間的孵育后,洗脫未結(jié)合的游離噬菌體,用競(jìng)爭(zhēng)受體或酸將與靶分子結(jié)合吸附的噬菌體洗脫下來,然后對(duì)其進(jìn)一步的擴(kuò)增,再投入下一輪的淘選。經(jīng)過3~5輪的“吸附-洗脫-擴(kuò)增”后,獲得高度富集的與靶分子特異性結(jié)合的噬菌體。

    1.2噬菌體展示系統(tǒng)的類型

    目前,用于構(gòu)建噬菌體展示系統(tǒng)的載體主要有絲狀噬菌體[2]、λ噬菌體[6]、T4噬菌體[7]和T7噬菌體[8],各系統(tǒng)各具有優(yōu)缺點(diǎn)。

    1.2.1絲狀噬菌體展示系統(tǒng)

    絲狀噬菌體是一個(gè)能夠感染革蘭氏陰性菌的細(xì)菌病毒大家族,具有約為6.5 nm的固定直徑[9],其含有一個(gè)環(huán)狀的單鏈DNA基因組,被包裹于含有幾個(gè)拷貝的主要衣殼蛋白和一些位于頂端的次要衣殼蛋白所組成的有少許柔韌性的管狀衣殼中。與其他的細(xì)菌病毒不同,絲狀噬菌體在所感染的宿主細(xì)菌中的生成和釋放都不會(huì)破壞細(xì)胞或使細(xì)胞裂解。大多數(shù)絲狀噬菌體的信息來源于感染大腸桿菌的噬菌體:f1/M13/fd[2],以及較少范圍的IKE。單鏈絲狀噬菌體展示系統(tǒng)又分為pⅢ展示系統(tǒng)和pⅧ及其他展示系統(tǒng)。

    1.2.1.1 pⅢ展示系統(tǒng)

    絲狀噬菌體是單鏈DNA病毒,pⅢ是它的次要外殼蛋白,位于噬菌體的最尾端,是噬菌體感染大腸桿菌所必須的。pⅢ展示系統(tǒng)的最突出特點(diǎn)是對(duì)外源多肽或蛋白的大小無嚴(yán)格限制,較長(zhǎng)的多肽甚至整個(gè)蛋白質(zhì)都可整合到基因外殼蛋白中[10]。pⅢ蛋白在結(jié)構(gòu)上可分為N1、N2和CT 3個(gè)功能區(qū)域,這3個(gè)結(jié)構(gòu)域由兩段長(zhǎng)長(zhǎng)的柔性連接區(qū)域所分隔,連接區(qū)域具有一段富含甘氨酸的連接肽G1和G2[11]。其中,N1為穿膜區(qū),作用于大腸桿菌細(xì)胞膜上的TolA蛋白,與噬菌體的入侵有關(guān);N2為受體結(jié)合區(qū),負(fù)責(zé)結(jié)合大腸桿菌的性菌毛;而CT構(gòu)成噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)的一部分,并將整個(gè)pⅢ蛋白的C端結(jié)構(gòu)域錨定于噬菌體的一端[12-13]。

    1.2.1.2 pⅧ及其他展示系統(tǒng)

    pⅧ是絲狀噬菌體的主要外殼蛋白,位于噬菌體外側(cè),C端與DNA結(jié)合,N端伸出噬菌體外,每個(gè)病毒顆粒約有2 700個(gè)pⅧ拷貝,含有pⅧ的融合蛋白能夠提供多價(jià)展示,從而根據(jù)親和力進(jìn)行目的基因的篩選[14]。pⅧ作為目的蛋白的載體,與pⅢ最顯著的差異在于衣殼蛋白不同的展示效價(jià):在每個(gè)噬菌體表面與pⅢ融合展示的多肽最多可達(dá)到5個(gè),而pⅧ則支持?jǐn)?shù)百甚至數(shù)千多肽的表達(dá)[3]。

    1.2.2λ噬菌體展示系統(tǒng)

    λ噬菌體為20面體噬菌體,結(jié)構(gòu)高度對(duì)稱。其衣殼直徑約為60 nm,殼厚4 nm;可容納48.5 kb基因組[15-16]。λ噬菌體的外殼主要由兩種蛋白質(zhì)構(gòu)成:gpE和gpD[17]。gpD是λ噬菌體頭部組裝必需的蛋白質(zhì),也稱裝飾蛋白。gpE蛋白則負(fù)責(zé)切割DNA以及形成最初的噬菌體頭部[11]。在成熟的噬菌體頭部,其gpD蛋白包含有405~420個(gè)拷貝,當(dāng)插入完整的野生型基因時(shí),頭部組裝蛋白gpD附著于衣殼外側(cè),將噬菌體頭部固定[18-19]。當(dāng)噬菌體基因組小于野生型基因組的82%時(shí),它可以在缺少gpD的情況下完成組裝[20],故gpD可作為外源序列融合的載體,這種展示一般為N端展示。

    1.2.3 T4噬菌體展示系統(tǒng)

    T4噬菌體是所有噬菌體成員中結(jié)構(gòu)校大的,而且遺傳結(jié)構(gòu)復(fù)雜[21],基因組DNA為雙鏈線形,呈環(huán)狀排列。T4噬菌體衣殼由3種必需衣殼蛋白組成,主要衣殼蛋白gp23和2個(gè)次要衣殼蛋白gp24、gp20,衣殼的外表面包裹著兩種非必需蛋白:SOC(small outer capsidprotein)和HOC(highlyantigenic outer capsidprotein),二者相距7 nm,以對(duì)稱的形式分布于噬菌體20面體表面。將外源多肽或蛋白分別與T4噬菌體SOC位點(diǎn)的C末端和HOC位點(diǎn)的N末端融合而展示于T4噬菌體的表面[7,22]。

    1.2.4 T7噬菌體展示系統(tǒng)

    T7噬菌體基因組為線性雙鏈DNA,頭部為20面體,其衣殼蛋白通常有兩種形式,即10A(344個(gè)氨基酸)和10B(397個(gè)氨基酸),正常T7噬菌體的頭部中10A與10B蛋白的比例是9∶1[23],位于噬菌體表面的是10B衣殼蛋白[24]。T7噬菌體展示系統(tǒng)是通過C端融合表達(dá)蛋白,插入片段被克隆到T7噬菌體載體基因10的C端,C端的空間位阻不大[25],即使插入片段內(nèi)含有終止密碼子,也可以被其表達(dá)和展示。

    2 噬菌體展示技術(shù)在食源性致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用

    食源性致病菌是指可以引起食物中毒或以食品為傳播媒介的致病性細(xì)菌。致病菌直接或間接污染食品及水源,人或畜禽感染后導(dǎo)致傳染性疾病的發(fā)生及食物中毒。食源性致病菌主要有致病性大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌、霍亂弧菌、炭疽桿菌、結(jié)核桿菌、布氏桿菌等。檢測(cè)對(duì)象包括細(xì)菌菌群的形態(tài)及細(xì)菌本身、細(xì)菌的DNA及其代謝物等[26]。目前針對(duì)食源性致病菌的檢測(cè)方法主要有傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法[27]、分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)[28]、免疫學(xué)方法[29]以及生物傳感器[30]的方法。其中免疫學(xué)方法和生物傳感器由于其特異性強(qiáng),操作簡(jiǎn)便而得到迅速發(fā)展,但這些方法中一般均需要使用抗體,而抗體的獲得主要是通過細(xì)胞雜交瘤技術(shù),需耗費(fèi)大量的時(shí)間和財(cái)力,抗體售價(jià)昂貴、且容易失活。噬菌體展示技術(shù)的出現(xiàn)為致病菌抗體的制備提供了新的途徑。利用噬菌體展示技術(shù)不僅可以制備對(duì)致病菌具有特異性結(jié)合的噬菌體和單克隆或多克隆抗體,而且可以以單克隆抗體或者單鏈抗體片段(single chain antibody fragment,scFv)為靶分子篩選致病菌的抗原模擬表位[31]。

    2.1篩選噬菌體作為檢測(cè)致病菌的探針

    由于抗體具有價(jià)格昂貴、合成過程復(fù)雜、容易失活等不足,大量的研究已表明可以用噬菌體作為致病菌的診斷探針。早在20世紀(jì)80年代初期,Hirsh等[32]就用Felix-O1噬菌體作為探針檢測(cè)牛奶中的沙門氏菌。他們將Felix-O1噬菌體與沙門氏菌共同培養(yǎng)后獲得與沙門氏菌特異性結(jié)合的噬菌體,并用于樣品中沙門氏菌的檢測(cè),在樣品采集后的8~24 h內(nèi)可獲得檢測(cè)結(jié)果;Bennett等[33]在1997年用該噬菌體作為生物吸附探針從食物中分離出腸炎沙門氏菌,并用于食品中的腸炎沙門氏菌的定量檢測(cè)。2005年Sorokulova等[34]以鼠傷寒沙門氏菌為靶分子,從Landscape噬菌體展示庫f8/8中,對(duì)5輪篩選后的單個(gè)噬菌體進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴(kuò)增和DNA測(cè)序,獲得有效噬菌體序列:VTPPTQHQ,經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunnosorbent assay,ELISA)驗(yàn)證該噬菌體對(duì)鼠傷寒沙門氏菌有高親和力和特異性,證實(shí)了Landscape噬菌體可以作為分離、診斷和檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌的有效探針。

    2.2篩選抗體作為檢測(cè)致病菌的探針

    相比傳統(tǒng)的抗體制備技術(shù),采用噬菌體展示技術(shù)獲得抗體可以避免繁瑣的操作,大大節(jié)約時(shí)間和成本,2007年Nanduri等[35]從構(gòu)建好的Griffin.1文庫[36]中分離噬菌體Lm P4:A8展示的scFv抗體,用于表面等離子共振(surface plasmon resonance,SPR)傳感器檢測(cè)單核細(xì)胞增生李斯特菌的主要毒力因子——肌動(dòng)蛋白聚集蛋白(ActA),檢測(cè)下限為2×106CFU/mL。同時(shí)通過傳感器獲得了scFv抗體與ActA的解離常數(shù)(Kd)。2010年Singh等[37]利用金黃色葡萄球菌腸毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)抗原進(jìn)行生物淘選,得到抗SEB-scFv抗體;用SPR技術(shù)檢測(cè)抗原抗體親和力,并將抗SEB-scFv抗體用于金黃色葡萄球菌食物中毒腸毒素B的血清學(xué)檢測(cè),結(jié)果表明二者具有高特異性且與其他金黃色葡萄球菌毒素?zé)o免疫學(xué)交叉反應(yīng)。2011年Meyer等[38]以鼠傷寒沙門氏菌的外膜蛋白D(outer membrane protein D,OmpD)為抗原,利用噬菌體展示技術(shù)從人類抗體基因庫HAL7中分離重組抗體片段,經(jīng)ELISA驗(yàn)證能夠應(yīng)用于檢測(cè)豬血清中鼠傷寒沙門氏菌的OmpD。Meyer等[39]次年用Hyperphage展示庫,篩選出鼠傷寒沙門氏菌的新型免疫蛋白并成功生產(chǎn)出抗體片段,對(duì)豬血清中的沙門氏菌檢測(cè)具有應(yīng)用前景。

    2.3篩選多肽作為檢測(cè)致病菌的探針

    呈現(xiàn)在噬菌體表面的特異性多肽片段可以提取出來,用于目標(biāo)物的檢測(cè)。Karoonuthaisiri[40]和Morton[41]等從隨機(jī)十二肽庫中篩選出與8種沙門混合菌具有特異性的多肽,并由磁分離技術(shù)驗(yàn)證該多肽作為抗體替代物的可行性;同時(shí),基于篩選得到的噬菌體多肽采用SPR檢測(cè)沙門氏菌,結(jié)果表明該方法具有很高的特異性和準(zhǔn)確性。噬菌體展示技術(shù)篩選的多肽或者抗體可以在幾周的時(shí)間內(nèi)完成,且無需標(biāo)記,因此該方法將為食品致病菌的快速檢測(cè)提供新的思路。Morton等[42]從噬菌體展示肽庫中淘選出單核細(xì)胞增生李斯特菌的多肽,將單核細(xì)胞增生李斯特菌從其他李斯特菌的混合物中分離出來。解決單核細(xì)胞增生李斯特菌缺少獨(dú)特的抗原表位的檢測(cè)難點(diǎn),獲得高特異性的多肽,為食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌的檢測(cè)提供新的方法。屈瑋等[43]使用NEB公司的噬菌體展示七肽庫試劑盒,對(duì)淘選過程中吐溫的添加量、噬菌體肽庫與阪崎桿菌的結(jié)合時(shí)間、洗脫時(shí)間等條件進(jìn)行優(yōu)化,篩選可特異性結(jié)合阪崎桿菌的多肽。對(duì)噬菌體克隆的DNA進(jìn)行測(cè)序,結(jié)果表明,阪崎腸桿菌的特異結(jié)合多肽序列為QNDGTPR,并用ELISA鑒定出一個(gè)與阪崎腸桿菌特異結(jié)合的陽性單克隆E2,結(jié)果表明E2具有良好的特異性。證明該多肽具有成為阪崎腸桿菌檢測(cè)探針的潛力,可用于阪崎腸桿菌的快速檢測(cè)。

    3 結(jié) 語

    噬菌體展示技術(shù)應(yīng)用于食品安全檢測(cè),尤其是在篩選特異性的噬菌體、抗體、多肽等時(shí),篩選容量大,克服雜交瘤方法周期長(zhǎng)、復(fù)雜的缺點(diǎn),并且可以大大降低檢測(cè)的成本,節(jié)省人力物力。但由于噬菌體展示技術(shù)可能存在外源性多肽的重疊、肽庫容量的限制性等不足之處,因此,噬菌體展示技術(shù)還有待進(jìn)一步完善。

    目前,噬菌體展示技術(shù)真正用于食源性致病菌的檢測(cè)并不是很多,但是它已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于新型疫苗的研制[44]、醫(yī)學(xué)診斷[45]、多肽藥物研制[46]、抗腫瘤[47]等領(lǐng)域,并且已有不少文獻(xiàn)報(bào)道以陽性單克隆或多克隆抗體為靶分子,從噬菌體肽庫中篩選出抗原模擬表位,用作診斷試劑直接診斷疾病[48]或是生產(chǎn)疫苗[49],這些也可以用于食源性致病菌的檢測(cè)。因此,在食品安全檢測(cè)領(lǐng)域快速、靈敏、高效的發(fā)展趨勢(shì)下,相信該技術(shù)將來能夠更廣泛地應(yīng)用于食源性致病菌的檢測(cè)。

    [1] NICASTRO J, SHELDON K, SLAVCEV R A. Bacteriophage lambda display systems: developments and applications[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2014, 98(7): 2853-2866.

    [2] SMITH G P. Filamentous fusion phage: novel expression vectors that display cloned antigens on the virion surface[J]. Science, 1985, 228: 1315-1317.

    [3]羅揚(yáng)拓,朱承睿,武元,等.噬菌體展示技術(shù)發(fā)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2011, 11(12): 2389-2390.

    [4] DUCKWORTH D H.“Who discovered bacteriophage?”[J]. Bacteriological Reviews, 1976, 40(4): 79-81.

    [5] McCARREY J R, WILLIAMS S A. Construction of cDNA libraries from limiting amounts of material[J]. Current Opinion in Biotechnology, 1994, 5(1): 34-39.

    [6] MARUYAMA I N, MARUYAMA H I, BRENNER S. Lambda foo: a lambda phage vector for the expression of foreign proteins[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1994, 91(17): 8273-8277.

    [7] REN Z, BLACK L W. Phage T4 SOC and HOC display of biologically active, full-length proteins on the viral capsid[J]. Gene, 1998, 215(2): 439-444.

    [8] ROSENBERG A, GRIFFIN K, STUDIER F W, et al. T7 select phage display system: a powerful new protein display system based on bacteriophage T7[J]. Innovations, 1996, 6: 1-6.

    [9] SPECTHRIE L, BULLITT E, HORIUCHI K, et al. Construction of a microphage variant of filamentous bacteriophage[J]. Journal of Molecular Biology, 1992, 228(3): 720-724.

    [10] CLACKSON T, WELLS J A.in vitroselection from protein and peptide libraries[J]. Trends in Biotechnology, 1994, 12(5): 173-184. [11] RAKONJAC J, FENG J, MODEL P. Filamentous phage are released from the bacterial membrane by a two-step mechanism involving a short C-terminal fragment of pIII[J]. Journal of Molecular Biology, 1999, 289(5): 1253-1265.

    [12] RIECHMANN L, HOLLIGER P. The C-terminal domain of TolA is the coreceptor for filamentous phage infection ofE. coli[J]. Cell, 1997, 90(2): 351-360.

    [13] LUBKOWSKI J, HENNECKE F, PL?CKTHUNA, et al. The structural basis of phage display elucidated by the crystal structure of the N-terminal domains of g3p[J]. Nature Structural & Molecular Biology, 1998, 5(2): 140-147.

    [14] MA Anzhou, HU Qing, BAI Zhihui, et al. Functional display of fungal cellulases fromTrichoderma reeseion phage M13[J]. World Journal of Microbiology and Biotechnology, 2008, 24(10): 2003-2009.

    [15] HOHN T, KATSURA I. Structure and assembly of bacteriophage lambda[J]. Current Topics in Microbiology and Immunology, 1977, 78: 69-110.

    [16] WITKIEWICZ H, SCHWEIGER M. The head protein D of bacterial virus lambda is related to eukaryotic chromosomal proteins[J]. The EMBO Journal, 1982, 1(12): 1559-1664.

    [17] YANG F, FORRER P, DAUTER Z, et al. Novel fold and capsidbinding properties of theλ-phage display platform protein gpD[J]. Nature Structural & Molecular Biology, 2000, 7(3): 230-237.

    [18] LANKES H A, ZANGHI C N, SANTOS K, et al.in vivogene delivery and expression by bacteriophage lambda vectors[J]. Journal of Applied Microbiology, 2007, 102(5): 1337-1349.

    [19] GI MIKAWA Y, MARUYAMA I N, BRENNER S. Surface display of proteins on bacteriophageλheads[J]. Journal of Molecular Biology, 1996, 262(1): 21-30.

    [20] STERNBERG N, WEISBERG R. Packaging of coliphage lambda DNA:Ⅱ. The role of the gene D protein[J]. Journal of Molecular Biology, 1977, 117(3): 733-759.

    [21]劉潔珠. T4噬菌體展示系統(tǒng)研究進(jìn)展[J].科技致富向?qū)? 2008(22): 97.

    [22] SUN S, KONDABAGIL K, DRAPER B, et al. The structure of the phage T4 DNA packaging motor suggests a mechanism dependent on electrostatic forces[J]. Cell, 2008, 135(7): 1251-1262.

    [23] CONDRON B G, ATKINS J F, GESTELAND R F. Frameshifting in gene 10 of bacteriophage T7[J]. Journal of Bacteriology, 1991, 173(21): 6998-7003.

    [24] DAI M, TEMIROV J, PESAVENTO E, et al. Using T7 phage display to select GFP-based binders[J]. Protein Engineering Design and Selection, 2008, 21(7): 413-424.

    [25]孟繁梅,張朝輝,艾云燦.噬菌體展示技術(shù)系統(tǒng)發(fā)展進(jìn)展[J].遺傳, 2011, 33(10): 1113-1120.

    [26]鞠慧萍,宋白薇,石建華,等. PCR技術(shù)在常見食源性致病菌檢測(cè)中的研究進(jìn)展[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊, 2010(3): 12-13.

    [27]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. GB 4789.4—2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2010.

    [28] O’GRADY J, RUTTLEDGE M, SEDANO-BALB?S S, et al. Rapid detection ofListeria monocytogenesin food using culture enrichment combined with real-time PCR[J]. Food Microbiology, 2009, 26(1): 4-7.

    [29]周明東.食源性致病菌快速檢測(cè)方法的建立及其試劑盒的研制與應(yīng)用[D].泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué), 2012.

    [30] SPAIN E, KOJIMA R, KANER R B, et al. High sensitivity DNA detection using gold nanoparticle functionalized polyaniline nanofibres[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2011, 26(5): 2613-2618.

    [31]張揚(yáng),焦新安.利用噬菌體展示肽庫篩選和鑒定沙門氏菌O9抗原的模擬表位[J].中國(guó)人獸共患病雜志, 2003, 19(1): 60-63.

    [32] HIRSH D C, MARTIN L D. Rapid detection ofSalmonellaspp. by using Felix-O1 bacteriophage and high-performance liquid chromatography[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1983, 45(1): 260-264.

    [33] BENNETT A R, DAVIDS F G C, VLAHODIMOU S, et al. The use of bacteriophage-based systems for the separation and concentration ofSalmonella[J]. Journal of Applied Microbiology, 1997, 83(2): 259-265.

    [34] SOROKULOVA I B, OLSEN E V, CHEN I, et al. Landscape phage probes forSalmonella Typhimurium[J]. Journal of Microbiological Methods, 2005, 63(1): 55-72.

    [35] NANDURI V, BHUNIA A K, TU S I, et al. SPR biosensor for the detection ofL. monocytogenesusing phage-displayed antibody[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2007, 23(2): 248-252.

    [36] GRIFFITHS A D, WILLIAMS S C, HARTLEY O, et al. Isolation of high affinity human antibodies directly from large synthetic repertoires[J]. The EMBO Journal, 1994, 13(14): 3245-3260.

    [37] SINGH P K, AGRAWAL R, KAMBOJ D V, et al. Construction of a single-chain variable-fragment antibody against the superantigen staphylococcal enterotoxin B[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2010, 76(24): 8184-8191.

    [38] MEYER T, STRATMANN-SELKE J, MEENS J, et al. Isolation of scFv fragments specific to OmpD ofSalmonellaTyphimurium[J]. Veterinary Microbiology, 2011, 147(1): 162-169.

    [39] MEYER T, SCHIRRMANN T, FRENZEL A, et al. Identification of immunogenic proteins and generation of antibodies againstSalmonellaTyphimurium using phage display[J]. BMC Biotechnology, 2012, 12: 29. doi:10.1186/1472-6750-12-29.

    [40] KAROONUTHAISIRI N, CHARLERMROJ R, MORTON M J, et al. Development of a M13 bacteriophage-based SPR detection usingSalmonellaas a case study[J]. Sensors and Actuators B: Chemical, 2014, 190: 214-220.

    [41] MORTON J, KAROONUTHAISIRI N, STEWART L D, et al. Production and evaluation of the utility of novel phage display-derived peptide ligands toSalmonellaspp. for magnetic separation[J]. Journal of Applied Microbiology, 2013, 115(1): 271-281.

    [42] MORTON J, KAROONUTHAISIRI N, CHARLERMROJ R, et al. Phage display-derived binders able to distinguishListeria monocytogenesfrom otherListeriaspecies[J]. PLoS ONE, 2013, 8(9): e74312. doi: 10.1371/journal.pone.0074312.

    [43]屈瑋,袁靜靜,朱威東,等.噬菌體展示技術(shù)篩選可特異結(jié)合阪崎腸桿菌的多肽[J].食品科學(xué), 2013, 34(21): 217-220. doi: 10.7506/ spkx1002-6630-201321044.

    [44] SARKIS PT, HAN T, PUDNEY J, et al. Anti-gp120 minibody gene transfer to female genital epithelial cells protects against HIV-1 virus challengein vitro[J]. PLoS ONE, 2011, 6(10): e26473. doi: 10.1371/ journal.pone.0026473.

    [45] KHURANA S, SASONA P, FOX A, et al. H5N1-Serodetect EIA and rapid test: a noval differential diagnostic assay for serodiagnosis of H5N1 infections and surveillance[J]. Journal of Virology, 2011, 85(23): 12455-12463.

    [46]李婧煒.噬菌體展示技術(shù)篩選腦靶向功能肽及其修飾納米粒的腦內(nèi)遞藥研究[D].上海:復(fù)旦大學(xué), 2012.

    [47]鄔亭亭,劉平,羅永艾.噬菌體在癌癥治療研究中的應(yīng)用[J].世界科技研究與發(fā)展, 2012, 34(3): 482-484.

    [48] TANG S S, TAN W S, DEVI S, et al. Mimotopes of the Vi antigen ofSalmonella entericaserovar typhi identified from phage display peptide library[J]. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, 2003, 10(6): 1078-1084.

    [49]許達(dá),李春玲,李淼,等.噬菌體展示技術(shù)篩選副豬嗜血桿菌外膜蛋白P5的抗原表位[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2013, 33(12): 1818-1821.

    Phage Display Technology and Its Application in Detection of Foodborne Pathogens: a Review

    HU Yuxin, HE Zao, CHEN Lili, LIU Xia*
    (Hunan Province Key Laboratory of Food Science and Biotechnology, College of Food Science and Technology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China)

    Phage display technology is a new molecular biological technology, which was gradually established and developed since the 1980s. Currently there are mainly four types of phages used in the construction of phage display libraries, including filamentous phage,λphage, T4 and T7 phage. This technology has extensive applications in screening specific phages, single-chain antibodies and peptides and establishing food safety detection system. In this article, the system of phage display technology is described, and its application in the detection of foodborne pathogens is summarized.

    phage display technique; foodborne pathogens; detection

    R446.5

    1002-6630(2015)11-0236-04

    10.7506/spkx1002-6630-201511044

    2014-07-03

    公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303084)

    胡雨欣(1990—),女,碩士,研究方向?yàn)槭称钒踩c控制。E-mail:627649521@qq.com

    *通信作者:劉霞(1976—),女,副教授,博士,研究方向?yàn)槭称贩治?,食品營(yíng)養(yǎng)與安全。E-mail:liuxiaspr@gmail.com

    猜你喜歡
    檢測(cè)
    QC 檢測(cè)
    “不等式”檢測(cè)題
    “一元一次不等式”檢測(cè)題
    “一元一次不等式組”檢測(cè)題
    “幾何圖形”檢測(cè)題
    “角”檢測(cè)題
    “有理數(shù)的乘除法”檢測(cè)題
    “有理數(shù)”檢測(cè)題
    “角”檢測(cè)題
    “幾何圖形”檢測(cè)題
    日本五十路高清| 一本精品99久久精品77| 午夜激情福利司机影院| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国产成人欧美在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产视频内射| 又爽又黄无遮挡网站| 色尼玛亚洲综合影院| 精品久久久久久久久久久久久| 日本三级黄在线观看| 天堂影院成人在线观看| 精品国产乱子伦一区二区三区| 小说图片视频综合网站| 18禁国产床啪视频网站| 中文字幕熟女人妻在线| 色播亚洲综合网| 男人的好看免费观看在线视频| 首页视频小说图片口味搜索| 校园春色视频在线观看| 国产精品亚洲美女久久久| 欧美+亚洲+日韩+国产| 波多野结衣高清作品| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产成人啪精品午夜网站| 日韩国内少妇激情av| 精品人妻1区二区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 美女cb高潮喷水在线观看 | 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 色av中文字幕| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品av久久久久免费| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 日日夜夜操网爽| 国产一级毛片七仙女欲春2| 香蕉av资源在线| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产亚洲欧美98| 中文字幕久久专区| 97碰自拍视频| 视频区欧美日本亚洲| 一级作爱视频免费观看| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久久久久久精品吃奶| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 一进一出好大好爽视频| 精品免费久久久久久久清纯| 久久伊人香网站| 曰老女人黄片| 最新中文字幕久久久久 | 午夜免费激情av| 又大又爽又粗| 欧美日韩一级在线毛片| 精品久久蜜臀av无| 亚洲天堂国产精品一区在线| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产黄片美女视频| 国产亚洲欧美98| 午夜激情欧美在线| 色av中文字幕| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲av免费在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 国产激情偷乱视频一区二区| 午夜福利18| 亚洲美女视频黄频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 免费看a级黄色片| 久久久国产精品麻豆| 一本久久中文字幕| 色播亚洲综合网| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产91精品成人一区二区三区| 一个人免费在线观看电影 | 日韩三级视频一区二区三区| 制服丝袜大香蕉在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 99热这里只有精品一区 | 国产爱豆传媒在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲av熟女| 久久久久国内视频| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品久久电影中文字幕| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久国产精品影院| 成人三级黄色视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产精品日韩av在线免费观看| 老司机福利观看| 色尼玛亚洲综合影院| 免费观看精品视频网站| 成人18禁在线播放| 脱女人内裤的视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 毛片女人毛片| 国产成人aa在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 日本黄色视频三级网站网址| 国产成人系列免费观看| www.999成人在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 精品一区二区三区视频在线 | 九色国产91popny在线| 特级一级黄色大片| ponron亚洲| 91麻豆精品激情在线观看国产| 一个人免费在线观看电影 | 哪里可以看免费的av片| 国产精品亚洲av一区麻豆| 曰老女人黄片| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久草成人影院| 国产乱人伦免费视频| 香蕉av资源在线| 后天国语完整版免费观看| 日日夜夜操网爽| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲九九香蕉| 免费人成视频x8x8入口观看| 操出白浆在线播放| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日日夜夜操网爽| 久久香蕉精品热| 午夜a级毛片| 午夜免费激情av| 国产激情偷乱视频一区二区| 少妇丰满av| www.www免费av| 免费观看精品视频网站| 婷婷精品国产亚洲av在线| 18禁美女被吸乳视频| 国产av一区在线观看免费| 国产一区二区三区视频了| 在线免费观看的www视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 最近在线观看免费完整版| 亚洲avbb在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 婷婷亚洲欧美| 村上凉子中文字幕在线| 床上黄色一级片| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产激情偷乱视频一区二区| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲国产看品久久| 国产一区二区激情短视频| 黄片大片在线免费观看| 中文字幕最新亚洲高清| av福利片在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲九九香蕉| 青草久久国产| 悠悠久久av| 国产一区二区在线av高清观看| 国产高清视频在线观看网站| 最近视频中文字幕2019在线8| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲avbb在线观看| 在线观看66精品国产| 热99在线观看视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久久久九九精品二区国产| 免费在线观看日本一区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产99白浆流出| 一a级毛片在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 久久久久久人人人人人| 亚洲18禁久久av| 精品久久久久久久末码| 免费在线观看亚洲国产| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲精品美女久久av网站| 男女视频在线观看网站免费| 黄色视频,在线免费观看| 首页视频小说图片口味搜索| 婷婷亚洲欧美| 天堂影院成人在线观看| 99视频精品全部免费 在线 | 久久精品综合一区二区三区| 观看美女的网站| 一级作爱视频免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 曰老女人黄片| 亚洲国产精品sss在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产视频内射| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美黄色片欧美黄色片| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 免费无遮挡裸体视频| 啦啦啦免费观看视频1| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 中文字幕高清在线视频| 嫩草影视91久久| 国产精品九九99| 欧美日韩福利视频一区二区| 看片在线看免费视频| 91字幕亚洲| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美极品一区二区三区四区| 久久久久久人人人人人| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 色尼玛亚洲综合影院| 午夜福利在线在线| 在线观看日韩欧美| 国产黄片美女视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 美女被艹到高潮喷水动态| 26uuu在线亚洲综合色| 人妻少妇偷人精品九色| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜亚洲福利在线播放| 久久这里有精品视频免费| 日本wwww免费看| 国产成人aa在线观看| 亚洲性久久影院| 精品人妻偷拍中文字幕| 插逼视频在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品久久久久久久久免| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 村上凉子中文字幕在线| 久久6这里有精品| 嘟嘟电影网在线观看| 看免费成人av毛片| 精品国产三级普通话版| 一级毛片我不卡| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲av二区三区四区| 美女国产视频在线观看| 日韩高清综合在线| 国产高清三级在线| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产av不卡久久| 少妇熟女欧美另类| av在线亚洲专区| 欧美日韩精品成人综合77777| 免费搜索国产男女视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产一区二区在线av高清观看| 99热这里只有是精品在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产精品,欧美在线| 禁无遮挡网站| 91精品一卡2卡3卡4卡| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产美女午夜福利| 女人久久www免费人成看片 | 欧美丝袜亚洲另类| 少妇的逼水好多| 亚洲国产精品专区欧美| 乱系列少妇在线播放| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品人妻久久久影院| 成年免费大片在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲成人中文字幕在线播放| 精品欧美国产一区二区三| av在线亚洲专区| 国产精品,欧美在线| 免费看日本二区| 一区二区三区高清视频在线| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 久久人妻av系列| 美女大奶头视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲国产高清在线一区二区三| 丰满人妻一区二区三区视频av| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 少妇的逼水好多| 久久久久久久久久久免费av| 男女下面进入的视频免费午夜| 日韩欧美精品免费久久| 成人一区二区视频在线观看| 全区人妻精品视频| 天堂√8在线中文| 国产久久久一区二区三区| 久久这里有精品视频免费| 国产极品天堂在线| 听说在线观看完整版免费高清| 久久久a久久爽久久v久久| 2022亚洲国产成人精品| 精品久久国产蜜桃| 久久精品夜色国产| 黄色欧美视频在线观看| 国产乱人视频| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲国产精品国产精品| 99久久九九国产精品国产免费| 国产免费福利视频在线观看| 国产成人91sexporn| 亚洲av熟女| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 成年女人永久免费观看视频| 99热全是精品| h日本视频在线播放| 久久久久久久午夜电影| 国产成人a∨麻豆精品| 老司机福利观看| 国产熟女欧美一区二区| 视频中文字幕在线观看| 青春草视频在线免费观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 韩国av在线不卡| 午夜免费男女啪啪视频观看| 永久免费av网站大全| 久久99热这里只频精品6学生 | 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 日韩三级伦理在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产亚洲一区二区精品| 欧美日本视频| av国产免费在线观看| 一区二区三区免费毛片| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美日本亚洲视频在线播放| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 丝袜喷水一区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 春色校园在线视频观看| 91狼人影院| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久午夜福利片| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 一本一本综合久久| 国产黄片美女视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 日韩亚洲欧美综合| 免费av不卡在线播放| 国产黄片视频在线免费观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| av国产免费在线观看| 人妻系列 视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久久欧美国产精品| 久久久久久伊人网av| 老司机福利观看| 日韩精品青青久久久久久| 最后的刺客免费高清国语| 日韩国内少妇激情av| 久久久精品94久久精品| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国产麻豆成人av免费视频| av.在线天堂| 精品久久久久久久末码| 黄色配什么色好看| 亚洲国产欧美在线一区| 久久精品夜色国产| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 久久久久精品久久久久真实原创| 熟女人妻精品中文字幕| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 一级二级三级毛片免费看| 日韩一区二区视频免费看| 国产私拍福利视频在线观看| 国产一级毛片在线| 神马国产精品三级电影在线观看| 在线免费十八禁| 日本免费在线观看一区| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久亚洲国产成人精品v| 国产一区二区在线av高清观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 久久久久久久久久黄片| 99热这里只有精品一区| 亚洲精品亚洲一区二区| av女优亚洲男人天堂| 伦理电影大哥的女人| 国产精品精品国产色婷婷| 国产乱人偷精品视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 老司机影院毛片| 日韩强制内射视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美日韩精品成人综合77777| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 内射极品少妇av片p| 亚洲最大成人av| 国产淫语在线视频| 久久99热这里只有精品18| 免费在线观看成人毛片| 天堂中文最新版在线下载 | 国产成人午夜福利电影在线观看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国模一区二区三区四区视频| 中文字幕免费在线视频6| 日本与韩国留学比较| 国产美女午夜福利| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美+日韩+精品| 久久久久久久午夜电影| 黄色欧美视频在线观看| 国产精品,欧美在线| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲国产精品sss在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产成人精品久久久久久| 国产精品久久视频播放| 久久久久国产网址| 久久综合国产亚洲精品| 人人妻人人看人人澡| 久久人人爽人人爽人人片va| 成年女人永久免费观看视频| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲最大成人手机在线| 久久久久久久久久成人| 中文字幕熟女人妻在线| av在线老鸭窝| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲综合精品二区| 特级一级黄色大片| 久久久久久大精品| av黄色大香蕉| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 久久鲁丝午夜福利片| 国产成人福利小说| 国产久久久一区二区三区| 2022亚洲国产成人精品| 一本一本综合久久| 最近中文字幕2019免费版| 日本av手机在线免费观看| 看片在线看免费视频| 亚洲怡红院男人天堂| 成人鲁丝片一二三区免费| 久久热精品热| 久久久久网色| 亚洲国产精品合色在线| a级毛片免费高清观看在线播放| 丝袜喷水一区| 成人国产麻豆网| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 边亲边吃奶的免费视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 99久久九九国产精品国产免费| 欧美性感艳星| 精品国内亚洲2022精品成人| 我的女老师完整版在线观看| 国产91av在线免费观看| 村上凉子中文字幕在线| 桃色一区二区三区在线观看| 久久精品人妻少妇| 大香蕉97超碰在线| 欧美三级亚洲精品| 最近手机中文字幕大全| 白带黄色成豆腐渣| 青青草视频在线视频观看| 麻豆一二三区av精品| 国产成人免费观看mmmm| 99热6这里只有精品| 午夜日本视频在线| 久久久久九九精品影院| 99久久九九国产精品国产免费| 免费观看人在逋| 亚洲在久久综合| 男女国产视频网站| 欧美潮喷喷水| 国产亚洲91精品色在线| 精品久久久噜噜| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 午夜久久久久精精品| 亚洲美女视频黄频| 欧美另类亚洲清纯唯美| av播播在线观看一区| 久久人人爽人人片av| 亚洲av中文av极速乱| 人妻少妇偷人精品九色| 大话2 男鬼变身卡| 99久久精品国产国产毛片| 国产老妇女一区| 亚洲国产最新在线播放| 老司机影院毛片| 国产成人a∨麻豆精品| 国产精品国产高清国产av| 天美传媒精品一区二区| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 国产精品野战在线观看| 精品久久久久久久久av| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产成人福利小说| 麻豆一二三区av精品| 久久久久久久午夜电影| 国产高清三级在线| 中文精品一卡2卡3卡4更新| av在线老鸭窝| 亚洲自偷自拍三级| 国产色婷婷99| 亚洲av成人av| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产男人的电影天堂91| 黄色欧美视频在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 免费人成在线观看视频色| 床上黄色一级片| 18+在线观看网站| 国产亚洲最大av| 亚洲在线观看片| 国产成人福利小说| a级一级毛片免费在线观看| 色综合站精品国产| 赤兔流量卡办理| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产高清国产精品国产三级 | 看免费成人av毛片| 国产免费视频播放在线视频 | 久久久亚洲精品成人影院| 国产亚洲av嫩草精品影院| 精品熟女少妇av免费看| 久99久视频精品免费| 久久精品人妻少妇| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 久久久亚洲精品成人影院| 国产中年淑女户外野战色| 欧美日本亚洲视频在线播放| 中文字幕免费在线视频6| 99久久精品热视频| 观看免费一级毛片| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久国内精品自在自线图片| 一区二区三区高清视频在线| 99热6这里只有精品| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久久久性生活片| 美女大奶头视频| 99久久人妻综合| 日韩三级伦理在线观看| 中文字幕久久专区| 综合色av麻豆| 日韩国内少妇激情av| 丰满少妇做爰视频| 永久网站在线| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲自拍偷在线| 天堂影院成人在线观看| 亚州av有码| 欧美变态另类bdsm刘玥| av在线天堂中文字幕| 亚洲在久久综合| 国产精品久久视频播放| 国产精品一区二区性色av| 水蜜桃什么品种好| 五月伊人婷婷丁香| 国产色爽女视频免费观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 内射极品少妇av片p| 日韩欧美精品免费久久| 两个人的视频大全免费| 韩国高清视频一区二区三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 人人妻人人看人人澡| 69人妻影院| 日本黄色视频三级网站网址| 国产片特级美女逼逼视频| 日日啪夜夜撸| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲综合色惰| 精品久久久噜噜| 中文字幕熟女人妻在线| 国产精品一区二区在线观看99 | 欧美性感艳星| 白带黄色成豆腐渣| 1024手机看黄色片| 久久99蜜桃精品久久| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 欧美潮喷喷水| 亚洲av熟女| 三级国产精品欧美在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 午夜a级毛片| 日韩视频在线欧美| 免费大片18禁| 三级经典国产精品|