分子標(biāo)記在地下嚙齒類動物擴(kuò)散中的應(yīng)用

劉 麗，紀(jì)維紅，花立民，楚 彬，周延山

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)—新西蘭梅西大學(xué)草地生物多樣性研究中心，甘肅蘭州730070)

擴(kuò)散(Dispersal)是物種在其生活史特定階段多個時間和空間尺度上所表現(xiàn)出的生態(tài)學(xué)過程及特征。其對個體的存活、繁殖、生長、棲息地的選擇，以及種群組成、動態(tài)和遺傳結(jié)構(gòu)等都均有重要的影響［1］。擴(kuò)散是一種高度可變的現(xiàn)象，其擴(kuò)散距離、擴(kuò)散頻率、擴(kuò)散時期和擴(kuò)散性別因動物個體差異而表現(xiàn)各異［2］。擴(kuò)散也是一個種群能夠長期生存的關(guān)鍵，是一種源于種群個體行為特征的綜合現(xiàn)象［3-4］。目前，動物擴(kuò)散已成為動物生態(tài)學(xué)研究的核心問題之一。其目的是通過研究個體擴(kuò)散的時間和空間尺度，揭示物種在不同棲息地間選擇和利用的規(guī)律［5-6］。

地下嚙齒動物是一類高度適應(yīng)地下生活方式的穴居動物，主要依靠廣泛挖掘地下通道來獲取所需的食物，選擇棲息地并完成擴(kuò)散行為［7］。地下嚙齒動物的擴(kuò)散既是基因交流和維持種群穩(wěn)定的過程，也是造成環(huán)境危害的重要行為之一。如我國高寒草原的主要地下鼠——高原鼢鼠(Eospalax baileyi)，其對草原的危害面積不斷擴(kuò)大就是與擴(kuò)散密切相關(guān)。因此，了解更多有關(guān)擴(kuò)散對其種群動態(tài)和遺傳方式的影響［8-9］，對認(rèn)識地下嚙齒動物在生態(tài)系統(tǒng)中的作用具有重要意義［10-11］。

地下嚙齒動物由于棲息于地下，難以直接觀察，增加了對其種群擴(kuò)散研究的困難。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，如微衛(wèi)星DNA(Microsatellite DNA)、DNA指紋技術(shù)(DNA fingerprinting)、線粒體DNA(Mitochondrial DNA)等技術(shù)的完善和應(yīng)用，人們對動物生態(tài)學(xué)，包括種群遺傳分化，種群間的擴(kuò)散特點和關(guān)系，以及生殖策略等眾多問題獲得了更深入的認(rèn)識。目前，國內(nèi)外已將分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用到地下嚙齒類動物的擴(kuò)散研究中，對研究種群間的基因流水平、偏性擴(kuò)散現(xiàn)象以及擴(kuò)散的影響因素提供了技術(shù)支撐和理論依據(jù)，使在更大時間尺度和空間尺度上研究擴(kuò)散成為了現(xiàn)實［12-13］，也為地下嚙齒動物危害的治理提供了一定的生態(tài)學(xué)研究的理論依據(jù)［14］。

1 微衛(wèi)星標(biāo)記在地下嚙齒類動物擴(kuò)散中的應(yīng)用

微衛(wèi)星標(biāo)記(Microsatellites)也稱簡單序列重復(fù)(Simple Sequence Repeat，SSR)或短串聯(lián)重復(fù)(Short Tandem Repeat，STR)，是指以1 ～6 個核苷酸為重復(fù)單位組成的簡單串聯(lián)重復(fù)序列，重復(fù)次數(shù)的不同和重復(fù)程度的不一致造成了這些序列的多態(tài)性。微衛(wèi)星作為近年來發(fā)展迅速、應(yīng)用廣泛的分子標(biāo)記，具有多態(tài)性高、保守性好、呈共顯性遺傳及符合孟德爾遺傳規(guī)律等優(yōu)點，在群體遺傳、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建、親緣關(guān)系劃分及種質(zhì)結(jié)構(gòu)分析等領(lǐng)域發(fā)揮著巨大的作用，并在自然種群的許多研究方面得到了廣泛的應(yīng)用［15-19］。

目前，分子標(biāo)記技術(shù)已從過去的小衛(wèi)星技術(shù)發(fā)展到微衛(wèi)星技術(shù)，并在地下嚙齒類動物的一些種群擴(kuò)散研究中不斷應(yīng)用［20-23］。微衛(wèi)星標(biāo)記在行為學(xué)上的應(yīng)用以及現(xiàn)代遺傳數(shù)據(jù)分析方法，為研究難以直接觀察的動物類群的擴(kuò)散機(jī)制及影響動物擴(kuò)散的因素提供了先進(jìn)的研究手段［24-26］。如Cutrera 和Fernández-Stolz 等利用微衛(wèi)星位點分析研究櫛鼠科擴(kuò)散時，發(fā)現(xiàn)櫛鼠種群具有某些擴(kuò)散特點，如該物種的擴(kuò)散主要偏雄性［27-28］。Mora 等［9］在此基礎(chǔ)上，利用微衛(wèi)星標(biāo)記和貝葉斯分析方法(Bayesian Analysis)揭示了南櫛鼠(Ctenomys australis)的種群結(jié)構(gòu)以及在不同空間尺度上種群的擴(kuò)散模式，發(fā)現(xiàn)在試驗區(qū)域的部分地區(qū)存在偏雄性擴(kuò)散現(xiàn)象，在連續(xù)存在棲息地的情況下雄性比雌性的擴(kuò)散距離更遠(yuǎn)，而且雄性個體擴(kuò)散更加頻繁。但并不表明雌性個體是因為對聚居地有強(qiáng)烈的歸屬感而不擴(kuò)散。但是在南櫛鼠擴(kuò)散的研究中，其已經(jīng)開發(fā)的微衛(wèi)星位點多態(tài)性低于同一屬中其他物種［27-28］，所以在小尺度范圍內(nèi)(＜4 km)很難發(fā)現(xiàn)偏性擴(kuò)散，也就是說南櫛鼠的偏性擴(kuò)散不僅僅局限于某一空間尺度內(nèi)［9］。在其他地理尺度范圍，Mapelli 等［29］用微衛(wèi)星標(biāo)記來分析瀕臨滅絕的嚙齒動物包氏櫛鼠(C. porteousi)的種群結(jié)構(gòu)和基因流模式，并用景觀遺傳學(xué)方法分析景觀配置對種群之間基因交流的影響，發(fā)現(xiàn)在小的空間尺度下包氏櫛鼠有穩(wěn)定的遺傳結(jié)構(gòu)，生境破碎化能增強(qiáng)種群分化。除南櫛鼠外，Patzenhauerová 等［30］利用微衛(wèi)星標(biāo)記研究非洲濱鼠科種群的親屬關(guān)系結(jié)構(gòu)和交配體制，發(fā)現(xiàn)不同種群間個體的擴(kuò)散在一定程度上影響種群的雌雄比例，繼而影響種群的交配系統(tǒng)和基因結(jié)構(gòu)，體現(xiàn)了擴(kuò)散的重要性和意義。但是對種群的擴(kuò)散特點和擴(kuò)散行為并沒有進(jìn)一步的研究。

2 DNA 指紋技術(shù)在地下嚙齒類擴(kuò)散中的應(yīng)用

DNA 指紋基于生物DNA 序列多態(tài)性。這種多態(tài)性是同種的不同個體間出現(xiàn)很小概率的堿基對改變，而這種不同種本身一致序列的改變存在于部分個體中。單個個體是擁有整個改變集合中的一個小集合部分，從而有種群個體DNA 的核苷酸種類、數(shù)量、排序的變化，部分導(dǎo)致酶切位點等的改變，酶切后呈現(xiàn)限制性片斷長度多態(tài)性(RFLPS)。而相對于RFLPS 來說，DNA 指紋分析主要是以小衛(wèi)星或微衛(wèi)星位點的變化為基礎(chǔ)［31］。由于DNA 指紋圖譜在動物和人類中一樣，具有個體高度特異性、體細(xì)胞穩(wěn)定性和種類穩(wěn)定性等的特點，而且這種特異性仍遵循簡單的孟德爾遺傳規(guī)律，因此成為具有吸引力的遺傳標(biāo)記方式之一，具有廣泛的用途［32-33］。

Reeve 等［10］和McLeish 等［11］利用DNA 指紋技術(shù)研究其4 個不同聚居地之間裸鼢鼠(Heterocephalus glaber)種群的親緣關(guān)系，試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其親緣系數(shù)是在有記載的野生哺乳動物中最高的，聚居地內(nèi)個體DNA 指紋的相似性體現(xiàn)了裸鼢鼠種群較近的親緣關(guān)系，存在高水平的近親繁殖，同時也說明了生態(tài)條件對種群擴(kuò)散有約束作用。Zenuto 等［34］利用DNA 指紋圖譜在櫛鼠的兩個不同種群中研究其交配特征時得出，櫛鼠種群中存在一雄多雌的交配現(xiàn)象，在不同的種群中進(jìn)行擴(kuò)散的個體類型不同，在Zenuto 等［34］的研究中，應(yīng)用分子方法和物種個體的形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行綜合分析表明，種群擴(kuò)散中亞成體的擴(kuò)散最為常見［35］。但對櫛鼠科的另一個種(C.flamarioni)研究發(fā)現(xiàn)，出生地的小尺度范圍內(nèi)也有幼體在擴(kuò)散［28］。

3 線粒體基因在地下嚙齒類動物擴(kuò)散中的應(yīng)用

3.1 線粒體細(xì)胞色素b 基因

線粒體基因研究主要分為線粒體細(xì)胞色素b 基因和線粒體DNA 研究兩類。細(xì)胞色素b(Cytochrome b，cyt-b)基因也是線粒體中結(jié)構(gòu)和功能被了解得較為透徹的基因，進(jìn)化速度適中，因而將其作為分子系統(tǒng)學(xué)研究的分子標(biāo)記［36］。哺乳動物中的線粒體cyt-b 是構(gòu)成線粒體氧化磷酸化系統(tǒng)復(fù)合體Ⅲ的蛋白質(zhì)之一［37］。線粒體細(xì)胞色素b 基因有以下幾個特點:1)是蛋白質(zhì)編碼基因，而且比線粒體rDNA 和非編碼區(qū)更易于排序;2)在一定的進(jìn)化尺度內(nèi)該基因不受飽和效應(yīng)的影響，所提供的系統(tǒng)發(fā)育信息和遺傳分化水平適用于物種種間或?qū)匍g差異的分析;3)與大多分子系統(tǒng)相比較，細(xì)胞色素b 基因蛋白質(zhì)產(chǎn)物的生化機(jī)理易與其基因的進(jìn)化動力學(xué)相聯(lián)系［38］。因此，在系統(tǒng)發(fā)育中cyt-b 是一個十分有效的標(biāo)記，并得到廣泛的應(yīng)用［39-41］。

Tang 等［42］在青藏高原相距27 ～600 km 的12個高原鼢鼠群體中分別采樣，分析線粒體細(xì)胞色素b 基因序列，發(fā)現(xiàn)高原鼢鼠種群中發(fā)生了變異且部分母系基因流受到地理區(qū)域條件的限制，證明限制性基因流成為各地理種群分化的主要原因，進(jìn)化分析和類聚分析都表明該種群的種群結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)發(fā)育是不連續(xù)的。此外根據(jù)線粒體細(xì)胞色素b 和D-loop區(qū)直接測序的序列數(shù)據(jù)，運用種群遺傳學(xué)和分子系統(tǒng)地理學(xué)方法，分析187 只高原鼢鼠在DNA 水平上的遺傳多樣性、系統(tǒng)地理結(jié)構(gòu)及種群歷史動態(tài)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，顯著性的多態(tài)性變異比例主要分布在群體間(76. 3% ～88. 7%)和 群 內(nèi) 種 群 間(8. 2% ～20.7%)，說明高原鼢鼠存在顯著的系統(tǒng)地理結(jié)構(gòu)與遺傳分化水平。而在不同的地域性分支間雙向基因流水平很低(0.03 ～0.12)，表現(xiàn)為各分支間平均每一百代有3 ～12 只高原鼢鼠的交換，可能這種限制性的基因流與高原鼢鼠特有的地下挖掘取食行為有關(guān)。而不同地域性分支的分歧時間正好是第四紀(jì)冰期的頻發(fā)期。物種內(nèi)在生物學(xué)特性決定的限制性基因流與外在冰期產(chǎn)生的距離隔離、生境斑塊化，是造成高原鼢鼠地域性種群分化及現(xiàn)有系統(tǒng)地理格局的主要原因［43］。在第四紀(jì)地殼運動和冰川作用后，高原鼢鼠的地理分布區(qū)不斷提高，而隨后其種群沒有往低海拔處遷移或擴(kuò)散［44］。

國外有利用線粒體細(xì)胞色素b 和rRNA 序列相結(jié)合的方法來研究種群在空間大尺度范圍的擴(kuò)散情況。Van Daele 等［45］和Brown 等［46］在非洲濱鼠科的系統(tǒng)地理學(xué)的動態(tài)研究中，通過對濱鼠科線粒體12S rRNA 和細(xì)胞色素b 的序列分析，提出了在整個種群的擴(kuò)散過程中河流、裂谷、火山等對其擴(kuò)散的阻礙作用，以及影響種群擴(kuò)散的因素［45-46］。棲息地之間的自然隔離對種群擴(kuò)散有阻礙作用，而棲息地自身地形特點對種群擴(kuò)散和生存有無影響?為了驗證在孤立或半孤立棲息地聚居的櫛鼠(C. lami)種群受到滅絕的風(fēng)險會更大，Lopes 和De Freitas［47］利用線粒體DNA(D-loop)、微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行了研究，結(jié)果在試驗范圍內(nèi)兩個同類群體內(nèi)得到了證實，生活在此類棲息地的種群其遺傳結(jié)構(gòu)比較脆弱，種群棲息地特點(孤立或半孤立棲息地)對個體擴(kuò)散和生存的影響較大。

3.2 線粒體D-loop 序列

線粒體DNA 具有分子量小、結(jié)構(gòu)簡單、無重組、母系遺傳、一級結(jié)構(gòu)進(jìn)化速度快等特點，它是親緣關(guān)系較近的物種間和種內(nèi)居群間遺傳多樣性、遺傳分化、起源進(jìn)化研究等的適宜遺傳標(biāo)記，其中控制區(qū)(D-loop)為非編碼區(qū)，因缺乏編碼的選擇壓力而比其他基因的進(jìn)化速率更快［48］，且有最大的變異速率，突變固定后所形成的多態(tài)位點可以反映出群體的遺傳特征、種群分化以及種屬關(guān)系等，作為種群遺傳研究中的理想標(biāo)記基因而被廣泛應(yīng)用［49-52］。

利用線粒體DNA 部分序列［序列長624 ～626 bp，包括控制區(qū)3'端序列(530 bp)、tRNAphe(67 bp)、部分12S rRNA 5'端序列(29 bp)］對高原鼢鼠種群進(jìn)行距離隔離研究，發(fā)現(xiàn)高原鼢鼠的遺傳分化與地理距離呈極顯著正相關(guān)(P ＜0.01)，同時研究表明，當(dāng)?shù)乩砭嚯x超過100 km 時，遺傳距離趨于穩(wěn)定。因此，在不排除地理屏障的情況下，高原鼢鼠種群間地理隔離距離為100 km 左右［53-54］。通過分析線粒體DNA(D-loop)和ND4 基因測序得出，在高原鼢鼠中有較大的序列變異和單倍型多樣性，種群間比種群內(nèi)有更大的遺傳距離［55］。

在用線粒體D-loop 序列研究南櫛鼠的地理遺傳結(jié)構(gòu)時發(fā)現(xiàn)，種群遺傳分化并不符合簡單的距離隔離模型，基因流和當(dāng)?shù)剡z傳漂變間可能缺乏平衡。對這種分布不匹配的情況分析得知，基因譜系的星型拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)模式與種群近期的擴(kuò)張活動相符合，但是不能排除另一種基于偏離嚴(yán)格中立線粒體DNA 的解釋［56］。此外，在分析南櫛鼠種群的地理親緣關(guān)系和群體遺傳結(jié)構(gòu)時發(fā)現(xiàn)，種群間的地理距離是造成種群遺傳分化的主要原因［57］。利用線粒體DNA 母性遺傳確定了裸鼢鼠屬(Heterocephalus)和平齒囊鼠屬(Thomomys)兩個種群內(nèi)雜交的偏母性遺傳現(xiàn)象［58-59］，這體現(xiàn)了線粒體基因的遺傳特點。

4 小結(jié)

目前，微衛(wèi)星技術(shù)、DNA 指紋技術(shù)、線粒體基因這3 種不同的分子標(biāo)記技術(shù)在地下嚙齒類研究中都有應(yīng)用，但各具特點(表1)。

利用CNKI 和Google 等搜索引擎，對1980—2014 年利用分子標(biāo)記方法研究不同地下嚙齒類動物擴(kuò)散的相關(guān)文章數(shù)量進(jìn)行了統(tǒng)計(圖1)，結(jié)果顯示，利用分子生物學(xué)技術(shù)在櫛鼠科動物方面的研究較多，主要集中在棲息地選擇、偏性擴(kuò)散等方面。具體到嚙齒類動物，利用分子生物技術(shù)研究高原鼢鼠的文章相對較少，而且主要集中在系統(tǒng)進(jìn)化方面。因此，借鑒有關(guān)櫛鼠科動物擴(kuò)散方面的研究，利用分子生物學(xué)技術(shù)開展對高原鼢鼠的擴(kuò)散研究是對嚙齒類動物研究有力的補(bǔ)充。

表1 不同分子標(biāo)記技術(shù)主要特點Table 1 The main features of different molecular marker technology

圖1 不同地下嚙齒類相關(guān)文章數(shù)量Fig.1 The related papers of different subterranean rodent species

對不同年代，利用分子生物學(xué)方法研究地下嚙齒類動物擴(kuò)散的相關(guān)文章數(shù)量進(jìn)行了統(tǒng)計(圖2)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在2000 -2010 年的10 年間，相比20 世紀(jì)90 年代發(fā)表的文章要多。從2010 -2014 年，盡管只有4 年，但是在這方面發(fā)表文章的勢頭很好，也體現(xiàn)出了分子生物學(xué)技術(shù)在此領(lǐng)域的應(yīng)用不斷地增加。

圖2 不同年限地下嚙齒類相關(guān)文章數(shù)量Fig.2 The related papers of subterranean rodent species in different stages

盡管，地下棲息嚙齒動物獨特的生活習(xí)性增加了擴(kuò)散研究的難度。但是，個體標(biāo)記研究缺乏大范圍和大尺度的代表性，運用分子標(biāo)記技術(shù)可以解決這些問題。但是所有的技術(shù)不一定都是完美的。不同的分子標(biāo)記方法也有一定的缺陷，在研究種群擴(kuò)散規(guī)模和擴(kuò)散速度時其基因結(jié)構(gòu)和數(shù)量統(tǒng)計是密切聯(lián)系的［60］。在試驗過程中選擇可供分析的位點數(shù)量、分子標(biāo)記的多態(tài)性水平都是影響試驗的因素［61］。根據(jù)各種不同分子標(biāo)記技術(shù)的特點，選擇恰當(dāng)可行的方法來研究動物的擴(kuò)散機(jī)理。當(dāng)然每一種分子標(biāo)記都有其自身的特點，微衛(wèi)星具有高度多態(tài)性，且分布均勻、含量高，但對于核苷酸數(shù)據(jù)庫中沒有的微衛(wèi)星序列，其主要問題是位點的準(zhǔn)確開發(fā)和側(cè)旁序列的測定［62］，與其他兩種分子標(biāo)記相比較，對種群遺傳結(jié)構(gòu)的分析效果良好，所以也成為研究高原鼢鼠擴(kuò)散機(jī)理的首選分子標(biāo)記方法。在采用DNA 指紋技術(shù)確定種群個體間的關(guān)系時，需要結(jié)合其他生態(tài)學(xué)方面的因素來綜合考慮，充分發(fā)揮DNA指紋技術(shù)的作用和優(yōu)勢［63］，用DNA 指紋技術(shù)研究種群遺傳多樣性操作過程較復(fù)雜。DNA 序列分析能充分地揭示DNA 多態(tài)性，線粒體DNA 在遺傳上具有自主性、分子量小、母系遺傳等優(yōu)點，因而在分析種群的遺傳變異、確定種內(nèi)或種間的系統(tǒng)發(fā)生和進(jìn)化等方面得到了廣泛的應(yīng)用。但是線粒體DNA序列分析也存在自身的缺陷，在種群學(xué)的研究中需要對多基因進(jìn)行測序，時間長，費用高，相比較而言在種群遺傳結(jié)構(gòu)研究中較繁瑣，因而其可行性不是很高［64］。

5 展望

地下嚙齒類動物的擴(kuò)散研究由于其地下棲息習(xí)性難于被觀察而面臨很多挑戰(zhàn)。但是隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，將分子生物學(xué)和其他生態(tài)學(xué)方法結(jié)合，已經(jīng)應(yīng)用到地下嚙齒動物的研究中［9］。微衛(wèi)星標(biāo)記在行為學(xué)上的應(yīng)用及現(xiàn)代遺傳數(shù)據(jù)分析方法，為研究難以直接觀察的動物類群的擴(kuò)散機(jī)制及影響動物擴(kuò)散的因素提供了先進(jìn)的研究手段［24-26］。國外已經(jīng)將微衛(wèi)星標(biāo)記的方法應(yīng)用到擴(kuò)散距離、擴(kuò)散鼠種的親緣關(guān)系等研究中［9，30］。隨著分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，試驗成本不斷降低，更多分析方法的使用將大大提高試驗數(shù)據(jù)的可靠性。

高原鼢鼠是我國特有的地下嚙齒動物之一，屬于倉鼠科(Cricetidae)鼢鼠屬，廣泛分布于青藏高原東部海拔2 800 ～4 200 m 的地區(qū)，其種群活動受地上環(huán)境的影響較小。穩(wěn)定的地下生活環(huán)境和有限的遷移能力造成該物種的變異性較小，進(jìn)化潛力較弱，分布區(qū)域有限，從而也成為青藏高原的特有種之一［65］。作為小型地下哺乳類動物，對生態(tài)系統(tǒng)有著重要的意義。近年來，受人為因素和氣候變化的影響，青藏高原部分地區(qū)高原鼢鼠種群密度上升，打破了原來處于動態(tài)的草“鼠”平衡，造成草原鼠害加劇，導(dǎo)致草地生產(chǎn)力下降［66-67］。目前，高原鼢鼠危害區(qū)域呈擴(kuò)大和蔓延趨勢，與高原鼢鼠的擴(kuò)散行為密切相關(guān)。因此，研究高原鼢鼠種群擴(kuò)散，發(fā)現(xiàn)高原鼢鼠的擴(kuò)散機(jī)理，就有可能針對性地通過切斷或保護(hù)其擴(kuò)散通道達(dá)到控制草原鼠害或保護(hù)生物多樣性的目的，對青藏高原生態(tài)保護(hù)有著重要的意義。目前，對高原鼢鼠種群擴(kuò)散的研究不多，并不清楚高原鼢鼠種群的擴(kuò)散機(jī)制，而利用分子標(biāo)記的方法研究其擴(kuò)散的報道就更少。本研究提到的3 種分子標(biāo)記中，微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)有獨特的優(yōu)越性和應(yīng)用前景，也是研究高原鼢鼠種群擴(kuò)散的首選方法。微衛(wèi)星位點的開發(fā)和篩選是重點也是難點，目前已有開發(fā)了高原鼢鼠的微衛(wèi)星位點并設(shè)計引物進(jìn)行更進(jìn)一步的研究［68］，在后期的試驗中希望篩選出適合的引物并進(jìn)行擴(kuò)增，獲得適用于該種群遺傳多樣性分析的位點，為試驗深入進(jìn)行奠定良好的基礎(chǔ)。同時應(yīng)結(jié)合無線電追蹤技術(shù)，合理設(shè)計試驗，研究高原鼢鼠的擴(kuò)散機(jī)理、特點和偏性遺傳現(xiàn)象，填補(bǔ)有關(guān)高原鼢鼠擴(kuò)散方面研究的不足。

［1］ Hansen T F，Stensenth N C，Hentonen H.Multiannual vole cycle and population regulation during long winters:An analysis of seasonal densify dependence［J］.American Naturalist，1999，154(2):131-139.

［2］ Waser P M. Patterns and consequences of dispersal in gregarious carnivores［J］. Carnivore Behavior，Ecology and Evolution，1996，2:267-295.

［3］ Hanski I，Oscar E，Gaggiotti O E.Ecology，Genetics and Evolution of Metapopulations［M］.Pittsburgh，Pennsylvania:Academic Press，2004:337-366.

［4］ Eleanor K S，James L P. Genetic Structure and The Geography of Speciation in Subterranean Rodents:Opportunities and Constraints for Evolutionary Diversification［M］.Chicago，Illinois:University of Chicago Press，2000:301-331.

［5］ Ran N.The challenges of studying dispersal［J］.Trends in Ecology ＆ Evolution，2001，16(9):481-483.

［6］ 王程亮，齊曉光，郗文忠，朱紫瑞，邢連喜，李保國. 非人靈長類個體的遷移與擴(kuò)散［J］. 人類學(xué)學(xué)報，2008，27(3):256-263.

［7］ Zhang Y，Liu J.Effects of plateau zokors (Myospalax fontanierii)on plant community and soil in an alpine meadow［J］.Journal of Mammalogy，2003，84(2):644-651.

［8］ 王繼成，張澤鈞.食肉動物的擴(kuò)散模式、后果及對大熊貓生態(tài)學(xué)研究的啟示［J］.西華師范大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2012，31(4):323-329.

［9］ Mora M S，Mapelli F J，Gaggiotti O E，Kittlein M J，Lessa E P.Dispersal and population structure at different spatial scales in the subterranean rodent (Ctenomys australis)［J］.BMC genetics，2010，11(9):1-14.

［10］ Reeve H K，Westneat D F，Noon W A，Sherman P W，Aquadro C F.DNA“fingerprinting”reveals high levels of inbreeding in colonies of the eusocial naked mole-rat［J］.Proceedings of the National Academy of Sciences，1990，87(7):2496-2500.

［11］ McLeish M J，Chapman T W，Crespi B J.Inbreeding ancestors:The role of sibmating in the social evolution of gall thrips［J］.Journal of Heredity，2006，97(1):31-38.

［12］ Dobson F S.Measures of gene flow in the Columbian ground squirrel［J］.Oecologia，1994，100(1-2):190-195.

［13］ Horn P L，Rafalski J A，Whitehead P J.Molecular genetic (RAPD)analysis of breeding Magpie Geese［J］.The Auk，1996，113(3):552-557.

［14］ 唐利洲，于龍，王俊杰，朱磊，丁偉，蘇建平.高原鼢鼠種群間基因流研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010(10):5123-5124.

［15］ 王永模，沈佐銳，高靈旺.微衛(wèi)星標(biāo)記及其在蚜蟲種群生物學(xué)研究中的應(yīng)用［J］.昆蟲學(xué)報，2007，50(6):621-627.

［16］ Zhao J L，Cao Y，Li S F，Li J L，Deng Y F，Lu G O.Population genetic structure and evolutionary history of grass carp Ctenopharyngodon idella in the Yangtze River［J］.China，Environmental Biology Fishs，2011，90(1):85-93.

［17］ Xu K F，Li Q，Kong L F，Yu R H.A first-generation genetic map of the Japanese scallop Patinopecten yessoensis-based AFLP and microsatellite markers［J］.Aquaculture Research，2008，40(1):35-43.

［18］ Sugaya T，Ikeda M，Mori H，Taniguchi N.Inheritance mode of microsatellite DNA markers and their use for kinship estimation in kuruma prawn Penaeus japonicus［J］.Fisheries Science，2002，68(2):299-305.

［19］ 顧穎，李超，魯翠云，鄭先虎. 俞菊華，孫效文. 建鯉(Cyprinus carpio var. Jian)微衛(wèi)星DNA 親權(quán)鑒定［J］. 遺傳，2012，34(11):1447-1455.

［20］ Sprecher C J，Puers C，Lins A M，Schumm J W.General approach to analysis of polymorphic short tandem repeat loci［J］.Biotechniques，1996，20(2):266-277.

［21］ 孫效文，張曉鋒，趙瑩瑩，張研，賈智英，常玉梅，梁利群.水產(chǎn)生物微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)研究進(jìn)展及其應(yīng)用［J］.中國水產(chǎn)科學(xué)，2008，15(4):689-703.

［22］ 宋春妮，李健，劉萍，陳萍，高保全.日本蟳4 野生群體遺傳多樣性的微衛(wèi)星分析［J］.水產(chǎn)學(xué)報，2011，35(7):985-991.

［23］ Heckel G，Burri R，F(xiàn)ink S，Desmet J F，Excoffier L.Genetic structure and colonization processes in European populations of the common vole［J］.Microtus arvalis Evolution，2005，59(10):2231-2242.

［24］ Clutton-Brock T H，Lukas D.The evolution of social philopatry and dispersal in female mammals［J］.Molecular Ecology，2012，21(3):472-492.

［25］ Solmsen N，Johannesen J，Schradin C.Highly asymmetric fine-scale genetic structure between sexes of African striped mice and indication for condition dependent alternative male dispersal tactics［J］.Molecular Ecology，2011，20(8):1624-1634.

［26］ Messier G D，Garant D，Bergeron P，Reale D.Environmental conditions affect spatial genetic structures and dispersal patterns in a solitary rodent［J］.Molecular Ecology，2012，21(21):5363-5373.

［27］ Cutrera A P，Lacey E A，Busch C.Genetic structure in a solitary rodent (Ctenomys talarum):Implications for kinship and dispersal［J］.Molecular Ecology，2005，14(8):2511-2523.

［28］ Fernández-Stolz G P，Stolz J F B，F(xiàn)reitas T R O.Bottlenecks and dispersal in the tuco-tuco das dunas，Ctenomys flamarioni (rodentia:Ctenomyidae)［J］.Journal of Mammalogy，2007，88(4):935-945.

［29］ Mapelli F J，Mora M S，Mirol P M.Population structure and landscape genetics in the endangered subterranean rodent Ctenomys porteousi［J］.Conservation Genetics，2012，13(1):165-181.

［30］ Patzenhauerová H，Bryja J，ˉSumbera R.Kinship structure and mating system in a solitary subterranean rodent［J］.Behavioral Ecology and Sociobiology，2010，64(5):757-767.

［31］ 茆達(dá)干，楊利國，姜勛平.DNA 指紋技術(shù)及其在奶牛上的應(yīng)用［J］.中國奶牛，2002(1):32-35.

［32］ 李長有.DNA 指紋技術(shù)的研究進(jìn)展及應(yīng)用［J］.吉林師范大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2004，25(2):56-58.

［33］ 李鐘淑，金粉玉，王士勇，趙鳳艷，方南洙.DNA 指紋技術(shù)在動物親子鑒定中的應(yīng)用［J］.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報，2003，25(2):131-148.

［34］ Zenuto R R，Lacey E A，Busch C.DNA fingerprinting reveals polygyny in the subterranean rodent (Ctenomys talarum)［J］.Molecular Ecology，1999，8(9):1529-1532.

［35］ Zenuto R R，Busch C.Population biology of the subterranean rodent Ctenomys (tuco-tuco)in a coastal dune-field in Argentina［J］.Zeitschrift Fur S?ugetierkunde，1998，63:357-367.

［36］ Farias I P，Ortl G，Sampaio I.The Cytochrome b Gene as a phylogenetic marker:The limits of resolution for analyzing relationships among cichlid fishes［J］.Journal of Molecular Evolution，2001，53(2):89-103.

［37］ Hatefi Y.The mitochondrial electron transport and oxidative phosphorylation system［J］.Annual Review of Biochemistry，1985，54(1):1015-1069.

［38］ Irwin D M，Kocher T D，Wilson A C.Evolution of the cytochromeb gene of mammals［J］.Journal of Molecular Evolution，1991，32(2):128-144.

［39］ Zhang Y，Ryder O A.Phylogenetic relationships of bears (the Ursidae)inferred from mitochondrial DNA sequences［J］.Molecular Phylogenetics and Evolution，1994，3(4):351-359.

［40］ Yoder A D，Vilgalys R，Ruvolo M.Molecular evolutionary dynamics of cytochrome b in strepsirrhine primates:The phylogenetic significance of third-position transversions［J］.Molecular Biology and Evolution，1996，13(10):1339-1350.

［41］ 陳藝燕，章群，任崗，錢開誠，陳迪，許忠能.10 種石斑魚系統(tǒng)發(fā)育的線粒體細(xì)胞色素b 基因序列分析［J］. 海洋科學(xué)，2006，30(6):12-15.

［42］ Tang L Z，Zhang T Z，Lin G H，Su J P.Phylogenetic discontinuity of Plateau Zokor(Myospalax Baileyi Thomas)populations in Qinghai-Tibetan Plateau［J］.Polish Journal of Ecology，2010，58(1):167-176.

［43］ 唐利洲.高原鼢鼠(Myospalax baileyi)分子系統(tǒng)地理學(xué)與形態(tài)變異研究［D］. 西寧:中國科學(xué)院西北高原生物研究所，2009.

［44］ Tang L Z，Wang L Y，Cai Z Y，Zhang T Z，Ci H X，Lin G H，Su J P，Liu J Q.Allopatric divergence and phylogeographic structure of the plateau zokor (Eospalax baileyi)，a fossorial rodent endemic to the Qinghai-Tibetan Plateau［J］.Journal of Biogeography，2010，37(4):657-668.

［45］ Van Daele P，Verheyen E，Corkery I，Adriaens D.Trends in skull morphology in relation to differential molecular evolution in African mole-rats of the chromosomally hyperdivers genus Fukomys (Bathyergidae，Rodentia)from the Zambezian region［J］.Mammal，2006(suppl):143.

［46］ Brown G G，Gadaleta G，Pepe G，Saccone C，SbisA E.Structural conservation and variation in the D-loop-containing region of vertebrate mitochondrial DNA［J］.Journal of Molecular Biology，1986，192(3):503-511.

［47］ Lopes C M，De Freitas T R O.Human impact in naturally patched small populations:Genetic structure and conservation of the burrowing rodent，tuco-tuco(Ctenomys lami)［J］.Journal of Heredity，2012，103(5):672-681.

［48］ 黃原.分子系統(tǒng)學(xué):原理、方法及應(yīng)用［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，1998:193-200.

［49］ Avise J C.Phylogeography:The History and Formation of Species［M］.London:Harvard University Press，2000:9-32.

［50］ 牛素芳，蘇永全，王軍，張麗艷，曾華嵩，張曼.福建近海竹莢魚線粒體DNA 控制區(qū)和細(xì)胞色素b 遺傳多態(tài)性［J］.中國水產(chǎn)科學(xué)，2011，18(1):66-74.

［51］ Avise J C.Phylogeography:The History and Formation of Species［M］.London:Harvard University Press，2000:1-447.

［52］ 成述儒，韓建林，Olivier H，羅玉柱. 中國綿羊群體mtDNA D-loop 的遺傳多樣性分析［J］. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2005，40(4):440-447.

［53］ 蔡振媛，張同作，慈海鑫，唐利洲，連新明，劉建全，蘇建平.高原鼢鼠線粒體譜系地理學(xué)和遺傳多樣性［J］.獸類學(xué)報，2007，27(2):130-137.

［54］ Bohonak A J. IBD (isolation by distance):A program for analyses of isolation by distance［J］. Journal of Heredity，2002，93(2):153-154.

［55］ Su J H，Wang J，Liu R T，Hua L M，Wu J P，Liu F Y.Species validities of zokors (Mysopalacinae)inferred from mtDNA sequences variations［J］.Acta Agrestia Sinica，2011，19:694-698.

［56］ Mora M S，Lessa E P，Kittlein M J，Vassallo A I. Phylogeography of the subterranean rodent ctenomys australis in sand-dune habitats:Evidence of population expansion［J］.Journal of Mammalogy，2006，87(6):1192-1203.

［57］ Mora M S，Cutrera A P，Lessa E P，Vassallo A I，D’Anatro A，Mapelli F J.Phylogeography and population genetic structure of the Talas tuco-tuco (Ctenomys talarum):Integrating demographic and habitat histories［J］. Journal of Mammalogy，2013，94(2):459-476.

［58］ Faulkes C G，Abbott D H，O'brien H P，Lau L，Roy M R，Wayne R K，Bruford M W.Micro-and macrogeographical genetic structure of colonies of naked mole-rats Heterocephalus glaber［J］.Molecular Ecology，1997，6(7):615-628.

［59］ Patton J L，Smith M F. Molecular evidence for mating asymmetry and female choice in a pocket gopher (Thomomys)hybrid zone［J］.Molecular Ecology，1993，2(1):3-8.

［60］ Schweizer M，Excoffier L，Heckel G.Fine-scale genetic structure and dispersal in the common vole (Microtus arvalis)［J］.Molecular Ecology，2007，16(12):2463-2473.

［61］ Goudet J，Perrin N，Waser P.Tests for sex-biased dispersal using bi-parentally inherited genetic markers［J］.Molecular Ecology，2002，11(6):1103-1114.

［62］ 常玉梅，李紹戊，梁利群，孫效文.微衛(wèi)星標(biāo)記的制備策略［J］.中國生物工程雜志，2005(suppl):210-214.

［63］ 梁紅雁，王夢軍，鐘文勤.DNA 指紋圖譜技術(shù)在動物行為學(xué)研究上的應(yīng)用［J］.生態(tài)學(xué)報，2000，20(3):524-527.

［64］ 張軍麗，崢峰，鳴光，王伯蓀.植物種群研究中的分子標(biāo)記及其應(yīng)用［J］.應(yīng)用生態(tài)學(xué)報，2000，11(4):631-636.

［65］ 樊乃昌，施銀柱.中國鼢鼠(Eospalax)亞屬分類研究［J］.獸類學(xué)報，1982，2(2):183-196.

［66］ 孫飛達(dá)，龍瑞軍，郭正剛，劉偉，干友民，陳文業(yè).鼠類活動對高寒草甸植物群落及土壤環(huán)境的影響［J］.草業(yè)科學(xué)，2011，28(1):146-151.

［67］ 張德勇.高原鼢鼠的危害與防治［J］.四川畜牧獸醫(yī)，2011，38(7):42-43.

［68］ Su J H，Ji W H，Howitt R，Hua L M，Gleeson D.Novel microsatellite markers obtained from Gansu zokor (Eospalax cansus)and cross-species amplification in Plateau zokor (Eospalax baileyi)［J］.Biochemical Systematics and Ecology，2014，57:128-132.