癌組織中EpCAM、CD44v6的表達與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌遠處轉(zhuǎn)移及預后的關(guān)系

癌組織中EpCAM、CD44v6的表達與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌遠處轉(zhuǎn)移及預后的關(guān)系

陳金龍1，2，劉乃富1

(1山東省腫瘤醫(yī)院，濟南250117；2濟南大學·山東省醫(yī)學科學院醫(yī)學與生命科學學院)

摘要：目的探討癌組織中上皮細胞黏附分子(EpCAM)、CD44v6的表達與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌遠處轉(zhuǎn)移及預后的關(guān)系。方法病理檢查確診的早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者共118例，根據(jù)隨訪中是否發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移分為兩組：A組72例為無遠處轉(zhuǎn)移者，B組46例為有遠處轉(zhuǎn)移者；選取同期行診斷性刮宮或手術(shù)治療且術(shù)后病理檢查證實為正常子宮內(nèi)膜的患者30例作對照(C組)。取A、B兩組手術(shù)中切除的癌組織及C組手術(shù)中切除的正常子宮內(nèi)膜，采用免疫組化法檢測各種組織中的EpCAM、CD44v6，并進行分析。結(jié)果A組EpCAM陽性表達率為30.6%(22/72)、CD44v6陽性表達率為15.3%(11/72)，B組EpCAM陽性表達率為60.8%(28/46)、CD44v6陽性表達率為39.1%(18/46)，C組EpCAM陽性表達率為26.7%(8/30)、CD44v6陽性表達率為6.7%(2/30)；A組與B組及B組與C組EpCAM、CD44v6陽性表達率相比，P均<0.05；B組EpCAM陽性表達者的中位生存時間為35個月，陰性表達者為43個月，兩者相比，P<0.05，B組CD44v6陽性表達者的中位生存時間為38個月，陰性表達者為48個月，兩者相比，P均<0.05。結(jié)論 早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者癌組織中EpCAM、CD44v6陽性表達者容易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，生存時間較短。

關(guān)鍵詞：子宮內(nèi)膜癌；子宮內(nèi)膜腺癌；低危子宮內(nèi)膜腺癌；黏附分子；上皮細胞黏附分子；跨膜糖蛋白；腫瘤轉(zhuǎn)移；疾病預后

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.024

中圖分類號：R737.33文獻標志碼：B

收稿日期：(2015-08-14)

通信作者：劉乃富

早期低危子宮內(nèi)膜癌預后較好，一般術(shù)后無需輔助治療，但仍有部分患者術(shù)后發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，預后較差。尋找預測早期低危子宮內(nèi)膜癌未來發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移可能性的生物學指標成為近年來研究的熱點。上皮細胞黏附分子(EpCAM)和CD44v6在乳腺癌、結(jié)直腸癌及甲狀腺癌等腺癌組織中的表達變化及臨床意義已有文獻報道[1～3]。本研究采用免疫組化方法對早期低危子宮內(nèi)癌患者癌組織中的EpCAM、CD44v6進行了檢測，探討其表達變化與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌遠處轉(zhuǎn)移及預后的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料2000年1月～2010年12月于山東省腫瘤醫(yī)院接受全面分期手術(shù)治療的早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者共118例，按照隨訪中(隨訪至2014年12月，隨訪中的相關(guān)檢查包括婦科檢查、超聲、胸部X線片、陰道殘端細胞學檢查及血清CA125檢測等)是否發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移(發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移者FIGO分期均為Ⅳ期)分為兩組：A組72例為無遠處轉(zhuǎn)移者，B組46例為有遠處轉(zhuǎn)移者。納入標準：①初次治療；②根據(jù)FIGO制定的子宮內(nèi)膜癌病理分期標準分為ⅠA期；③年齡≤60歲；④病理類型為子宮內(nèi)膜樣腺癌，高分化、高中分化及中分化；⑤無脈管癌栓。排除標準：①未行全面分期手術(shù)治療；②術(shù)前行抗腫瘤治療(化療、放療、激素治療等)；③合并其他惡性腫瘤；④臨床資料不完整。選取同期行診斷性刮宮或手術(shù)治療且術(shù)后病理檢查證實為正常子宮內(nèi)膜的患者30例作對照(C組)。

1.2EpCAM、CD44v6檢測方法采用免疫組化SP法。對118例早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者的癌組織及C組的正常子宮內(nèi)膜組織進行石蠟包塊，4 μm厚連續(xù)切片，每例切4張，防脫片處理后分別進行HE染色和免疫組化染色。HE染色后由兩名病理醫(yī)師查看進一步確定診斷。免疫組化SP染色方法參照試劑盒相關(guān)說明書進行,主要操作步驟如下：將組織切片在二甲苯溶液、乙醇中脫蠟，蒸餾水洗凈；0.3%過氧化氫溶液室溫孵育封閉內(nèi)源性過氧化物酶，PBS洗凈；抗原修復液(枸椽酸緩沖液)中修復抗原，蒸餾水、PBS洗凈；滴加胎牛血清室溫孵育10 min，傾去血清，勿洗；滴加稀釋的一抗，置濕盒中4 ℃冰箱過夜(約12 h)，PBS沖洗；滴加二抗，恒溫培養(yǎng)箱中孵育30 min，PBS沖洗；滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37 ℃孵育，PBS沖洗；DAB顯色，蘇木素復染，流水沖洗，脫水，透明，封片。在高倍顯微鏡下觀察組織染色情況并進行照相。用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。EpCAM定位于細胞膜，呈棕黃色顆粒；CD44v6定位于細胞質(zhì)和細胞膜，呈棕黃色；細胞無著色或與背景顏色一致為陰性。免疫組化染色結(jié)果判定參照Form-witz 評分方法[2]：400倍鏡下連續(xù)觀察5個高倍視野，以陽性細胞數(shù)所占比例小于<20%為陰性、≥20%為陽性。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較用χ2檢驗、Fisher確切概率法，生存分析用Kaplan-Meier生存分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1各組EpCAM表達比較EpCAM的陽性表達率A組為30.6%(22/72)、B組為60.8%(28/46)、C組為26.7%(8/30)；A、B組相比，P<均0.05；A、C組相比，P>均0.05；B、C組相比，P<均0.05。

2.2各組CD44v6表達比較CD44v6的陽性表達率A組為15.3%(11/72)、B組為39.1%(18/46)、C組為6.7%(2/30)；A、B組相比，P<均0.05；A、C組相比，P>均0.05；B、C組相比，P<均0.05。

2.3B組EpCAM與CD44v6表達的相關(guān)性在B組中，EpCAM與CD44v6同時陽性表達者13例，EpCAM陽性表達、CD44v6陰性表達者15例，EpCAM陰性表達、CD44v6陽性表達者5例，EpCAM與CD44v6同時陰性表達者13例；EpCAM與CD44v6的表達有關(guān)(χ2=4.05，P<0.05)。

2.4EpCAM 表達與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者術(shù)后發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的關(guān)系B組EpCAM陽性表達者的術(shù)后中位生存時間為35個月、陰性表達者的中位生存時間為43個月，兩者相比，P<0.05。B組CD44v6陽性表達者的術(shù)后中位生存時間為38個月、陰性表達者的中位生存時間為40個月，兩者相比，P<0.05。

3討論

EpCAM是一種單次跨膜糖蛋白，由位于2p21染色體的腫瘤相關(guān)鈣信號轉(zhuǎn)導基因編碼，屬于黏附分子家族的單次跨膜Ⅰ型糖蛋白，幾乎表達于所有的腺癌組織中，多數(shù)定位在細胞與細胞之間的緊密連接處，其功能主要是參與調(diào)節(jié)細胞間黏附，介導信號轉(zhuǎn)導及細胞遷移、增殖、分化等[4]。Kurtz等[5，6]研究發(fā)現(xiàn)，EpCAM 可以通過參與β-連環(huán)蛋白依賴的Wnt 級聯(lián)反應激活C-myc 等原癌基因的表達而具有致癌作用，同時發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)EpCAM 蛋白的降解可激活EpCAM作為有絲分裂信號傳導器的功能等。Wnt信號傳導通路是一種多層次、多環(huán)節(jié)的復雜信號通路，該通路發(fā)生障礙與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[7]。Du等[8]的研究發(fā)現(xiàn)，EpCAM在胃癌轉(zhuǎn)移病灶中的陽性表達率明顯高于原發(fā)灶，而通過siRNA下調(diào) EpCAM的表達可以抑制胃癌細胞的侵襲和遷移能力，EpCAM可能在癌細胞的轉(zhuǎn)移過程中起到了促進作用。Kunavisarut等[9]研究發(fā)現(xiàn)，EpCAM多數(shù)位于細胞與細胞之間的緊密連接處，提高了癌細胞的轉(zhuǎn)移性。本研究發(fā)現(xiàn)，C組正常子宮內(nèi)膜組織中EpCAM陽性表達率僅為26.7%(8/30)，遠低于A、B組。B組即發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的早期低危子宮內(nèi)膜腺癌組織中EpCAM 的陽性表達率為60.8%(28/46)，明顯高于A組即無遠處轉(zhuǎn)移的早期低危子宮內(nèi)膜腺癌組的陽性表達率30.6%(22/72)，且其染色強度亦明顯高于A組。提示EpCAM可能是早期低危子宮內(nèi)膜癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)分子之一。

CD44家族作為一類細胞表面跨膜糖蛋白黏附分子，具有高度異質(zhì)性，其功能是通過與透明質(zhì)酸酶或膠原結(jié)合，在細胞與細胞、細胞與基質(zhì)之間的特異性黏附過程中發(fā)揮重要作用。CD44的表達由Wnt信號傳導通路調(diào)控，在β-連環(huán)蛋白/Tcf-4信號傳導通路控制下參與上皮細胞的增殖與更新[10]。根據(jù)CD44基因表達過程中剪切方式的不同, 可將其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物分為標準型CD44s和變異型CD44v。CD44v有多個亞型(v1～v6)，其中CD44v6表現(xiàn)出與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的密切相關(guān)關(guān)系，其主要在上皮源性的腫瘤細胞中表達,可通過影響腫瘤細胞的結(jié)構(gòu)和分布以及運動能力而促使細胞間黏附作用下降[11]。研究[12]發(fā)現(xiàn)，CD44v6的異常表達與許多人類惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移以及預后密切相關(guān)，甚至認為CD44v6可作為腫瘤獨立的預后判斷指標。本研究結(jié)果顯示，C組正常子宮內(nèi)膜組織中CD44v6陽性表達率為6.7%，遠低于A、B組。B組即發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌組織中CD44v6的陽性表達率為39.1%，明顯高于A組，染色強度亦明顯高于A組。提示CD44v6在早期子宮內(nèi)膜癌的遠處轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了作用。

EpCAM及CD44v6均屬于細胞黏附素家族，介導細胞間的相互黏附作用，促進癌細胞向基質(zhì)侵襲，從而影響癌細胞的遷移和轉(zhuǎn)移。目前尚未有證據(jù)表明二者之間在作用機制上存在明確的相關(guān)關(guān)系。但CD44家族中相關(guān)亞型CD44v4～v7與EpCAM直接相互作用，形成CD44v4～v7-EpCAM復合物，促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，EpCAM及CD44v6在早期低危子宮內(nèi)膜腺癌中的表達呈正相關(guān)，兩指標陽性表達的患者發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的幾率較大，提示EpCAM可能與CD44v6之間存在相互作用，共同促進腫瘤的轉(zhuǎn)移，但其具體作用機制有待進一步探究。

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