長(zhǎng)期免耕及常規(guī)耕作對(duì)土壤胡敏酸含量及其結(jié)構(gòu)的影響

范如芹， 羅 佳， 嚴(yán)少華， 楊學(xué)明， 張振華

(1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所，江蘇 南京210014;2.加拿大農(nóng)業(yè)與農(nóng)業(yè)食品部溫室與加工作物研究中心，安大略N0R 1G0)

土壤有機(jī)碳(Soil organic carbon，SOC)對(duì)土壤性質(zhì)和一系列土壤過程至關(guān)重要［1-3］，增加其含量不僅有助于維持土壤養(yǎng)分和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展，而且有利于降低土壤CO2排放，減緩溫室效應(yīng)［4］。在當(dāng)今全球氣候變化的大背景下，國(guó)際社會(huì)對(duì)農(nóng)業(yè)土壤固定大氣CO2日益關(guān)注，近年來關(guān)于農(nóng)業(yè)土壤有機(jī)碳含量及穩(wěn)定性的研究報(bào)道日漸增多，其中不同耕作方式下農(nóng)田土壤作為碳“源”或碳“匯”的問題是關(guān)注的焦點(diǎn)。傳統(tǒng)耕作(Conventional tillage，CT)方式下頻繁的土壤擾動(dòng)可致使土壤有機(jī)碳礦化或因土壤侵蝕而流失，最終導(dǎo)致農(nóng)田土壤成為大氣CO2的“源”［5］。20 世紀(jì)60 年代以來，保護(hù)性耕作因具有降低生產(chǎn)投入、保持水土、增加土壤肥力等優(yōu)勢(shì)而在世界許多地區(qū)陸續(xù)實(shí)施［6］。免耕(No tillage，NT)作為保護(hù)性耕作的極端形式，在CO2等溫室氣體含量不斷上升的背景下更是備受關(guān)注。研究結(jié)果表明，保護(hù)性耕作能夠促進(jìn)土壤有機(jī)碳固定，將CT 轉(zhuǎn)變?yōu)镹T 是增加農(nóng)業(yè)土壤有機(jī)碳的有效措施之一［7-8］。West 和Marland［9］對(duì)美國(guó)能源部的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析后指出，傳統(tǒng)耕作轉(zhuǎn)變?yōu)槊飧?，美?guó)的土壤固碳速率約為300 kg/(hm2·a)，C。Kern 和Johnson［10］指出，雖然由常規(guī)耕作轉(zhuǎn)變?yōu)槊飧⒉荒芄潭ㄗ銐蚨嗟奶紒淼窒I(yè)燃料燃燒釋放的碳量，但NT 的廣泛應(yīng)用將對(duì)緩解全球氣候變化起到非常重要的作用。然而，也有大量研究發(fā)現(xiàn)，NT 和CT 相比，并不能增加土壤有機(jī)碳固定［11-12］。NT 對(duì)土壤有機(jī)碳的影響機(jī)制復(fù)雜，其結(jié)果會(huì)隨耕作年限、土壤質(zhì)地、氣候條件等因子而變化。

另一方面，土壤有機(jī)碳的固定不僅包括其含量的增加，土壤有機(jī)碳質(zhì)量或穩(wěn)定性是至關(guān)重要的評(píng)價(jià)指標(biāo)?；钚缘耐寥烙袡C(jī)碳組分在土壤中穩(wěn)定性差、易礦化，且所占比例極低;腐殖質(zhì)則是土壤有機(jī)碳的最大組成部分，它的形成與轉(zhuǎn)化對(duì)土壤肥力、土壤固碳和環(huán)境解毒均有重要意義。其中，胡敏酸(Humic acid，HA)又是腐殖質(zhì)中最活躍的組分，對(duì)土壤結(jié)構(gòu)形成和土壤有機(jī)碳含量變化起重要作用［13］。國(guó)內(nèi)外學(xué)者大多針對(duì)不同施肥措施下胡敏酸的差異展開研究［14-16］，而對(duì)不同耕作管理方式引起的胡敏酸的變化研究還十分有限。呂貽忠等［17］研究發(fā)現(xiàn)翻耕、旋耕以及深松等耕作方式下胡敏酸分子結(jié)構(gòu)中各個(gè)基團(tuán)的含量存在差異。目前對(duì)長(zhǎng)期免耕下胡敏酸的含量和結(jié)構(gòu)特征還了解甚少，僅趙紅等［18］報(bào)道了在中國(guó)東北黑土上26 年的NT 試驗(yàn)對(duì)黑土胡敏酸含量及結(jié)構(gòu)的影響，而對(duì)于由NT 轉(zhuǎn)變?yōu)镃T 后胡敏酸的后續(xù)變化更是缺乏研究。

中紅外光譜(Mid-infrared spectroscopy，MIRS)技術(shù)是通過測(cè)量分子對(duì)紅外光吸收從而得到分子結(jié)構(gòu)信息的一種檢測(cè)方法，是土壤有機(jī)質(zhì)特征分析的一個(gè)重要工具。核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance，NMR)技術(shù)也是有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)研究中的重要研究手段，用MIRS 研究腐殖質(zhì)含氧功能團(tuán)特性優(yōu)于NMR 光譜，而研究腐殖質(zhì)結(jié)構(gòu)則往往需要借助NMR 技術(shù)［19］。目前國(guó)際上利用MIRS進(jìn)行農(nóng)業(yè)土壤有機(jī)質(zhì)性質(zhì)如土壤有機(jī)碳結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的研究是土壤學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)，在中國(guó)正處于剛剛起步且逐漸升溫階段。分析有機(jī)質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性最常應(yīng)用于土壤腐殖質(zhì)結(jié)構(gòu)特性的研究。González-Pérez 等［20］利用NMR 和MIRS 技術(shù)分析了灰化土剖面的胡敏酸的結(jié)構(gòu)特征，發(fā)現(xiàn)隨著土層深度的增加，烷基碳含量增加，而醛基碳、芳香碳和酚碳含量降低，說明微生物生物量的亞甲基逐漸富集。顧志忙等［21］對(duì)黑土、紅壤、黃棕壤等不同土壤類型中腐殖酸進(jìn)行了MIRS 分析，綜合比較了胡敏酸含量和腐殖化程度的差異。

本研究旨在綜合利用MINS 和NMR 技術(shù)研究土壤HA 含量及結(jié)構(gòu)對(duì)耕作方式改變的響應(yīng)，分析長(zhǎng)期免耕對(duì)土壤有機(jī)碳穩(wěn)定性的影響，揭示農(nóng)業(yè)管理措施轉(zhuǎn)變引起的土壤有機(jī)碳的變化機(jī)制，為客觀評(píng)判保護(hù)性耕作和促進(jìn)土壤有機(jī)碳固定提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)域與樣品采集

長(zhǎng)期耕作定位試驗(yàn)小區(qū)位于加拿大安大略省西南部的加拿大農(nóng)業(yè)部Eugene Whelan 實(shí)驗(yàn)站，土壤類型為Brookston 壤質(zhì)粘土，表層15 cm 土壤砂粒、粉粒和粘粒所占百分比含量分別為28%、35%和37%(美國(guó)制)，土壤pH 值介于6.1 ～6.5。因?yàn)楸韺油寥榔露刃∮?°，所以土壤侵蝕和表層土壤淋失在研究區(qū)可以忽略。耕作試驗(yàn)始于1983 年秋，每個(gè)小區(qū)長(zhǎng)35 m 寬12 m。耕作方式有免耕(NT83)和傳統(tǒng)耕作(CT83)，為研究耕作方式改變對(duì)土壤的影響，從1997 年起部分免耕小區(qū)改回傳統(tǒng)耕作(CT97)，部分傳統(tǒng)耕作小區(qū)改為免耕(NT97)。種植方式為玉米連作和玉米-大豆輪作。土壤樣品于2012 年秋采集于玉米-大豆輪作的玉米種植小區(qū)。采樣深度為土壤表層10 cm，每個(gè)耕作處理4 個(gè)重復(fù)。

1.2 胡敏酸(HA)提取與分析

1.2.1 胡敏酸提取純化 將風(fēng)干后的土壤樣品除去肉眼可見礫石等雜質(zhì)，取500 g 用蒸餾水除去水溶物和水浮物，用0.1 mol/L NaOH 和0.1 mol/L Na2P2O7混合液(pH=13)提取1 h，3 500 r/min離心15 min，反復(fù)提取3 次。向上述提取液中加入0.5 mol/L H2SO4調(diào)節(jié)pH 為1.0 ～1.5，沉淀即為胡敏酸。將分離得到的胡敏酸粗組分用HCl (1∶ 1)調(diào)到pH=7.0，高速離心(8 000 r/min，20 min)去除粘粒，反復(fù)溶解-沉淀2 次。然后將其放入半透膜中透析，2 ～3 h 換一次水，用AgNO3檢測(cè)至出現(xiàn)少量白色沉淀。再轉(zhuǎn)入電滲析儀中電滲析，至電流很小并陰極室無酚酞反應(yīng)為止。將純化完的樣品進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(50 ～60 ℃)至體積很小，轉(zhuǎn)入50 ml 塑料小燒杯中，用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥。

1.2.2 胡敏酸結(jié)構(gòu)特征分析 對(duì)提純的土壤胡敏酸組分進(jìn)行中紅外光譜和固體13C-NMR 核磁共振測(cè)試。紅外光譜儀器為傅立葉轉(zhuǎn)換紅外光譜儀(Bruker Optik GmbH，Ettlingen，Germany)。將樣品研磨至小于53 μm，裝入進(jìn)樣器并輕輕將表面壓平，每個(gè)樣品壓至相同程度。測(cè)定空白為KBr 壓片，利用儀器HTX 探測(cè)器測(cè)得樣品的MIR 光譜。掃描64 次，分辨率為2 cm-1，掃描波數(shù)范圍為500 ～4 000 cm-1。固體13C-NMR 光譜測(cè)定儀器為德國(guó)Bruker公司生產(chǎn)的AV 400 固體13C -NMR 波普儀，采用交叉極化-魔角旋轉(zhuǎn)(CP-MAS)技術(shù)，13C 的共振頻率為100.57 MHz，魔角自旋頻率為5 KHz，樣品的接觸時(shí)間為2ms，循環(huán)時(shí)間為5 s，數(shù)據(jù)點(diǎn)為2 048，參考標(biāo)準(zhǔn)為δDSS=0。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SAS 9. 0 (SAS Institute，Cary，NC)軟件LSD 顯著性差異檢驗(yàn)進(jìn)行均值比較和分析，用皮爾森(Pearson)相關(guān)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，采用Sigma-Plot 12.0 (Systat Software，Inc.，Chicago，IL，USA)軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 長(zhǎng)期免耕及常規(guī)耕作下胡敏酸碳(HA-C)和胡敏酸氮(HA-N)含量

由表1 可以看出，4 種耕作處理對(duì)胡敏酸含量以及胡敏酸中碳、氮的含量均產(chǎn)生了不同影響。其中胡敏酸含量在CT83 處理的土壤中為11.1 g/kg，顯著高于NT97 處理、NT83 處理和CT97 處理(P ＜0.05)，NT97 處理與CT97 處理沒有顯著差異，而NT83 處理的胡敏酸碳含量則顯著低于其他3 種耕作處理，比CT83 處理低23.3%，可見長(zhǎng)期免耕不利于胡敏酸的形成。不同耕作方式下土壤中胡敏酸碳含量與胡敏酸含量差異呈現(xiàn)類似趨勢(shì)，即HA-C 含量CT83 處理最高而NT83 處理最低，不同的是，NT83 處理的土壤中HA-C 含量和NT97 沒有顯著性差異(P ＞0.05);與CT83 處理相比，CT97 處理對(duì)HA-N 以及對(duì)胡敏酸中C 和N 百分含量均沒有產(chǎn)生明顯影響(P ＞0.05)，但顯著增加了胡敏酸及胡敏酸碳含量;而與NT83 處理相比，CT97 處理的土壤胡敏酸及其碳含量均顯著提高(P ＜0.05)。這與Martins 等［22］的研究結(jié)果一致。究其原因，一方面，免耕下每年大量秸稈還田，植物殘?bào)w歸還數(shù)量高于其代謝變化容量，可導(dǎo)致有機(jī)物質(zhì)的強(qiáng)新陳代謝［23］，從而使有機(jī)質(zhì)形成的脂肪化合物含量較高，半醌類自由基含量低，芳香碳含量低［24］。傳統(tǒng)耕作與之相反，作物秸稈收獲導(dǎo)致輸入土壤的新鮮物料減少，從而使得土壤的腐殖化程度較高;傳統(tǒng)耕作下頻繁的土壤擾動(dòng)加劇了活性有機(jī)碳的分解礦化［25］，也是造成其土壤腐殖化程度較高的重要原因之一。

表1 不同耕作方式下土壤胡敏酸及其碳、氮素含量Table 1 Content of humic acid and its carbon and nitrogen concentrations in soils under different tillage managements in southwestern Ontario，Canada

2.2 長(zhǎng)期免耕及常規(guī)耕作下胡敏酸結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性特征

從圖1 可知，不同耕作處理下土壤胡敏酸在3 300 cm-1(N-H 和O-H 伸縮振動(dòng))、2 930 cm-1(＞CH2和-CH3基團(tuán)中C-H 鍵反對(duì)稱伸縮振動(dòng))、2 610 cm-1(羧基的C-O 對(duì)稱伸縮振動(dòng))、1 725 cm-1(＞C=O 的伸縮振動(dòng))、1 270 cm-1(羧基中C-O 伸縮和O-H變形振動(dòng)及醚類芳基伸縮振動(dòng))以及830 cm-1(芳香C-H 平面彎曲振動(dòng))處的吸收峰明顯［26-28］，說明各耕作處理下土壤胡敏酸基本結(jié)構(gòu)較為一致。3 000 ～3 600 cm-1處的寬吸收帶面積表現(xiàn)為CT83與CT97 明顯大于NT97 與NT83，說明前者的聚合-OH含量高于后者［29］。2 610 cm-1、1 725 cm-1、1 270 cm-1以及830 cm-1處吸收帶也表現(xiàn)為隨耕作強(qiáng)度增加，吸收強(qiáng)度增加的趨勢(shì)(CT83 ＞CT97 ＞NT97 ＞NT83)，可見胡敏酸氧化程度和芳香度隨耕作擾動(dòng)強(qiáng)度的增加而增加，長(zhǎng)期免耕使土壤胡敏酸氧化度和芳香度趨于降低。呂貽忠等［17］通過黑土胡敏酸的紅外光譜分析結(jié)果表明，翻耕處理下黑土胡敏酸的芳香化程度高于保護(hù)性耕作，且保護(hù)性耕作下胡敏酸的脂肪性支鏈增加可改變腐殖酸親水性能，并指出土壤腐殖質(zhì)結(jié)構(gòu)的演變將對(duì)土壤肥力產(chǎn)生重要影響，有必要利用其他光譜手段更深入地揭示不同耕作措施對(duì)土壤腐殖質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響。

因此，為了更為精確地研究不同耕作方式對(duì)胡敏酸結(jié)構(gòu)特征的影響，我們借助13C-NMR 方法對(duì)其各官能團(tuán)吸收強(qiáng)度進(jìn)行了分析(圖2)。不同耕作處理下土壤胡敏酸的核磁共振譜圖可分為烷基碳(δ0-45)、甲氧基碳(δ45-65)、烷氧碳(δ65-90)、乙縮醛基碳(δ90-110)、芳香碳(δ110-145)、酚氧碳(δ145-160)和羧基碳(δ160-185)7 個(gè)共振區(qū)域，其中乙縮醛基碳(δ90-110)和酚氧碳(δ145-160)的共振信號(hào)相對(duì)不明顯。

圖1 不同耕作方式下土壤胡敏酸中紅外光譜Fig.1 MIR spectra of humic acid in soils under different tillage managements

圖2 長(zhǎng)期免耕和常規(guī)耕作下土壤胡敏酸的13C-NMR 譜圖Fig.2 13C-NMR spectra of HA in soils under long-term no tillage and conventional tillage

進(jìn)一步對(duì)各區(qū)域出現(xiàn)的位移信號(hào)進(jìn)行計(jì)算(表2)可知，NT97 處理和NT83 處理的土壤胡敏酸不同有機(jī)功能團(tuán)的相對(duì)含量大小為:烷基碳、甲氧基碳和烷氧基碳含量明顯高于乙縮醛基碳、芳香碳、酚氧碳和羧基碳。NT83 處理的烷基碳和甲氧基碳含量顯著高于CT97 處理和CT83 處理，其芳香碳和酚氧碳的含量則顯著低于CT97 處理和CT83 處理(P ＜0. 05)。NT83處理與NT97 處理土壤胡敏酸在烷基碳、羧基碳和乙縮醛基碳含量中表現(xiàn)出明顯差異。與NT83 相比，CT97 處理的土壤胡敏酸中除烷氧基碳外，其他官能團(tuán)含量均發(fā)生了顯著變化，脂肪族碳含量大幅度降低而芳香碳比例顯著增加。本研究結(jié)果不同于申艷［30］在中國(guó)東北黑土上的研究結(jié)果，其原因可能是其所研究的土壤為短期免耕，耕作方式對(duì)胡敏酸結(jié)構(gòu)造成的影響還沒有開始顯現(xiàn)。NT83、NT97、CT97 和CT83 下胡敏酸芳香度分別為32. 1%、36. 0%、46.1%和46.8%，即長(zhǎng)期免耕下胡敏酸芳香度顯著低于長(zhǎng)期傳統(tǒng)耕作，而脂化度則相反。這說明耕作擾動(dòng)加速了土壤腐殖質(zhì)的縮合和氧化，使土壤胡敏酸老化，結(jié)構(gòu)變得復(fù)雜，脂族性下降，芳香性增加，這與孫本華等［31］的研究結(jié)論一致。

表2 長(zhǎng)期免耕和常規(guī)耕作下土壤胡敏酸不同官能團(tuán)碳的相對(duì)含量Table 2 Relative contents of carbon functional groups of HA in soils under long-term no tillage and conventional tillage

NT83 中微生物分解后的產(chǎn)物(烷基碳和羧基碳)占37.2%，木質(zhì)素(芳香碳、酚基碳)占18.4%，碳水化合物(包括甲氧基碳、烷氧碳和乙縮醛基碳)占44.4%，可見土壤胡敏酸是以碳水化合物結(jié)構(gòu)為核心形成的。NT83、NT97、CT97 和CT83 處理下胡敏酸微生物分解產(chǎn)物含量分別為37.2%、22.9%、21.0 和20.9%，表明長(zhǎng)期免耕下微生物分解后的產(chǎn)物顯著高于傳統(tǒng)耕作，且隨耕作強(qiáng)度增加其含量逐漸降低，這說明長(zhǎng)期免耕下微生物活動(dòng)明顯比傳統(tǒng)耕作活躍，耕作擾動(dòng)降低了微生物的活性。NT83、NT97、CT97 和CT83 下胡敏酸木質(zhì)素含量所占的比例分別為18.4%、26.4%、31.6%和36.9%，可見隨著耕作強(qiáng)度的增加，微生物分解產(chǎn)物有向木質(zhì)素轉(zhuǎn)化的趨勢(shì)。

3 結(jié)論

耕作年限與耕作方式對(duì)土壤中胡敏酸及胡敏酸碳產(chǎn)生重要影響。隨著耕作強(qiáng)度或耕作年限的增加，土壤中胡敏酸及胡敏酸碳也增加，與NT83 相比，NT97 土壤胡敏酸含量顯著提高。與免耕相比，傳統(tǒng)耕作促進(jìn)了土壤腐殖化程度的提高。胡敏酸氧化程度和芳香度亦隨耕作擾動(dòng)強(qiáng)度的增加而增加，長(zhǎng)期免耕使土壤胡敏酸氧化度和芳香度趨于降低，免耕轉(zhuǎn)變?yōu)閭鹘y(tǒng)耕作后，胡敏酸氧化度和芳香度開始增加。土壤胡敏酸烷基碳和羧基碳含量隨免耕年限增長(zhǎng)而增加。長(zhǎng)期免耕下微生物分解后的產(chǎn)物顯著高于傳統(tǒng)耕作。以上結(jié)果說明，耕作擾動(dòng)提高了土壤的腐殖化程度，加速了土壤胡敏酸的縮合和氧化，使土壤胡敏酸老化，結(jié)構(gòu)趨于復(fù)雜，而免耕則有助于提高土壤微生物活性，并使土壤胡敏酸脂族性提高。

［1］ BERTOR C，ZAVATTARO L，SACCO D，et al. Soil organic matter dynamics and losses in manured maize-based forage systems［J］.European Journal of Agronomy，2009，30:177-186.

［2］ 高 楊，胡振琪，肖 武，等. 造林對(duì)土壤有機(jī)碳儲(chǔ)量的影響(綜述)［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42(5):301-305.

［3］ 滕維超，劉少軒，劉新亮，等.不同種植模式對(duì)油茶成林土壤有機(jī)碳及養(yǎng)分特征的影響［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41(5):323-326.

［4］ áLVARO-FUENTES J，CANTERO-MARTINEZ C，LóPEZ M V，et al. Soil aggregation and soil organic carbon stabilization:effects of management in Semiarid Mediterranean agroecosystems［J］. Soil Science Society of America Journal，2009，73:1519-1529.

［5］ BAYER C，MIELNICZUK J，AMADO T J C，et al. Organic matter storage in a sandy clay loam Acrisol affected by tillage and cropping systems in southern Brazil［J］. Soil and Tillage Research，2000，54:101-109.

［6］ SIX J，F(xiàn)ELLER C，DENEF K，et al. Soil organic matter，biota and aggregation in temperate and tropical soils:Effects of no-tillage［J］. Agronomy，2002，22:755-775.

［7］ BALOTA E L，COLOZZI F A，ANDRADE D S，et al. Long-term tillage and crop rotation effects on microbial biomass and C and N mineralization in a Brazilian Oxisol［J］. Soil and Tillage Research，2004，77:137-145.

［8］ JACOBS A，RAUBER R，LUDWIG B. Impact of reduced tillage on carbon and nitrogen storage of two Haplic Luvisols after 40 years［J］. Soil and Tillage Research，2009，102:158-164.

［9］ WEST T O，MARLAND G. A synthesis of carbon sequestration，carbon emissions，and net carbon flux in agriculture:Comparing tillage practices in the United States［J］. Agriculture，Ecosystems and Environment，2002，91:217-232.

［10］ KERN J S，JOHNSON M G. Conservation tillage impacts on national soil and atmospheric carbon levels［J］. Soil Science Society of America Journal，1993，57:200-210.

［11］ YANG X M，DRURY C F，REYNOLDS W D，et al. Impacts of long-term and recently imposed tillage practices on the vertical distribution of soil organic carbon［J］. Soil and Tillage Research，2008，100:120-124.

［12］ MARCH?O R L，BECQUER T，BRUNET D，et al. Carbon and nitrogen stocks in a Brazilian clayey Oxisol:13-year effects of integrated crop-livestock management systems［J］. Soil and Tillage Research，2009，103:442-450.

［13］ 龔 偉，顏曉元，王景燕，等.長(zhǎng)期施肥對(duì)小麥-玉米作物系統(tǒng)土壤腐殖質(zhì)組分碳和氮的影響［J］. 植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)，2009，15(6):1245-1252.

［14］ 竇 森，徐 冰，孫宏德. 黑土有機(jī)培肥與腐殖質(zhì)特性［J］. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，17(1):46-51.

［15］ 馬 力，楊林章，慈 恩，等.長(zhǎng)期施肥條件下水稻土腐殖質(zhì)組成及穩(wěn)定性碳同位素特性［J］. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2008，19(9):1951-1958.

［16］ FERRARI E，F(xiàn)RANCIOSO O，NARDI S，et al. DRIFT and HR MAS NMR characterization of humic substances from a soil treated with different organic and mineral fertilizers［J］.Journal of Molecular Structure，2011，998:216-224.

［17］ 呂貽忠，叢巍巍，廉曉娟. 不同耕作措施對(duì)黑土腐殖酸組成與紅外光譜特性的影響［J］. 光譜學(xué)與光譜分析，2009，29(10):2642-2645.

［18］ 趙 紅，鄭殷恬，呂貽忠，等.免耕與常規(guī)耕作下黑土腐殖酸含量與結(jié)構(gòu)的差異［J］.生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào)，2010，19(5):1238-1241.

［19］ 李學(xué)垣. 土壤化學(xué)［M］. 北京:高等教育出版社，2001:33-40.

［20］ GONZáLEZ-PéREZ M，MARTIN-NETO L，SAAB S C，et al.Characterization of humic acids from a Brazilian Oxisol under different tillage systems by EPR，13C-NMR，F(xiàn)TIR and fluorescence spectroscopy［J］. Geoderma，2008，118:181-190.

［21］ 顧志忙，王曉蓉，顧雪元，等.傅里葉變換紅外光譜和核磁共振法對(duì)土壤中腐殖酸的表征［J］. 分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào)，2000，28(3):314-317.

［22］ MARTINS T，SAAB S C，MILORI D M B P，et al. Soil organic matter humification under different tillage managements evaluated by Laser Induced Fluorescence (LIF)and C/N ratio［J］. Soil and Tillage Research，2011，111:231-235.

［23］ BAYER C，MARTIN-NETO L，MIELNICZUK J，et al. Tillage and cropping system effects on soil humic acid characteristics as determined by electron spin resonance and fluorescence spectroscopies［J］. Geoderma，2002，105(1-2):81-92.

［24］ PéREZ M G，MARTIN-NETO L，SAAB S C，et al. Characterization of humic acids from a Brazilian Oxisol under different tillage systems by EPR，13C NMR，F(xiàn)TIR and fluorescence spectroscopy［J］. Geoderma，2004，118(3-4):181-190.

［25］ PANDEY D，AGRAWAL M，BOHRA J S，et al. Recalcitrant and labile carbon pools in a sub-humid tropical soil under different tillage combinations:A case study of rice – wheat system［J］. Soil and Tillage Research，2014，143:116-122.

［26］ BAES A U，BLOOM P R. Diffuse reflectance and transmission Fourier transformation infrared (DRIFT)spectroscopy of humic and fulvic acids［J］. Soil Science Society of America Journal，1989，53:695-700.

［27］ STEVENSON F J. Humus chemistry-genesis，composition，reactions.［M］. New York :John Wiley ＆ Sons，1994.

［28］ RUMPEL C，JANIK L J，SKJEMSTAD J O，et al. Quantification of carbon derived from lignite in soils using mid-infrared spectroscopy and partial least squares［J］.Organic Geochemistry，2001，32:831-839.

［29］ 慈 恩，楊林章，程月琴，等. 耕作年限對(duì)水稻土有機(jī)碳分布和腐殖質(zhì)結(jié)構(gòu)特征的影響［J］. 土壤學(xué)報(bào)，2008，45(5):950-956.

［30］ 申 艷. 基于光譜技術(shù)的黑土有機(jī)碳及其組分的定量與結(jié)構(gòu)分析［D］. 長(zhǎng)春:中國(guó)科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，2010.

［31］ 孫本華，高明霞，呂家瓏，等.農(nóng)田生態(tài)條件對(duì)荒漠土養(yǎng)分及胡敏酸特性的影響［J］. 中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2007，15(3):18-20.