MicroRNA與非小細(xì)胞肺癌

【摘要】肺癌已經(jīng)成為全球范圍內(nèi)因癌癥導(dǎo)致死亡的首要原因，當(dāng)今由于缺乏有效的指導(dǎo)臨床診斷和治療的腫瘤分子標(biāo)志物，所以非小細(xì)胞肺癌患者的療效不佳。Micro RNA(以下簡(jiǎn)稱(chēng)miRNA)是真核生物中一類(lèi)長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的參與基因轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控的小分子非編碼RNA。miRNA在肺癌中發(fā)揮原癌基因及抑癌基因的作用，在肺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中均發(fā)揮著重要作用。miRNA不僅可以在石蠟包埋組織和體液中保持穩(wěn)定，而且在血清和血漿中也可以穩(wěn)定存在，這個(gè)特性使循環(huán)miRNA有望成為一種新型分子標(biāo)志物，為肺癌的早期分子診斷、預(yù)測(cè)預(yù)后及治療效果開(kāi)辟了一個(gè)新的研究領(lǐng)域。

基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(81101773)，北京市科委重大項(xiàng)目(D14110700020000)，首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)-臨床科研合作基金(14JL25)資助。This study was supported by National Natural Science Foundation of China(81101773); Major Project of Beijing Municipal Science and Technology Commission(D14110700020000); Capital Medical University Foundation-clinical Research Cooperation Fund(14JL25)．* Corresponding author，E-mail: xiuyizhi@ aliyun．com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間: 2015－07－16 22∶20網(wǎng)絡(luò)出版地址: http:∥www．cnki．net/kcms/detail/11．3662．r．20150716．2220．001．html

MicroRNA and non-small cell lung cancer

Tan Xiaogang，Zhi Xiuyi *

(Department of Thoracic Surgery，Xuanwu Hospital，Diagnostic and Treatment Centers of Lung Cancer，Capital Medical University，Beijing 100053，China)

【Abstract】Lung cancer has the highest world-wide cancer mortality．Current therapies for non-small cell lung cancer(NSCLC)patients are inefficient due to the lack of diagnostic and therapeutic markers．MicroRNAs(miRNAs)are a species of small non-coding singlestranded RNA of about 21 nucleotides that through partial sequence homology may interact with the 3’-untranslated region of target mRNA molecules．Recent evidence has shown that miRNA may function as tumor supressors or oncogenes，and alterations in miRNA expression may play a critical role in the initiation and progression of lung cancer．miRNAs are not only stable in paraffin embedded tissues and body fluids，but also in plasma and serum，which makes circulating miRNA a new kind of ideal biomarker that opens a new field for early molecular diagnosis of lung cancer，as well as for prediction of lung cancer survival and therapy．

【Key words】microRNA; circulating miRNA; lung cancer; diagnosis; prognosis; therapy

在世界范圍內(nèi)，肺癌是惡性腫瘤的首位死因，約占惡性腫瘤死因的30% ［1］。根據(jù)國(guó)家癌癥中心全國(guó)腫瘤防治研究辦公室 ［2］統(tǒng)計(jì)，我國(guó)年齡標(biāo)準(zhǔn)化后肺癌5年生存率僅為16．1%，由于缺乏有效的指導(dǎo)臨床早期診斷和治療的腫瘤分子標(biāo)志物，所以肺癌患者的療效不佳。Micro RNA(以下簡(jiǎn)稱(chēng)miRNA)是一類(lèi)廣泛存在于動(dòng)物、植物和病毒中的小相對(duì)分子質(zhì)量的非編碼蛋白的RNA分子。成熟的miRNA分子大小為20～25 nt ［3］。目前在人類(lèi)細(xì)胞中約存在1 000多種miRNA(其中經(jīng)過(guò)證實(shí)的約400多種)，其數(shù)量只占蛋白編碼基因的約1%，卻調(diào)節(jié)約30%的基因的表達(dá) ［4-5］。約50%的miRNA定位于在腫瘤中擴(kuò)增或缺失的染色體脆性位點(diǎn)或區(qū)域 ［6］。研究 ［6］證實(shí)miRNA表達(dá)譜與肺癌的類(lèi)型、進(jìn)展、患者生存率及預(yù)后等均有密切聯(lián)系。miRNA可以作為腫瘤抑制因子和癌變的促進(jìn)因子調(diào)控細(xì)胞增生、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成等。同一miRNA可影響多種蛋白編碼基因，而同一基因又可受多個(gè)miRNA影響。miRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及其作為腫瘤診斷、預(yù)后標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)的研究方興未艾。

1　miRNA的生成及作用機(jī)制

miRNA起源于細(xì)胞核內(nèi)，大部分miRNA的編碼基因定位于mRNA編碼基因的內(nèi)含子區(qū)，還有少數(shù)miR-NA的編碼區(qū)定位于遠(yuǎn)離mRNA編碼基因的DNA區(qū)域或mRNA編碼基因的3’UTR。miRNA的加工成熟分兩步，RNA聚合酶Ⅱ作用下轉(zhuǎn)錄出的pri-miRNA(primary-miRNA)長(zhǎng)約1 000 bp，具有5’帽結(jié)構(gòu)和3’polyA尾結(jié)構(gòu)以及中間的頸環(huán)結(jié)構(gòu) ［7］; Drosha酶(RNAseIII類(lèi)的核酸內(nèi)切酶)酶切作用后成為只有頸環(huán)結(jié)構(gòu)的premiRNA(長(zhǎng)約60 bp); exportin5/RanGTP將其運(yùn)輸出核后，細(xì)胞質(zhì)中的Dicer(RNAseⅢ類(lèi)的核酸內(nèi)切酶)將其酶切成miRNA: miRNA雙鏈結(jié)構(gòu)，經(jīng)進(jìn)一步的選擇機(jī)制解鏈釋放成熟miRNA，成熟miRNA進(jìn)入核蛋白體復(fù)合物miRNP發(fā)揮其調(diào)節(jié)靶基因活性 ［8-10］。在動(dòng)物細(xì)胞中成熟miRNA主要通過(guò)與下游靶基因的mRNA的3’UTR以非完全匹配方式結(jié)合，干擾和抑制mRNA的翻譯;另一種作用機(jī)制是將結(jié)合的mRNA運(yùn)輸至P-body，在其中脫腺苷酸化作用后，核酸酶對(duì)靶mRNA進(jìn)行酶切降解。

2　miRNA的鑒定

目前檢測(cè)miRNA的方法主要有RNA印跡(Northern blotting)，實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)，基因芯片技術(shù)和二代測(cè)序等。

2．1 Northern blotting分析方法

Northern印跡是研究miRNA表達(dá)水平最可靠的技術(shù)，它常用于在腫瘤細(xì)胞中檢測(cè)miRNA表達(dá)水平。從1993年開(kāi)始，Northern blotting就被用于miRNA基因的研究中，但Northern blotting操作繁瑣、樣本量需求大、靈敏度較低，不適用于大量臨床樣本的檢測(cè) ［11］。

2．2實(shí)時(shí)定量PCR

實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)可快速檢測(cè)出miRNA尤其是Pri-miRNA的表達(dá)。2005年RT-PCR被用于222種miRNAs在人類(lèi)腫瘤細(xì)胞系中的表達(dá)研究 ［12］。該方法可以定量分析前體miRNAs和非活化的、成熟的miRNAs，但是對(duì)于前體miRNAs和成熟miRNAs之間的表達(dá)關(guān)系，并不是很清楚。由于其具有較高的靈敏度、重復(fù)性和特異性，已成為現(xiàn)階段核酸分子定量檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)引物的不同，RT-PCR可以分為莖環(huán)法和加尾法，莖環(huán)法特異性較高 ［13］。

2．3 miRNA基因芯片

miRNA基因芯片技術(shù)是一種快速有效的檢測(cè)miRNA表達(dá)圖譜的方法，它能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)miRNA。芯片技術(shù)的應(yīng)用實(shí)現(xiàn)了在全基因組水平鑒定成熟miRNA的表達(dá)?？捎诙虝r(shí)間內(nèi)同時(shí)鑒定所有已知miRNA的表達(dá)譜，成為高通量檢測(cè)的最佳選擇。芯片方法的前提是分離到高質(zhì)量的miRNA組分，由于存在背景及混雜信號(hào)干擾，重復(fù)性較差，主要用于miRNA的初篩，其結(jié)果還需采用RT-PCR等方法加以驗(yàn)證。

2．4二代測(cè)序

新一代大規(guī)模測(cè)序技術(shù)主要用于未知序列miRNA的定量檢測(cè)，有高通量、準(zhǔn)確度高的特性。目前市場(chǎng)上主流的測(cè)序技術(shù)有454焦磷酸測(cè)序技術(shù) ［14］、Solexa合成測(cè)序技術(shù) ［15］和SOLID連接測(cè)序技術(shù) ［16］，但深度測(cè)序價(jià)格昂貴，且數(shù)據(jù)量大，不適用于臨床檢測(cè)，一般用于探尋新的miRNA并對(duì)新發(fā)現(xiàn)的miRNA進(jìn)

行功能預(yù)測(cè) ［17］。

3　組織miRNA在肺癌診斷中的應(yīng)用

miRNA在不同組織中有不同的表達(dá)。在肺癌組織與正常組織之間以及不同的肺癌組織之間，miRNA表達(dá)譜也各不相同，這也為運(yùn)用miRNA檢測(cè)以便早期診斷肺癌提供可能。早期研究中，大多數(shù)miRNA表達(dá)譜的數(shù)據(jù)從組織樣本中獲取，尤其是癌組織樣本。因?yàn)閙iRNA非常穩(wěn)定，不易降解，因此，甲醛固定的石蠟包埋組織塊可用于miRNA分離 ［14］;從組織樣本中得到數(shù)據(jù)，可以很好的詮釋miRNA的疾病參與情況。Yanaihara等 ［18］利用miRNA基因芯片分析法，對(duì)104例非小細(xì)胞肺癌(nonsmall cell lung cancer，NSCLC)組織與正常肺組織進(jìn)行miRNA表達(dá)譜的對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，有43種miRNA有明顯的表達(dá)差異，15種miRNA發(fā)生上調(diào)及28種miRNA發(fā)生下調(diào)。這些發(fā)現(xiàn)均為miRNA在肺癌中的研究奠定了基礎(chǔ)。研究 ［19］表明，5種miRNA組合(miR-34c-5p、miR-34a、miR-25、miR-191和let-7a)能夠準(zhǔn)確地區(qū)分肺腺癌和肺鱗癌。Lebanony等 ［20］通過(guò)比較122例NSCLC患者標(biāo)本(62例鱗癌，60例腺癌)表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)miR-205在區(qū)分肺鱗癌和肺腺癌時(shí)，對(duì)鱗癌的敏感度達(dá)96%，特異度達(dá)90%，是肺鱗癌高度特異的生物標(biāo)志。

4　組織miRNA與肺癌的預(yù)后

肺癌的預(yù)后由多種因素決定，準(zhǔn)確的判斷預(yù)后對(duì)于臨床治療具有重要的指導(dǎo)價(jià)值。以往的研究 ［21］認(rèn)為與肺癌預(yù)后有關(guān)的因素有:年齡、吸煙史、TNM分期、腫瘤的病理類(lèi)型、腫瘤的分化程度、治療方式的選擇、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。目前的研究 ［18，22-23］發(fā)現(xiàn)，miRNA也能作為肺癌預(yù)后判斷指標(biāo)，而且是獨(dú)立的預(yù)后因素。Takalmzawa等 ［22］應(yīng)用分層聚類(lèi)法，將143例非小細(xì)胞肺癌術(shù)后病例分為let-7低表達(dá)組(l組)和let-7高表達(dá)組(2組)，兩組間在年齡、性別、組織學(xué)類(lèi)型、T狀態(tài)、分化程度上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Kaplan-Meier生存曲線顯示，1組生存時(shí)間明顯短于2組，單因素Cox回歸分析顯示let-7低表達(dá)預(yù)示著更差的預(yù)后。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示，let-7的表達(dá)水平是非小細(xì)胞肺癌術(shù)后的獨(dú)立預(yù)后因素，其中1組患者術(shù)后死亡的危險(xiǎn)比(hazard ratio)是2組的2．71倍。Yanaihara等 ［18］應(yīng)用單因素Cox模型發(fā)現(xiàn)，5種miRNA與肺腺癌預(yù)后有關(guān)，Kaplan-Meier生存曲線顯示，has-miR-155高表達(dá)與has-let-7a-2低表達(dá)預(yù)示著更短的生存期，多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示，has-miR-155是肺腺癌獨(dú)立的預(yù)后因素。在不同的臨床分期，miRNA也能作為判斷預(yù)后的指標(biāo)。41例1期肺腺癌患者中，有3種miRNA(hsa-miR-155、hsa-miR-17-3P和hsa-miR-20)表達(dá)變化與預(yù)后有關(guān)，這說(shuō)明即使是肺腺癌的早期，miRNA檢測(cè)也能對(duì)疾病的預(yù)后進(jìn)行判斷。Tan等 ［23］利用miRNA芯片對(duì)60例冰凍肺鱗癌與癌旁組織進(jìn)行了雜交，建立了肺鱗癌特異的miRNA表達(dá)譜。發(fā)現(xiàn)miRNA-31在肺鱗癌中的表達(dá)發(fā)生了明顯上調(diào)，其表達(dá)越高，預(yù)后越差。Cox回歸分析，miRNA-31是其獨(dú)立預(yù)后因素，并用real time-PCR證實(shí)。

5　組織miRNA與肺癌的治療

針對(duì)肺癌的治療，臨床應(yīng)用上主要還是以鉑類(lèi)為基礎(chǔ)的雙藥聯(lián)合化學(xué)藥物治療(以下簡(jiǎn)稱(chēng)化療)。提高療效一方面可通過(guò)新藥研發(fā)，另一方面也可通過(guò)提高腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物治療的敏感性實(shí)現(xiàn)。已有研究 ［24-26］發(fā)現(xiàn)，部分miRNA可提高肺腺癌細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的敏感性，如Bian等 ［24］發(fā)現(xiàn)，上調(diào)miR-451能提高NSCLC(A549)對(duì)順鉑的敏感性。Ceppi等 ［25］報(bào)道稱(chēng)，下調(diào)miR-200表達(dá)能夠增加NCI-H1299細(xì)胞對(duì)順鉑和西妥昔單抗的抵抗性。Weiss等 ［26］發(fā)現(xiàn)miR-128b雜合性丟失的肺癌細(xì)胞對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor，EGFR-TKI)吉非替尼十分敏感，而miR-128b未丟失的肺癌細(xì)胞H520對(duì)吉非替尼敏感性不強(qiáng)。而且臨床試驗(yàn)證實(shí)，miR-128b雜合性丟失的肺癌患者經(jīng)吉非替尼治療后，中位生存期為23．4個(gè)月，明顯高于miR-128b未丟失患者的10．5個(gè)月。因此聯(lián)合基因剔除和吉非替尼治療肺癌可使肺癌患者獲得更好的療效。另一項(xiàng)研究 ［27］發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是否吸煙、EGFR是否突變(突變型對(duì)EGFR-TKI敏感)，低表達(dá)miR-21聯(lián)合EGFR-TKI均可誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞的凋亡，提示miR-21可能成為肺癌靶向治療的有效靶點(diǎn)。此外，Cui等 ［28］觀察到，在對(duì)多西他賽耐藥的肺腺癌細(xì)胞中，miR-let-7c的表達(dá)明顯下調(diào)，而額外增加其表達(dá)可增加細(xì)胞的放化療敏感性;相反地，應(yīng)用針對(duì)let-7c的抑制劑可降低腫瘤細(xì)胞的放化療敏感性。在肺腺癌的化療耐藥分子機(jī)制研究中，let-7c起著重要的作用。針對(duì)EGFR基因突變型的肺腺癌患者，酪氨酸激酶抑制劑如吉非替尼有效率高，不良反應(yīng)小，已經(jīng)可替代化療作為二線或三線治療的選擇。

6　循環(huán)miRNA與肺癌

目前，腫瘤的早期診斷，特別是非侵襲性的早期診斷方法逐漸受到重視。通過(guò)檢測(cè)血液中的核酸或蛋白，對(duì)易感人群進(jìn)行早期篩查成為目前腫瘤診斷研究的熱點(diǎn)。研究 ［29］發(fā)現(xiàn)，miRNA表達(dá)譜在血清和血漿中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。miRNA在血清中穩(wěn)定，能抗RNA酶降解，腫瘤的miRNA能夠進(jìn)入血液循環(huán)，血液中的miRNA量可以在一定程度上反映腫瘤的大小，因此有望通過(guò)測(cè)量血液中的miRNAs來(lái)診斷、監(jiān)測(cè)腫瘤。循環(huán)miRNA可穩(wěn)定存在于血液中的原因可能包括:(1)血漿中的絕大多數(shù)miRNA與脂類(lèi)或脂蛋白復(fù)合物結(jié)合，從而免受核糖核酸酶的降解 ［30］;(2)循環(huán)miRNA由相應(yīng)組織分泌后被微囊泡等載體捕獲，進(jìn)而運(yùn)載至受體細(xì)胞發(fā)揮作用 ［31］;(3)循環(huán)miRNA主要與Ago2蛋白等RNA相關(guān)蛋白結(jié)合形成復(fù)合物而穩(wěn)定存在于血液中 ［32］。雖然循環(huán)miRNA在血液中的存在形式尚有爭(zhēng)議，但其具有的良好穩(wěn)定性已被大家認(rèn)可。自1999年與腫瘤相關(guān)的miRNA從乳腺癌、結(jié)腸癌患者血清或血漿中檢測(cè)出來(lái)至今 ［30］，檢測(cè)血液中cirDNA用于診斷惡性腫瘤已成為近年的研究熱點(diǎn)課題之一。循環(huán)miRNA良好的穩(wěn)定特性使其作為一種新興的非侵入性生物標(biāo)志物為肺癌的早期診斷、治療及預(yù)后判斷提供了新的思路。6．1循環(huán)miRNA與肺癌診斷

近幾年，進(jìn)行低劑量胸部CT對(duì)有吸煙史的肺癌高危人群早期篩查是減少高危人群癌癥病死率的有效措施。然而由于低劑量胸部CT高假陽(yáng)性率，目前還無(wú)法運(yùn)用低劑量胸部CT對(duì)高危人群中無(wú)癥狀的肺癌患者進(jìn)行明確診斷。利用miRNA在肺癌組織中的高特異性，意大利的研究者進(jìn)行了一項(xiàng)大規(guī)模研究 ［33］發(fā)現(xiàn)，僅選取血中24個(gè)miRNAs對(duì)肺癌的早期診斷率其靈敏度87%，特異度81%，陰性預(yù)測(cè)值高達(dá)99%，而低劑量胸部CT對(duì)于肺癌早期診斷率分別為靈敏度79%，特異度81%，陰性預(yù)測(cè)值為19．4%。將兩者結(jié)合來(lái)對(duì)肺癌進(jìn)行早期診斷，其假陽(yáng)性率大大下降至3．7%。Chen等 ［34］在肺癌患者血清中發(fā)現(xiàn)了63種在健康人血清中不存在的miRNA，其中10種為肺癌所特異的，并在后續(xù)對(duì)400例NSCLC患者及220例健康對(duì)照者的回顧性研究發(fā)現(xiàn)在臨床診斷NSCLC之前的33個(gè)月，使用上述10 種miRNA就可鑒定出相應(yīng)的血清樣本。Gilad等 ［35］對(duì)451例不同類(lèi)型的肺癌患者的研究顯示，miRNA可作為一種非侵襲性的診斷方法來(lái)區(qū)分肺癌的病理類(lèi)型，與病理學(xué)結(jié)果比較，其鑒別鱗狀細(xì)胞癌、非鱗癌的NSCLC、類(lèi)癌、SCLC的精確度高達(dá)94%。6．2循環(huán)miRNA與肺癌預(yù)后

Van der Drift等 ［36］進(jìn)行了一項(xiàng)長(zhǎng)達(dá)6．5年的隨訪研究，結(jié)果顯示首次診斷NSCLC時(shí)，血漿循環(huán)DNA水平高往往提示患者預(yù)后差。Sirera等 ［37］對(duì)446例Ⅲ和Ⅳ期的NSCLC患者進(jìn)行平均為期9．7(15～45)個(gè)月的隨訪研究顯示，循環(huán)DNA是患者進(jìn)展中位時(shí)間和總生存率的獨(dú)立預(yù)測(cè)標(biāo)志物，它是一種非侵襲性的預(yù)測(cè)進(jìn)展期NSCLC患者預(yù)后的標(biāo)志物。Hu等 ［38］研究了肺癌患者血清miRNA表達(dá)譜與生存期之間的關(guān)系。按生存時(shí)間將303例Ⅰ～Ⅲa期NSCLC患者分為長(zhǎng)存活組(30例，平均生存期49．5個(gè)月)和短存活組(30例，平均生存期9．54個(gè)月)，比較兩組血清miRNA水平，根據(jù)其中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的4種microRNA(miRNA-486、miRNA-30d，miRNA-l，miRNA-499)組成的表達(dá)譜，將患者分為高危組和低危組，低危組中位生存期明顯高于高危組(18．43個(gè)月vs尚未達(dá)到，P＜0．0001)，提示這4種血清microRNA組成的表達(dá)譜可用于生存預(yù)測(cè)，是影響NSCLC患者總生存的獨(dú)立預(yù)后因素。Silva等 ［39］采用芯片技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，血清miR-30-3P和let-7f的濃度與肺癌患者的無(wú)病生存率和總生存率顯著相關(guān);血清miR-30-3P和let-7f的高水平表達(dá)與肺癌患者預(yù)后不良相關(guān)。Kaduthanam等 ［40］通過(guò)檢測(cè)早期可切除肺腺癌患者血清中的miRNA水平，證實(shí)miR-142-3p與腫瘤的復(fù)發(fā)高風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，在術(shù)后24個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)的患者，其水平往往升高，提示miR-142-3p可能作為一個(gè)評(píng)價(jià)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的血清指標(biāo)。

6．3循環(huán)miRNA與肺癌治療

Wei等 ［41］對(duì)35例晚期NSCLC行2～3周期的含鉑方案化療后評(píng)估療效，其中11例部分緩解(partial response，PR)，13例疾病進(jìn)展(progressive disease，PD)，11例病情穩(wěn)定(stable disease，SD)，化療無(wú)效的PD和SD患者的血清miR-21明顯高于化療有效的PR患者(P=0．049)，血清miR-21在化療有效的PR患者與對(duì)照組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0．130)，提示血清miR-21表達(dá)可能與NSCLC患者的化療敏感性有關(guān)。Cui等 ［42］采用RT-PCR技術(shù)對(duì)260例以鉑類(lèi)治療為主的晚期NSCLC患者和260例健康成年人血漿中的miRNA(miR-125b，miR-10b，miR-34a及miR-155b)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與健康成年人相比，4種循環(huán)miRNA在NSCLC患者血漿中的表達(dá)明顯增高，而且miR-125b在低分化肺癌中的表達(dá)明顯高于高、中分化者，但miR-10b、miR-34a及miR-155b在不同分期的肺癌患者血漿中的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究人員還發(fā)現(xiàn)在檢測(cè)的4種循環(huán)miRNA中，只有miR-125b在無(wú)治療反應(yīng)的患者血漿中高表達(dá)，這表明miR-125b與治療反應(yīng)有顯著關(guān)系。這一研究結(jié)果對(duì)于NSCLC靶向治療的開(kāi)展具有非常重要的臨床意義。

7　痰液及胸腔積液中miRNA的研究

研究 ［43］報(bào)道在人血清、血漿、尿液、唾液及其他體液中均有miRNA表達(dá)。肺癌患者痰液也是值得留取和檢測(cè)的有價(jià)值的標(biāo)本。Xing等 ［44］對(duì)6個(gè)miRNA進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果表明聯(lián)合3個(gè)miRNA : miR-205、miR-210、miR-708用以診斷肺鱗癌的敏感度和特異度分別為76%和96%。聯(lián)合4個(gè)miRNA: miR-21、miR-486、miR-375、miR-200b，在診斷肺腺癌時(shí)的敏感度和特異度分別是80．6%和91．7% ［45］。

Han等 ［46］比較了107例包括良性胸腔積液及肺腺癌導(dǎo)致的惡性胸腔積液病患中胸腔積液的miRNA水平，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于良性胸腔積液患者，miR-198在惡性胸腔積液中被下調(diào)，而在與肺腺癌的傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物例如CEA、CYFRA21-1的比較中，其診斷價(jià)值與CEA相當(dāng)，但略優(yōu)于CYFRA21-1，miR-198診斷惡性胸腔積液的敏感度為89．2%，特異度為85．0%。

8　小結(jié)

綜上所述，miRNA幾乎參與肺癌發(fā)生、發(fā)展的全過(guò)程，在肺癌的診斷、預(yù)后及治療中都具有重要的作用。循環(huán)miRNA分子作為一種新的生物學(xué)標(biāo)志物具有創(chuàng)傷小、可重復(fù)、易獲取的優(yōu)點(diǎn)，可用于預(yù)測(cè)肺癌患者化療療效及動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)治療效果，并可作為治療靶標(biāo) ［47］。但肺癌相關(guān)特異性miRNA表達(dá)譜的篩選、檢測(cè)方法及檢測(cè)程序的標(biāo)準(zhǔn)化、適合的內(nèi)參基因的選擇等仍是今后血清miRNA研究中需要解決的問(wèn)題。雖然相關(guān)研究尚處于起步階段，相信隨著檢測(cè)方法的成熟和研究的深入，血清microRNA未來(lái)會(huì)在肺癌的預(yù)測(cè)、診斷、預(yù)后評(píng)估、個(gè)體化治療等方面擁有美好的應(yīng)用前景。