時(shí)間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的比較

羅 惟，張 杰

（涼山州彝族自治州第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 615000）

時(shí)間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的比較

羅 惟，張 杰

（涼山州彝族自治州第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 615000）

目的探討時(shí)間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的臨床價(jià)值。方法選取該院檢驗(yàn)科2013年6～12月收取的乙型肝炎患者血清標(biāo)本250份，分別采用時(shí)間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測，比較2種方法對(duì)乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb）及乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）等乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物陽性檢出率。結(jié)果時(shí)間分辨免疫熒光法用于乙型肝炎患者HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg檢測陽性率均明顯高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論相較于酶聯(lián)免疫吸附法，時(shí)間分辨熒光免疫法用于乙型肝炎患者可顯著提高病毒血清標(biāo)志物陽性檢出率，具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

熒光免疫測定； 酶聯(lián)免疫吸附測定； 乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物； 肝炎，乙型，慢性

乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物是目前公認(rèn)的乙型病毒性肝炎診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”，也是乙型肝炎病毒感染重要病原學(xué)依據(jù)及病情進(jìn)展預(yù)后評(píng)估最關(guān)鍵指標(biāo)[1]。目前臨床乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物常規(guī)采用酶聯(lián)免疫吸附法，其具有操作簡便、檢測迅速及價(jià)格低廉等等優(yōu)勢，但大量臨床研究證實(shí)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測靈敏度較低、漏診率較高、鉤狀效應(yīng)明顯，且無法提供乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的具體含量[2-3]，無法滿足臨床需要。作為一種新型臨床免疫檢驗(yàn)技術(shù)，時(shí)間分辨熒光免疫法開始在乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測中得到廣泛應(yīng)用。本次研究選取本院檢驗(yàn)科近期收取的乙型肝炎患者血清標(biāo)本250份，分別采用時(shí)間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測，比較2種方法對(duì)于乙型肝炎病毒表面抗原（HB-sAg）、乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb）及乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）等乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物陽性檢出率，探討時(shí)間分辨熒光免疫法與酶聯(lián)免疫吸附法用于乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測的臨床價(jià)值差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院檢驗(yàn)科2013年6～12月收取的乙型肝炎患者血清標(biāo)本共250份，均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)《病毒性肝炎防治方案》慢性乙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。入選患者中男157例，女93例，年齡30～57歲，平均（42.67±5.20）歲。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 抽取乙型肝炎患者清晨空腹靜脈血5～10 mL，放入真空管中，37℃恒溫凝血分離血清，并于血清分離后1 h進(jìn)行檢測。（1）時(shí)間分辨熒光免疫法：時(shí)間分辨熒光免疫法屬于定量檢測方法，以超過正常參考范圍上限判讀為陽性，對(duì)于指標(biāo)判讀為弱陽性標(biāo)本，應(yīng)重新設(shè)立雙陽性對(duì)照重復(fù)檢測，如再次判讀為陽性即可認(rèn)定；檢測儀器采用上海新波時(shí)間分辨熒光免疫分析儀，并選擇同公司配套試劑盒，操作過程中嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求進(jìn)行。（2）酶聯(lián)免疫吸附法：酶聯(lián)免疫吸附法屬于定性檢測方法，以酶標(biāo)儀顯示結(jié)果進(jìn)行陽性判讀，對(duì)于指標(biāo)判讀為弱陽性標(biāo)本，應(yīng)重新設(shè)立雙陽性對(duì)照重復(fù)檢測，如再次判讀為陽性即可認(rèn)定；檢測儀器采用匯松MB-580型。

1.2.2 觀察指標(biāo) 記錄乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測陽性例數(shù)，計(jì)算陽性率；乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物指標(biāo)包括HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg；以超過正常參考范圍值上限判定為陽性，其中HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg正常參考范圍分別為0.0～0.5 ng/mL、0.0～0.2 PEU/mL、0.0～0.9 PEU/mL、0～10 mU/mL、0.0～0.5 PEU/mL；檢出陽性率=（檢出陽性例數(shù)/總例數(shù)）×100.00%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

時(shí)間分辨免疫熒光法用于乙型肝炎患者HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg檢測陽性率均明顯高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 2種方法對(duì)于乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物陽性檢出率比較[n（%）]

3 討 論

流行病學(xué)研究顯示，在全球范圍內(nèi)我國屬于乙型肝炎病毒感染高發(fā)地區(qū)，超過1億人攜帶HBsAg。乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測是進(jìn)行乙型肝炎病毒感染判定最主要的方式；其中肝癌患者HBeAb感染檢出率顯著高于慢性乙型感染和肝硬化，而HBcAb水平與患者病情進(jìn)展即病毒增殖水平和肝細(xì)胞損傷具有相關(guān)性；而HBcAb則是乙型肝炎病毒感染后血清中最早出現(xiàn)抗體指標(biāo)，因其具有高效價(jià)、長持續(xù)時(shí)間等優(yōu)勢，被作為流行病學(xué)乙型肝炎病毒感染首選觀察指標(biāo)。

目前，臨床HBV感染后血清學(xué)檢測檢測常用方法包括酶聯(lián)免疫吸附法、時(shí)間分辨熒光免疫法及聚合酶鏈反應(yīng)法，其中酶聯(lián)免疫吸附法和時(shí)間分辨熒光免疫法主要用來檢測乙型肝炎病毒抗原或抗體，而聚合酶鏈反應(yīng)法則主要用來檢測乙型肝炎病毒DNA。酶聯(lián)免疫吸附法是目前最為常用乙型肝炎病毒免疫檢測技術(shù)，可通過對(duì)抗體抗原進(jìn)行酶標(biāo)記進(jìn)行病毒檢測，但其僅能夠完成病毒定性分析，無法進(jìn)行患者體內(nèi)病毒血清標(biāo)志物定量計(jì)算及動(dòng)態(tài)監(jiān)測[5]，故乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物感染檢測靈敏性較為低下，無法滿足臨床對(duì)于乙型肝炎病毒復(fù)制水平及感染情況判讀需求。已有研究結(jié)果顯示，酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙型肝炎血清標(biāo)志物最低限為0.5 ng/mL，故乙型肝炎病毒低水平感染人群漏檢更高；同時(shí)酶聯(lián)免疫吸附法檢測對(duì)于操作熟練度、污染及判讀方面要求較高，也限制其臨床應(yīng)用[6-7]。聚合酶鏈反應(yīng)法可通過檢測標(biāo)本中乙型肝炎病毒DNA表達(dá)確定有無病毒感染，但其對(duì)于設(shè)備、人員技術(shù)水平要求較高，無法在基層醫(yī)院廣泛應(yīng)用[9]。

時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)是近年來出現(xiàn)的一種乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物定性定量檢測手段，主要檢測機(jī)制為以鑭系稀土元素螯合物作為二抗進(jìn)行示蹤標(biāo)記病毒血清標(biāo)志物，進(jìn)而發(fā)生熒光免疫反應(yīng)[10]，經(jīng)放大器擴(kuò)大檢測信號(hào)，并經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線分析數(shù)據(jù)得到確定病毒血清標(biāo)志物含量。相對(duì)于其他乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測方法，時(shí)間分辨免疫熒光法具有可多次重復(fù)檢測、測量值范圍廣、無衰變及檢測穩(wěn)定性高等優(yōu)勢[11-12]；同時(shí)整個(gè)檢測過程均有全自動(dòng)熒光滿意檢測儀完成，有效避免因操作技術(shù)差異引起的檢測誤差，有助于提高檢測數(shù)據(jù)可靠性[13]。

本研究結(jié)果顯示，時(shí)間分辨熒光免疫法用于乙型肝炎患者HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg檢測陽性率均明顯高于酶聯(lián)免疫吸附法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示時(shí)間分辨熒光免疫法在提高乙型肝炎患者病毒血清標(biāo)志物檢出敏感性方面優(yōu)勢明顯，更具臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，相較于酶聯(lián)免疫吸附法，時(shí)間分辨熒光免疫法用于乙型肝炎患者可顯著提高病毒血清標(biāo)志物檢出陽性率，具有臨床應(yīng)用價(jià)值；但鑒于研究入選樣本量少、技術(shù)人員操作水平等因素制約，所得結(jié)論還有待進(jìn)一步臨床試驗(yàn)確證。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.12.040

:B

:1009-5519（2015）12-1855-02

2015-02-03）

羅惟（1983-），女，四川西昌人，主管檢驗(yàn)師，主要從事醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)相關(guān)的研究；E-mail：1829029918@qq.com。