水溶性牡蠣多糖的降血壓活性

石璇　郭國麗　馬慧慧　佟長青　宮芳婧　曲敏　李偉

摘要：牡蠣中含有豐富的多糖。從牡蠣中制備的水溶性多糖經(jīng)HPLC測定，其單糖組成為葡萄糖，以葡聚糖分子篩測定其分子量為（3.93～10.84）×106 Da。以牡蠣多糖（7 g/kg）對高血壓模型大鼠灌胃均具有較明顯的降低收縮壓和舒張壓作用。

關(guān)鍵詞：牡蠣；多糖；降壓活性

牡蠣屬于軟體動物門、瓣鰓綱、列齒目、牡蠣科。牡蠣不但營養(yǎng)豐富，而且還具有一定的藥用價值。《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載牡蠣具有斂陰、潛陽、化痰、軟堅等藥用價值[1]。我國沿海所產(chǎn)牡蠣有20多種。從渤海、黃海至南海均有養(yǎng)殖，主要的養(yǎng)殖品種有近江牡蠣（Crassostrea rivularis Crould）、褶牡蠣（Crassostrea plicatula）、長牡蠣（Crassostrea gigas Thunberg）、大連灣牡蠣（Crassostrea talienwhanensis）以及密鱗牡蠣（Ostrea denselamellosa Lischke）[2]。研究表明，牡蠣含有氨基酸、多糖、B族維生素、?；撬嵋约扳}、磷、鐵、鋅等成分。臨床研究表明，牡蠣具有提高機體免疫力、降血壓、治療失眠、慢性中耳炎、小兒多汗癥、子宮肌瘤以及小兒遺尿等作用[3]。

對于牡蠣肉酶解產(chǎn)物降血脂、降血壓以及調(diào)整血糖的作用已有報道[4]。牡蠣肽具有的抗菌活性也有報道[5]。牡蠣多糖是牡蠣中的重要成分之一。它主要為通過α-（1，4）糖苷鍵相連且具有α-（1，6）糖苷鍵分支的葡萄聚糖[6]。對于牡蠣多糖的降血壓活性動物實驗研究尚未見到報道。本文利用高血壓模型Wistar大鼠進(jìn)行牡蠣多糖降血壓作用研究，為利用牡蠣多糖開發(fā)降血壓功能保健食品提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

牡蠣（Crassostrea gigas）購于大連長興農(nóng)貿(mào)市場。購回后置于冰箱中（ -20 ℃） 保存，直至使用。

1.2方法

1.2.1牡蠣多糖制備在4 ℃時，清洗牡蠣，在0.5 MPa 壓力下，80 ℃蒸煮牡蠣，3 500 r/min離心20 min，棄去沉淀。

將上清液用濃度70%的乙酸調(diào)至pH 5，酸解2 h，3 500 r/min離心20 min，棄去沉淀。上清利用膜分離器去除分子量30 000 Da以下的物質(zhì)，用NaOH調(diào)解30 000 Da以上濾液pH至7。加入乙醇使終濃度為70%，3 500 r/min離心20 min離心得多糖沉淀。沉淀溶于蒸餾水中，在蒸餾水中透析后冷凍干燥，制得牡蠣多糖。

1.2.2牡蠣多糖性質(zhì)按照Fu及ONeill的方法測定水溶性牡蠣多糖中的單糖組成[7]。所得的水溶性牡蠣多糖經(jīng)三氟乙酸酸解，以3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮（PMP）衍生后用高效液相色譜（HPLC，美國Waters公司）分析。

水溶性牡蠣多糖分子量通過TSK-gel G3000PWXL柱（7.8 mm×30 cm）測定，標(biāo)準(zhǔn)水溶性多糖分子量為10、70、80及500 kDa的葡聚糖。

1.2.3牡蠣多糖降壓作用高血壓模型Wistar大鼠隨機分為3組，每組6只。分別以生理鹽水（陰性對照組）、卡托普利 （20 mg/kg）（陽性對照組）和牡蠣多糖（7 g/kg）灌胃，1次/d，2 mL/次，共22 d，通過ALC-NIBP無創(chuàng)血壓測量分析系統(tǒng)（上海奧爾科特生物科技有限公司）監(jiān)測大鼠給藥前后血壓的變化情況。

1.2.4統(tǒng)計方法用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析處理，p<0.05表示差異顯著，數(shù)值以（±sd）表示。

2結(jié)果與討論

2.1牡蠣多糖性質(zhì)

牡蠣多糖經(jīng)過蒸煮、酸解、醇沉以及干燥等步驟制得。制得的牡蠣多糖經(jīng)過PMP衍生后，經(jīng)HPLC檢測發(fā)現(xiàn)其單糖的組成單位是葡萄糖。這與陳騫報道的牡蠣糖原組成是相同的[8]。牡蠣多糖分子量通過TSK-gel G3000PWXL柱層析測定為（3.93～10.84）×106 Da。本實驗所提取的牡蠣多糖分子量比陳騫報道的牡蠣糖原分子量大[8]。

2.2牡蠣多糖降壓活性

從試驗結(jié)果來看，經(jīng)過灌胃22 d后，高血壓大鼠的收縮壓明顯降低（圖1）。牡蠣多糖的降壓效果與20 mg/kg的卡托普利相當(dāng)。其中，牡蠣多糖與陰性對照相比，它們之間的收縮壓存在顯著性差異（P<0.05）。

經(jīng)過灌胃19 d后，高血壓大鼠的舒張壓明顯降低（圖2）。牡蠣多糖的降壓效果與20 mg/kg的卡托普利相當(dāng)。其中，牡蠣多糖與陰性對照相比，它們之間的舒張壓存在顯著性差異（P<0.05）。

3結(jié)論

牡蠣多糖由葡萄糖組成，是一種相對分子量在數(shù)百萬至數(shù)千萬的大分子量多糖。以牡蠣多糖對高血壓模型大鼠灌胃均具有較明顯的降低收縮壓和舒張壓作用。隨著深入研究，牡蠣多糖可以被開發(fā)成降血壓的保健食品。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 吳濤園，孔恢禮.牡蠣營養(yǎng)功能制品研究進(jìn)展[J].河北漁業(yè)，2007（8）： 6-9.

[3] 馮麗，趙文靜，常惟智.牡蠣的藥理作用及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥信息，2011，28（1）： 114-116

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[5] Liu Z，Dong S，Xu J，et al.Production of cysteine-rich antimicrobial peptide by digestion of oyster （Crassostrea gigas） with alcalase and bromelin[J].Food Control，2008，19：231-235

[6] 陳騫.牡蠣糖原的提取與抗疲勞活性研究[D].無錫：江南大學(xué)碩士學(xué)位論文，2005

[7] Fu D，ONeill RA.Monosaccharide composition analysis of oligosaccharides and glycoproteins by high-performance liquid chromatography[J].Analytical Biochemistry，1995，227（2）：377-384

[8] 陳騫，楊瑞金，顧聆琳.牡蠣糖原的研究（I）—牡蠣糖原的分離提取和化學(xué)組成[J].食品科學(xué)，2005，26（6）：99-101

Abstract：A water-soluble polysaccharide was isolated from Crassostrea gigas （CGPS-1） by hot-water extraction.For the polysaccharide，glucose was the monosaccharide unit.Based on the calibration with Dextran，the CGPS-1 had a molecular weight of about 3.93～10.84×106 Da.The plysaccharides （7 g/kg）have better antihypertensive effect on renovascular hypertensive rats.

Key words：Crassostrea gigas； polysaccharide； antihypertensive effect

（收稿日期：2014-12-08）