紫外分光光度法和蒽酮-硫酸法測(cè)定參芎葡萄糖注射液中總糖含量*＊

朱迪，譚丹，侯靖宇，向文英，王愛民，3，蘭燕宇，3，鄭林，3＊＊

(1.貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽(yáng)550004;2.貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院民族藥與中藥開發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心，貴州貴陽(yáng)

550004;3.貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州貴陽(yáng)550004)

“參芎葡萄糖注射液”為上市的中藥注射劑品種，由丹參和鹽酸川芎嗪配伍組成，具有抗血小板聚集，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈作用，臨床用于閉塞性腦血管病及其它缺血性血管疾病的治療［1-3］。參芎葡萄糖注射液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)丹參素和鹽酸川芎嗪進(jìn)行定量控制，難以全面控制產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量。為進(jìn)一步完善參芎葡萄糖注射液質(zhì)量控制方法，達(dá)到《中藥、天然藥物注射劑基本技術(shù)要求》所規(guī)定的“多成份制成的注射劑，所測(cè)成份應(yīng)大于總固體量的80%”要求，本研究建立了參芎葡萄糖注射液總糖的含量測(cè)定方法，為產(chǎn)品的質(zhì)量控制與綜合評(píng)價(jià)提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司，UV 2401)，超聲波清洗器(250 W，頻率27～34 kHz;北京醫(yī)療設(shè)備二廠)，AE240十萬(wàn)分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)，超純水機(jī)(四川沃特爾科技發(fā)展有限公司)，TAISITE水浴鍋，移液槍(1 000μL，Eppendorf)。D-無(wú)水葡萄糖(批號(hào)111506，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，蒽酮(30015014，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，濃硫酸［20131201，重慶川東化工(集團(tuán))有限公司］。8個(gè)不同批次的參芎葡萄糖注射液(批號(hào)為:20131125-1，20131125-2，20130979-1，20130979-2，20131104-1，20131104-2，20131211-1，20131211-2)均由貴州景峰注射劑有限公司提供。

1.2 總糖含量測(cè)定方法

1.2.1 溶液的制備對(duì)照品溶液的制備:精密量取D-無(wú)水葡萄糖20 mg，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，得對(duì)照品溶液。供試品溶液制備:取注射液1 mL，加水定容至50 mL，搖勻后，再取1 mL加水定容至50 mL，得供試品溶液A，取供試品溶液A 2 mL，加入8 mL蒽酮試劑，搖勻后，沸水浴加熱10 min，放至室溫后，冰浴冷卻5 min后，室溫放至10 min?？瞻兹芤褐苽?取純化水2 mL于離心管中，加入8 mL蒽酮試劑，搖勻后，沸水浴加熱10 min，放至室溫后，冰浴冷卻5 min后，室溫放至10 min。蒽酮試劑的制備:取0.2 g蒽酮，加濃硫酸至100 mL，即配即用。

1.2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)以水為參比，分別于紫外可見分光光度計(jì)上對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和供試品溶液進(jìn)行全掃描，對(duì)照品溶液最大吸收波長(zhǎng)為620 nm，供試品溶液最大吸收波長(zhǎng)為625 nm，二者紫外光譜和最大吸收波長(zhǎng)基本一致，故確定參芎葡萄糖注射液中總糖含量的測(cè)定波長(zhǎng)為620 nm。對(duì)照品和供試品紫外光譜，見圖1，空白紫外光譜，見圖2。

圖1 對(duì)照品和供試品紫外光譜圖Fig.1 UV spectrogram of standards and samples

圖2 空白紫外光譜圖Fig.2 UV spectrogram of blank

1.3 方法學(xué)考察

1.3.1 線性關(guān)系用移液槍量取取對(duì)照品溶液0.40、0.60、0.80、1.00、1.50至10 mL離心管中，再用移液槍加水至2 mL，搖勻后，加入8 mL蒽酮試劑，搖勻后，沸水浴加熱10 min，放至室溫后，冰浴冷卻5 min后，室溫放至10 min，即得對(duì)照品工作液。分別取對(duì)照品工作液，以水為參比溶液，在620 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為A=35.500 C-0.041 80，r=0.999 3，結(jié)果表明葡萄糖對(duì)照品濃度在0.008～0.03 g/L范圍內(nèi)與溶液的吸光度之間呈良好的線性關(guān)系。

1.3.2 精密度試驗(yàn)取同一濃度的對(duì)照品工作液(0.025 g/L)，按上述建立的紫外分光光度法連續(xù)測(cè)定6次吸光度值，結(jié)果6次測(cè)定值的RSD為0.79%，說明儀器精密度良好。

1.3.3 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)參芎葡萄糖注射液(批號(hào)為:20131125-1)6份，按“1.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別測(cè)定吸光度值并計(jì)算含量，結(jié)果6次測(cè)定值的RSD為2.7%，說明此方法的重復(fù)性良好。

1.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下參芎葡萄糖注射液，按“1.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述建立的紫外分光光度法，分別于0，1，2，4，6，8，24 h測(cè)定吸光度值，結(jié)果供試品溶液中總糖含量的RSD為2.5%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.3.5 回收率試驗(yàn)精密稱取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下參芎葡萄糖注射液9份，每份0.5 mL，分別精密加入葡糖糖對(duì)照品溶液適量，按“1.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述建立的紫外分光光度法測(cè)定吸光度值并計(jì)算總糖的含量，結(jié)果表明:9份供試品加樣回收率結(jié)果在98.17%～108.13%之間，RSD為2.9%，說明此方法具有良好的回收率，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Test results of recovery

1.4 樣品測(cè)定

8批參芎葡萄糖注射液，按“1.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述建立的紫外分光光度法測(cè)定吸光度值，分別計(jì)算供試品溶液中總糖含量，結(jié)果見表2。

2 討論

目前測(cè)定總糖的方法有苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法，苯酚-硫酸法中苯酚需要進(jìn)行蒸餾后才能使用，污染較大，穩(wěn)定性差，線性關(guān)系不好且重現(xiàn)性差［4-14］。因此本研究采用蒽酮-硫酸法對(duì)參芎葡萄糖注射液進(jìn)行總糖含量測(cè)定，研究結(jié)果表明線性關(guān)系理想，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性均良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，且簡(jiǎn)便可行。

表2 8批參芎葡萄糖注射液中總糖含量測(cè)定結(jié)果Tab.2 Determination results of total sugar in 8 battle of Shenxiong glucose injection

為更好的反映參芎葡萄糖注射液的內(nèi)在質(zhì)量，本研究對(duì)參芎葡萄糖注射液中主總糖進(jìn)行了測(cè)定，探討和建立科學(xué)、可靠、簡(jiǎn)便的總糖定量測(cè)定方法。建立的紫外可見光分光光度法，經(jīng)方法學(xué)考察，該方法可以較為簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地測(cè)定參芎葡萄糖注射液中總糖的含量，可為參芎葡萄糖注射液的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

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