豬常見病毒性腹瀉的特點及預(yù)防措施

王英賀，姚新華，苑淑賢，郭衍冰，魏 峰，邵洪澤，李 爽，曹利利＊

（1.吉林省畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，吉林長春130062；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林長春130118）

豬腹瀉嚴重影響了養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，幾乎我國所有的省份都報道了豬腹瀉的暴發(fā)和流行，豬的病毒性腹瀉危害尤其嚴重，妨礙了我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，引起了眾多科研工作者的廣泛關(guān)注。針對此類疾病，生產(chǎn)上仍缺乏快速、準確的診斷方法和有效的預(yù)防措施，所以熟練掌握引起豬腹瀉的各類病毒的病原、臨床癥狀、流行特點以及病理變化，并制定科學(xué)、合理的綜合防治對策是提升養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵。綜合各類引起豬腹瀉的病毒，其中危害最大的是豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（Porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV）、豬輪狀病毒（Porcine rotavirus，PoRV）、豬博卡病毒（Porcine bocavirus，PBoV）和豬嵴病毒（Porcine kobuvirus，PKV）。現(xiàn)將以上病毒所引發(fā)腹瀉的研究現(xiàn)狀及預(yù)防措施敘述如下，希望為后續(xù)研究提供參考。

1 病原學(xué)特性

1.1 豬流行性腹瀉病毒

豬流行性腹瀉病毒（PEDV）為尼多病毒目、冠狀病毒科、冠狀病毒屬，線性單股正鏈RNA 病毒，約28kb［1］。病毒粒子大小約為95nm～190nm，呈多形性且多數(shù)為球形，由纖突蛋白（S）、膜蛋白（SM）、小包膜蛋白（E）和核衣殼蛋白（N）組成，其中E、S和M 蛋白存在于病毒表面，N 蛋白與PEDV 基因組相互纏繞［2］。最初于1971年英國首次報道該病，此后比利時、德國、瑞士等國也相繼報道［3］，1976年我國報道了豬流行性腹瀉的發(fā)生［4］，1978年分離出PEDV 并 將 其 命 名 為CV777 株［5］，1995 年 國 際病毒分類委員會第六次會議將PEDV 正式列為冠狀病毒屬成員［6］，2013 年北美和南美才報道發(fā)現(xiàn)PEDV［7］。PEDV 對 消 毒 藥 和 外 界 環(huán) 境 抵 抗 力 不強，超聲處理和反復(fù)凍融對PEDV 的感染力也幾乎沒有影響，但其卻對氯仿和乙醚尤其敏感［8］。細胞培養(yǎng)PEDV 相對困難，直到1982年才首次在胎豬腸組織原代單層細胞上培養(yǎng)PEDV 并獲得成功，1988年首次在含有胰酶的Vero細胞培養(yǎng)基中成功繁殖PEDV［9］。

1.2 豬傳染性胃腸炎病毒

豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）屬于套式病毒目、冠狀病毒科、冠狀病毒屬的單股正鏈RNA 病毒，病毒粒子呈多形性，其直徑為60nm～160nm，分子質(zhì)量6×103ku［10］，基因組大小約28.5kb［11］。1946年美國伊利諾斯州首次報道，隨后1956 年日本，1957年 英 國 對TGE 進 行 報 道［12］，1973 年 在 我國首次分離得到TGEV。TGEV 核酸有9 個開放閱讀框（ORFs）編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白（糖蛋白S、N－端被糖基化的完整膜蛋白M、磷酸化的酸性蛋白N 和膜結(jié)合蛋白E）和5 種非結(jié)構(gòu)蛋白（ORF1a、ORF1ab、ORF3a、ORF3b、ORF7）［13］。TGEV 在 胞漿中成熟，出芽是通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，病毒粒子可在細胞漿的空泡中觀察到。該病毒只有一個血清型，對外界的抵抗力較弱，但在寒冷又潮濕的季節(jié)生命力極強且穩(wěn)定性極好。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)豬睪丸細胞（Swin testicle，ST）被認為是培養(yǎng)TGEV 最為靈敏的細胞系［14］。TGEV 對氯仿、乙醚、去氧膽酸鈉和光照敏感（在紫外照射下可迅速滅活）；在膽汁中存在相當(dāng)穩(wěn)定；對胰酶有抵抗力，毒力越強的毒株，對胰酶的敏感性越高；對低溫耐受，在液氮中存放3年毒力無明顯下降。

1.3 豬輪狀病毒

輪狀病毒（RV）屬呼腸病毒科、輪狀病毒屬是二十面體雙層對稱衣殼、無囊膜、呈球形的雙鏈分節(jié)段RNA 病毒，RV 基因組總長度約為18.52kb，總分子質(zhì)量約為12×103ku［15］，由11個節(jié)段組成，編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白（VP1－VP7）和6種非結(jié)構(gòu)蛋白（NSP1－NSP6）［16］。1969 年 在 小 牛 糞 便 中 成 功 分 離 到RV［17］；1974年在英國首次從腹瀉的豬病料中分離到輪狀病毒［18］；1990 年Saif研究RV 基因組雙鏈RNA 的電泳型，病毒遺傳特性和病毒抗原發(fā)現(xiàn)均有不同程度的差異，于是將RV 分為7個群（A－G）［19］。RV 具有組抗原、亞組抗原和血清型抗原三類主要特異性抗原，目前認為腸毒素中的NSP4是RV 的關(guān)鍵致病因素［20］，成熟的RV 粒子直徑約為75nm，主要由含有VP4和VP7的外衣殼，含有VP6的中間層衣殼和含有VP1、VP2、VP3 的最內(nèi)層衣殼組成［21］。由于RV 表面的VP4有抑制病毒在細胞上生長的作用，因此PoRV 需在不加血清的培養(yǎng)液中用蛋白水解酶處理才可適應(yīng)細胞生長。有報道稱MA－104細胞和Vero細胞是最適合輪狀病毒生長的 細 胞 系，1980 年 細 胞 分 離 到 了RV－Wa 株［22］。RV 具有較強的抗理化因素能力，如耐乙醚、次氯酸鹽、氯仿、甲醛、酸堿，在反復(fù)凍融以及37℃超聲處理1h等情況下仍不失活，其中可致病性PoRV 可在室溫下存在4 個月。但是，EGTA、EDTA、硫甲酸鈉等均可使RV 失活。

1.4 豬博卡病毒

豬博卡病毒（PBoV）為無囊膜的單鏈DNA 病毒是細小病毒科，細小病毒亞科（Parvovirinae）、博卡病毒屬（Bocavirus）成員［23－24］。病毒粒子為正12面體，直徑約為26nm，體積小且結(jié)構(gòu)簡單，豬博卡病毒基因組大小約5.2kb 左右，有3 個開放閱讀框［25］，2009年首次由瑞典學(xué)者通過隨機多重擴增方法和高通量測序技術(shù)在豬群中得以鑒定［26］。PBoV按照發(fā)現(xiàn)的先后順序可分為5 種基因型（PBov1、PBoV2、PBoV3、PBoV4、PBoV5）［27］。該病毒對外界抵抗能力強，以“首－尾”相接的滾環(huán)模式進行復(fù)制。

1.5 豬嵴病毒

嵴病毒為無囊膜的單股正鏈RNA 病毒屬小核糖核酸病毒科、Kobu病毒屬，是近年來發(fā)現(xiàn)的新型病毒。其成員包含愛知病毒（Aichi virus，AiV）與牛嵴病毒（Bovine kobuvirus，BKV）和候選豬嵴病毒（Porcine kobuvirus，PKV）［28］。病毒粒子呈球形，直徑大小約為30nm，嵴病毒基因組大小約為8.2kb～8.4kb，目前發(fā)現(xiàn)存在一個開放閱讀框，編碼一個由3個結(jié)構(gòu)蛋白和7個非結(jié)構(gòu)蛋白組成的大的聚合蛋白［29］。PKV 于2007年在匈牙利首次被發(fā)現(xiàn)，此后中國、泰國、韓國、日本、巴西、新西蘭等地開始報道［30］。2013 年P(guān)KV 被 正 式 確 定 為 嵴 病 毒 屬 成員［31］。PKV 粒子在體外相對穩(wěn)定，但對熱敏感，60℃30min即可被滅活。PKV 不僅存在于胃腸道內(nèi)，還存在于健康的豬血液中，雖然豬嵴病毒在腹瀉仔豬中檢出率很高，但目前沒有充分的證據(jù)證明是否豬感染嵴病毒會引起腹瀉或者是腹瀉會引起嵴病毒的感染，此外PKV 的易感細胞不明確，未能成功分離。所以該病毒的致病性、臨床癥狀和病理特點應(yīng)倍加關(guān)注。

2 流行病學(xué)

2.1 傳染源

經(jīng)調(diào)查了解發(fā)現(xiàn)豬流行性腹瀉的主要傳染源是病豬；豬傳染性胃腸炎主要傳染源為病豬和康復(fù)帶毒豬，貓、犬和狐貍被認為是該病毒在豬群中傳播的帶毒者；豬博卡病毒主要傳染源為病豬和康復(fù)帶毒豬；輪狀病毒的主要傳染源是病豬、隱性感染豬和康復(fù)帶毒豬。

2.2 傳播途徑

通常引起豬病毒性腹瀉的傳播途徑為消化道和呼吸道。對于輪狀病毒，人和其他動物可通過攜帶病毒傳播該??；雖然糞－口途徑是豬流行性腹瀉主要的傳播途徑但并不是唯一的；豬博卡病毒還可通過哺乳、配種垂直傳播；豬嵴病毒病毒除了具有糞－口途徑外還可通過母乳和血液傳播。

2.3 流行方式及特點

豬病毒性腹瀉主要發(fā)生在冬春寒冷季節(jié)，不同年齡和品種的豬均可感染發(fā)病，且通常表現(xiàn)為發(fā)病率高、病死率成年豬低、仔豬高等特點。但是，不同病毒引起的腹瀉在流行方式上仍存在很大差異。例如：豬的流行性腹瀉的潛伏期較長一般為5d～8d，哺乳仔豬和架子豬比成年豬發(fā)病嚴重，病死率也高于成年豬，1983年P(guān)rager首次確定PED 呈地方性流行并且可以在豬群中持續(xù)存在；而Maes 和Haelter調(diào)查發(fā)現(xiàn)流行性的豬傳染性胃腸炎的潛伏期較一般病毒短，部分豬群可在18h～71h內(nèi)感染發(fā)?。ㄗ胸i潛伏期較短，大豬潛伏期較長）。1 日齡～10日齡內(nèi)的仔豬死亡率最高，可高達100%，但隨著年齡的增長發(fā)病率和死亡率逐漸降低。TGE 在流行病學(xué)研究方面更為復(fù)雜，有報道稱如果感染了TGEV 的變異株P(guān)RCV，流行模式將會發(fā)生改變。該病主要存在暴發(fā)性流行、地方流行和周期性流行三種流行模式。但是，豬輪狀病毒和新發(fā)現(xiàn)的豬博卡病毒、豬嵴病毒僅呈地方性感染，其中豬輪狀病毒對理化因素有很強的抵抗力從而導(dǎo)致病愈的豬也常常帶毒。由于輪狀病毒不但在不同物種間交互感染，而且也與不同病毒株和細菌株間存在混合感染，使疾病擴散并長期傳播，導(dǎo)致豬的死亡率升高，給養(yǎng)豬業(yè)造成很大的損失。豬博卡病毒也與其他病毒存在混合感染且其最短潛伏期約為16h～19h。而豬嵴病毒沒有地域限制［32］，3周齡以下的仔豬感染豬嵴病毒的概率較高。

3 臨床癥狀

豬的病毒性腹瀉大多表現(xiàn)為潛伏期短，發(fā)病快，死亡率高，主要臨床癥狀為引起不同程度的嘔吐和腹瀉，但各類病毒因病原不同表現(xiàn)的臨床癥狀也有差異。感染傳染性胃腸炎的豬首先出現(xiàn)口渴、嘔吐等癥狀，接著出現(xiàn)嚴重的噴射狀水樣腹瀉，嚴重的糞中帶血。病豬表現(xiàn)為被毛逆立、毛發(fā)黯淡無光、消瘦掉膘，糞便顏色常為黃色、綠色、灰白色。不同日齡的豬出現(xiàn)不同的臨床癥狀，例如，仔豬會突然發(fā)病，出現(xiàn)噴射式水樣腹瀉、短暫嘔吐、嚴重脫水并在2d～7d內(nèi)死亡，病愈的仔豬也會出現(xiàn)生長發(fā)育不良；泌乳母豬出現(xiàn)斷乳、體溫升高、嘔吐、腹瀉、脫水；一些成年豬和育肥豬普遍呈現(xiàn)厭食、個別嘔吐、輕度腹瀉，在1周左右康復(fù)，并且會產(chǎn)生主動免疫。豬流行性腹瀉的臨床癥狀與豬傳染性胃腸炎類似，患有流行性腹瀉的豬，母豬或育肥豬在疾病暴發(fā)時鮮有臨床癥狀，隨著日齡增加死亡率逐漸降低。而輪狀病毒感染的初期常常表現(xiàn)為食欲減退、精神抑郁、食后嘔吐、一段時間后會發(fā)生嚴重的深黑色或黃白色水樣或糊狀的腹瀉。同時，仔豬的日齡、斷奶的時間和母源抗體的存在與否導(dǎo)致臨床癥狀發(fā)生不同的變化（無母源抗體的新生仔豬病死率可達100%）；在引起豬腹瀉的病毒中，豬博卡病毒對空腸黏膜絨毛還未發(fā)育完全的哺乳仔豬的影響最大，嚴重時會造成腎和心臟功能衰竭而死亡，而母豬和育肥豬無顯著癥狀，死亡率也較低。對于患有豬嵴病毒的豬在發(fā)病前先嘔吐，然后出現(xiàn)多次反復(fù)的劇烈腹瀉（糞便顏色多為灰白色、黃綠色、淡綠色）。

4 病理變化

TGEV、PBoV、PoRV 引起腹瀉的病死豬，病變主要發(fā)生在胃和腸道，其共同特點為小腸管膨滿脹氣、腸壁變薄發(fā)亮、腸內(nèi)存在不同顏色的液狀或糊狀內(nèi)容物（TGEV 和PBoV 為黃綠色或灰白色、PoRV為深黑色或黃白色）、胃內(nèi)有凝乳塊、部分胃黏膜和小腸黏膜充血腫脹。組織學(xué)變化主要為腸絨毛萎縮變短甚至脫落、小腸絨毛上皮細胞空泡化。而PEDV 引起腹瀉的病死豬病變主要發(fā)生在腸道，與傳染性胃腸炎相似。

5 診斷

臨床診斷需對臨床特征表現(xiàn)做出相應(yīng)的判斷，而這些病毒性腹瀉癥狀非常相似，無法辨識是何種病毒引發(fā)的腹瀉，僅能做出初步診斷。所以目前市場上檢測和治療豬病毒性腹瀉常用實驗室方法，即酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、間接夾心ELISA、免疫電鏡法（IEM）、免疫熒光法（IF）、間接血凝試驗（IHA）、PCR 和多重RT－PCR法等。

6 綜合防控措施

引起豬病毒性腹瀉的原因較復(fù)雜，因為在臨床上往往是混合存在和相互促進誘發(fā)的，因此需要尋找出一條綜合而全面的治療豬病毒性腹瀉的措施。針對本文所列舉的病毒性腹瀉，其預(yù)防措施總結(jié)如下：改善飼養(yǎng)管理措施，保持養(yǎng)豬舍的衛(wèi)生環(huán)境，為避免養(yǎng)豬場環(huán)境被污染，應(yīng)及時而又徹底的清理糞便及被污染的墊草和器具，控制外來人員的進入，做好豬場滅鼠、滅蠅、防貓等工作，定期做好消毒處理?？刂曝i舍的溫度、相對濕度、光照和通風(fēng)強度。給豬喂食配方合理的優(yōu)質(zhì)飼料，不給豬飲用污水，不交叉使用豬舍和器具，并且要嚴格避免豬群密度過大。認真執(zhí)行防疫制度，做好免疫預(yù)防：及時接種正規(guī)疫苗，有效保護母豬，使哺乳仔豬獲取較高的母源抗體保護。另外還要對幾種重要的傳染病格外注意，為避免免疫效果差或抗體水平低應(yīng)經(jīng)常做抗體檢測。其次，由于缺乏豬博卡病毒疫苗，為預(yù)防該類疾病的發(fā)生與泛濫應(yīng)對母豬進行返飼。新生仔豬與待產(chǎn)母豬護理：新生仔豬在接產(chǎn)過程中要嚴格消毒，使仔豬身體盡快干燥，仔豬產(chǎn)出后應(yīng)盡快吃到初乳。確定仔豬最佳斷奶時間，使仔豬較好采食。母豬產(chǎn)前半個月至產(chǎn)后一周做好保健工作，避免年后產(chǎn)仔。嚴把挑種關(guān)，盡量做到自繁自養(yǎng)：如從外引進，為了防止帶疫病，應(yīng)該嚴格做好隔離飼養(yǎng)，并設(shè)定好觀察期，一般45d后無疫病出現(xiàn)，才可與本場豬混和飼養(yǎng)，另外還要注意盡量不要從患過重大傳染病的豬場引進仔豬。做好當(dāng)?shù)亓餍胁W(xué)調(diào)查，通過本豬場以及鄰近豬場的調(diào)查分析，確定主要致病因素和以往發(fā)病情況，制定適用于本場的免疫和藥物預(yù)防工作。

7 小結(jié)

輕度腹瀉對于機體是一種保護性反應(yīng)，它能夠及時排除體內(nèi)的有害物質(zhì)。但是，嚴重而又持續(xù)的腹瀉則是消化系統(tǒng)出現(xiàn)障礙，致使腸道內(nèi)菌群失調(diào)，機體發(fā)生全身性營養(yǎng)不良、血糖降低、酸中毒等，從而導(dǎo)致電解質(zhì)和水排出體外。病毒引發(fā)的腹瀉是突發(fā)性和持續(xù)性的，給養(yǎng)豬帶來的損失更是慘重的，因此我們應(yīng)該警惕病毒性腹瀉的發(fā)生。在我國，除了上述幾種病毒可引起豬的病毒性腹瀉外，還有牛病毒性腹瀉病毒、豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、豬圓環(huán)病毒等，雖然本文并未談及但由這些病毒引發(fā)的腹瀉，我們?nèi)匀恍枰o予高度的關(guān)注。到目前為止，我國對豬博卡病毒和豬嵴病毒的認識與了解還缺少深層次的研究與探討，相關(guān)的科研報道還相當(dāng)匱乏，深入探索這兩種病毒的基因結(jié)構(gòu)、致病機制、免疫應(yīng)答及感染后引起的臨床表現(xiàn)等相關(guān)內(nèi)容具有一定意義。

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