飼料中“瘦肉精”的檢測(cè)方法

楊金鳳 楊小燕 黑龍江省大慶市綠色農(nóng)產(chǎn)品監(jiān)測(cè)中心 163316

“瘦肉精”是一種白色或類似白色的結(jié)晶體粉末，無(wú)臭、味苦，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，一般燒煮加熱方法不能將其破壞，只有加熱到172℃時(shí)才能夠被分解。人吃了含有“瘦肉精”的肉制品后，不僅會(huì)影響到正常的生長(zhǎng)發(fā)育，而且對(duì)心臟造成很大損害。急性中毒常表現(xiàn)為頭暈、嘔吐、腹痛、腹泄、肌肉震顫、心跳過速、呼吸困難和神經(jīng)紊亂等癥狀，嚴(yán)重的會(huì)危及生命。下面將介紹幾種飼料中鹽酸克侖特羅（CLB）的檢測(cè)方法。

1 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

原理是抗原抗體反應(yīng)。單克隆抗體既能與CLB 結(jié)合，又能與酶標(biāo)記物相結(jié)合。當(dāng)樣品中含有鹽酸克侖特羅時(shí)，它會(huì)與酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合單抗上的結(jié)合位點(diǎn)，經(jīng)過洗滌后沒有與單抗結(jié)合的酶標(biāo)記物則被洗去。待加入基質(zhì)和發(fā)色劑后，結(jié)合的酶標(biāo)記物把無(wú)色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物，顏色的深淺和樣品中鹽酸克侖特羅的濃度有關(guān)。加入終止后，藍(lán)色變?yōu)辄S色，最后用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定。

鹽酸克侖特羅的提取，即把粉碎后的飼料加入鹽酸溶液和雙蒸水均質(zhì)，再經(jīng)旋流、振蕩、離心后，轉(zhuǎn)移出上清液用氫氧化鈉調(diào)pH 值到7～9。離心，取上清液分析測(cè)試。分別按標(biāo)準(zhǔn)稀釋溶液，擺放樣品。加入標(biāo)準(zhǔn)品到指定微孔中，再加入酶標(biāo)記物，用酶標(biāo)板密封膠紙蓋住酶標(biāo)板，渦旋混勻，在室溫下孵育1 小時(shí)。傾倒出孔中的液體，用緩沖劑清洗酶標(biāo)板3 次。加入酶標(biāo)底物到微孔中，室溫暗處孵育。反應(yīng)孔中加入終止液，劇烈振蕩5 秒鐘。用酶標(biāo)儀測(cè)定其吸光度值。

2 高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）

該方法的主要原理是用加有甲醇的稀酸溶液將飼料中的鹽酸克侖特羅鹽酸鹽溶出，溶液被堿化，經(jīng)液相萃取和固相萃取凈化后，在高效液相色譜儀上分離測(cè)定，或經(jīng)衍生后于氣相色譜-質(zhì)譜儀上分離、檢測(cè)。稱取配合飼料5g（預(yù)混料和濃縮料則稱取2g)精確至0.0001g 于100mL 三角瓶中，加入提取液（濃度為0.5%偏磷酸：甲醇=80∶20）50mL，超聲提取15分鐘,每隔5 分鐘振搖1 次，取上層液于離心機(jī)內(nèi)上4000rpm 離心10 分鐘。準(zhǔn)確吸取上清液10.00mL 于150mL 分液漏斗中，同時(shí)滴加2mol/L 氫氧化鈉溶液，調(diào)pH 至11～12。溶液分別用30mL、25mL 乙醚萃取2次，使醚層過無(wú)水硫酸鈉干燥，用少許乙醚淋洗分液漏斗和無(wú)水硫酸鈉，并用乙醚定容至50mL。再準(zhǔn)確吸取25.00mL 于50mL 燒杯中，低于50℃加熱塊或沙浴上蒸干，殘?jiān)苡?.00mL 0.02mol/L 鹽酸溶液，取1.00mL 置于預(yù)先已分別用1mL 甲醇和1mL 去離子水處理過的SPE 小柱內(nèi)，控制其過柱速度不超過1mL/min，再分別用1mLSPE 淋洗液-1（含2%氨水的5%甲醇水溶液）和2-（含2%氨水的30%甲醇水溶液）進(jìn)行充分淋洗，最后再用甲醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫液置于70+5℃加熱塊或沙浴上，最后用氮?dú)獯蹈?。向吹干的樣品中?zhǔn)確加入1.00～2.00mL 0.02mol/L 鹽酸，振搖、超聲，過0.45um 的濾膜，取上清液于高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。氣相色譜-質(zhì)譜法則于吹干的樣品中加入衍生劑BSTFA 50μL，渦旋混合后，置70+5℃烘箱中衍生反應(yīng)30 分鐘。用氮?dú)獯蹈?，加入甲?00μL 混勻于氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定。

3 液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法

原理是飼料經(jīng)鹽酸-甲醇混合溶液提取、醋酸鉛沉淀蛋白后用固相萃取小柱凈化，洗脫液蒸干后用甲酸溶解，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量。稱取2g 試樣于50mL 離心管中，準(zhǔn)確加入19mL 鹽酸甲醇提取液和飽和醋酸鉛溶液，充分振蕩20 分鐘、離心10 分鐘。固相萃取小柱用甲醇和水活化。取上清液5mL 進(jìn)行過柱，再用水和甲醇淋洗，空氣抽干2 分鐘，用氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，再用甲酸水溶液溶解，過濾膜后上機(jī)測(cè)定。

“瘦肉精” 是國(guó)家明令禁止在飼料和飼養(yǎng)過程中使用的獸藥，為此要從源頭抓起，加大飼料和養(yǎng)殖產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢測(cè)力度，加強(qiáng)市場(chǎng)的監(jiān)督抽查和監(jiān)管力度。各相關(guān)部門按照職責(zé)分工，協(xié)調(diào)配合，形成合力，強(qiáng)化對(duì)生豬養(yǎng)殖、收購(gòu)、販運(yùn)、屠宰、集貿(mào)市場(chǎng)銷售及餐飲消費(fèi)等關(guān)鍵環(huán)節(jié)的監(jiān)督管理，共同做好“瘦肉精”監(jiān)管工作。同時(shí)進(jìn)一步加強(qiáng)輿論宣傳，通過各種媒介宣傳“瘦肉精”對(duì)人體的危害。