普洱茶水浸液對(duì)人工齲齒顯微硬度的影響

陳 瑩，梁迎東，楊華甫，田富明，藍(lán) 海

（大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

普洱茶為山茶科Theaceae山茶屬Camellia多年生、常綠、大葉種喬木，處在北回歸線以南，屬熱帶北緣及東南亞熱帶地區(qū)。原產(chǎn)于我國(guó)云南省的西雙版納、思茅等地。普洱茶因?yàn)樯a(chǎn)繁榮而產(chǎn)地也不斷在擴(kuò)大，除了以上提到的西雙版納、思茅這兩地州外，昆明、臨滄、大理、玉溪、紅河、德宏等地也逐漸成為普洱茶的產(chǎn)地〔1〕。普洱茶中含有的生理活性成分，具有殺菌消毒健牙護(hù)齒的作用。湖南醫(yī)科大學(xué)曹進(jìn)教授通過(guò)普洱健齒茶進(jìn)行抑制變形球菌附著能力試驗(yàn)，從中發(fā)現(xiàn)普洱茶確實(shí)具有抗菌斑形成的作用〔2〕。但目前用顯微硬度儀測(cè)試普洱茶對(duì)牙釉質(zhì)再礦化作用的研究還未見(jiàn)報(bào)道。

齲?。╠ental caries or tooth decay）是人類常見(jiàn)的多發(fā)病之一，WHO 將齲病列在癌癥和心血管病之后，居危害人類疾病的第三位〔3〕。變異鏈球菌是口腔主要的致齲菌之一，變異鏈球菌在齲病發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)起到了舉足輕重的作用，它可以黏附于牙面生長(zhǎng)繁殖，形成牙菌斑，生長(zhǎng)代謝并產(chǎn)酸，使牙釉質(zhì)脫礦。20 世紀(jì)80 年代，因?yàn)樵俚V化現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)，人們也漸漸開(kāi)始認(rèn)識(shí)到齲病病變實(shí)際上是一個(gè)脫礦與再礦化的交替變化的過(guò)程〔4〕。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)再礦化前后離體牛切牙進(jìn)行顯微硬度測(cè)定，比較普洱生茶、熟茶對(duì)牙釉質(zhì)再礦化的影響，為普洱茶的進(jìn)一步利用與開(kāi)發(fā)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備電子天平（波特樂(lè)-托利多儀器有限公司）、303-A-I 型熱點(diǎn)恒溫培養(yǎng)箱（蕭山永發(fā)電器有限公司）、ZXQ-1全自動(dòng)金相鑲嵌機(jī)（上海維緯電子科技有限公司）、YMP-2B 金相試樣磨拋機(jī)（蘇州歐卡精密光學(xué)儀器有限公司）、402MVD型全自動(dòng)轉(zhuǎn)塔數(shù)顯顯微硬度儀（依工測(cè)試測(cè)量?jī)x器上海有限公司）、PHS-25 數(shù)字酸度計(jì)（上海鵬順科學(xué)儀器有限公司）、SY5200D超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 試劑材料脫礦液（2.2 mmol/L CaCl2、2.2 mmol/L NaH2PO4、0.05 mol/L CH3COOH pH=4.0）；再礦化液（1.5 mmol/L CaCl2、0.09 mmol/L NaH2PO4、0.15 mol/L KCl）；人工唾液（5.880 g/L NaHCO3、5.580 g/L Na2HPO4、0.340 g/L KCl、0.360 g/L MgCl2、0.282 g/L NaCl pH=5.6）；NaF溶液（20 mg/mL）；0.9%生理鹽水。以上試劑均為分析純。

普洱生茶、熟茶均購(gòu)于大理沃爾瑪超市，由普洱市圣普茶葉有限公司生產(chǎn)的圣邦普洱茶禮盒，2011年5月28日生產(chǎn)。

1.3 普洱茶水浸液的制備9.6 g茶葉浸泡于100 mL去離子水中，攪拌，煮沸后，放置1 h，過(guò)濾，進(jìn)行倍比稀釋。5個(gè)濃度分別為 96、48、24、12、6 mg/mL 生茶、熟茶的水浸液制備方法相同。

1.4 牛切牙的處理及脫礦市場(chǎng)購(gòu)買新鮮牛切牙進(jìn)行處理，除去牛切牙軟組織以及根部，將牙髓剔除，用去離子水將冠髓沖洗干凈，超聲清洗40 min，選擇無(wú)裂痕，大小合適的牛切牙，在陰涼處自然晾干后放入燒杯，加入適量（需要沒(méi)過(guò)所有牙齒）脫礦液，密封后放入37 ℃的恒溫箱保存10 d，其中第5天需要換一次脫礦液。

1.5 脫礦標(biāo)本的制備用YMP-2B 金相試樣磨拋機(jī)先在脫礦后的牛切牙釉質(zhì)上打磨出完好的牙釉質(zhì)測(cè)試面，再用ZXQ-1全自動(dòng)金相鑲嵌機(jī)將牛切牙測(cè)試面之外的其余部分用鑲嵌粉包埋，表面開(kāi)窗2 cm×4 cm。用402MVD 型全自動(dòng)轉(zhuǎn)塔數(shù)顯顯微硬度儀，在壓力200 g條件下施力15 s，于每個(gè)標(biāo)本開(kāi)窗中央垂直測(cè)試5 個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)測(cè)3 次，取平均值〔5〕。選取硬度值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)分析，P＞0.05）的72 顆牛切牙標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)樣本隨機(jī)分為12組，每組6顆，分別編為生茶96 mg/mL組、生茶48 mg/mL組、生茶24 mg/mL組、生茶12 mg/mL組、生茶6 mg/mL組、熟茶96 mg/mL組、熟茶48 mg/mL組、熟茶 24 mg/mL 組、熟茶 12 mg/mL 組、熟茶 6 mg/mL組、20 mg/mL NaF組（陽(yáng)性對(duì)照組）、去離子水組（陰性對(duì)照組）。

1.6 再礦化實(shí)驗(yàn)脫礦化的牛切牙標(biāo)本，用棉簽分別蘸取不同濃度的普洱茶水浸液、去離子水、NaF溶液涂抹，每顆牙齒均勻涂抹3次，每次約1 min，然后用人工唾液再涂抹1 min。牙齒涂抹好放入37 ℃恒溫箱中，每天涂抹4次，持續(xù)15 d〔4〕，用402MVD型全自動(dòng)轉(zhuǎn)塔數(shù)顯顯微硬度儀用上述方法測(cè)試牙釉質(zhì)硬度3次，取其平均值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)（±s）進(jìn)行方差分析〔6〕，兩兩比較用LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

表1 不同濃度普洱茶水浸液再礦化前后牙釉質(zhì)表層顯微硬度平均值（±s）

表1 不同濃度普洱茶水浸液再礦化前后牙釉質(zhì)表層顯微硬度平均值（±s）

注：再礦化前后對(duì)比，*P＜0.05，**P＞0.05。

組別生茶96 mg/mL生茶48 mg/mL生茶24 mg/mL生茶12 mg/mL生茶6 mg/mL熟茶96 mg/mL熟茶48 mg/mL熟茶24 mg/mL熟茶12 mg/mL熟茶6 mg/mL NaF 20 mg/mL去離子水再礦化前/(kg/mm2)310.35±19.26 321.52±19.99 298.30±21.06 302.00±19.91 302.00±19.34 302.00±20.63 306.70±21.86 313.60±11.93 344.15±16.51 336.98±12.38 324.80±15.83 287.58±18.45再礦化后/(kg/mm2)411.26±22.24*380.52±23.73*354.25±22.34*338.11±20.29**337.60±19.95**376.03±14.03*378.03±7.11*333.00±19.20**363.51±23.20**351.53±11.36**405.17±12.07*304.32±14.64**

采用單因素方差分析的結(jié)果顯示：釉質(zhì)脫礦標(biāo)本經(jīng) 96 mg/mL 生茶、48 mg/mL 生茶、24 mg/mL 生茶、96 mg/mL熟茶、48 mg/mL熟茶、20 mg/mL NaF處理后，各組釉質(zhì)硬度值均較基線值明顯增高（P＜0.05），說(shuō)明生茶（96、48、24 mg/mL）、熟茶（96、48 mg/mL）和20 mg/mL NaF 對(duì)脫礦牛切牙都具有再礦化能力。

用LSD 法進(jìn)行再礦化后組間比較，結(jié)果顯示：高濃度的生茶、熟茶對(duì)脫礦牛切牙再礦化均有顯著促進(jìn)再礦化作用，且生茶組和熟茶組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。但20 mg/mL NaF組與普洱茶高濃度組對(duì)脫礦牛切牙再礦化作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），即普洱茶組再礦化作用不如20 mg/mL NaF組。

其他低濃度的生茶、熟茶水浸液和去離子水再礦化前后的釉質(zhì)硬度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），對(duì)脫礦牛切牙無(wú)明顯的再礦化作用。

3 討論

在已經(jīng)脫礦的牙齒硬組織內(nèi)發(fā)生礦物質(zhì)的重新沉積并進(jìn)行結(jié)晶化稱為再礦化。再礦化可以使部分脫礦晶體恢復(fù)正常和促進(jìn)新晶體形成。其主要物質(zhì)基礎(chǔ)是磷酸鹽類〔7〕。

經(jīng)過(guò)多年的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累，人們已經(jīng)認(rèn)可NaF作為主要的防齲藥物，其防齲機(jī)制主要是影響牙形態(tài)，形成氟磷灰石，降低釉質(zhì)溶解度促進(jìn)釉質(zhì)再礦化。NaF 之所以只能保持在20 mg/mL 的低濃度安全防齲范圍，是因?yàn)榉鷿舛鹊姆€(wěn)定性、毒性、亞毒性，以及耐氟菌的出現(xiàn)等問(wèn)題現(xiàn)在并沒(méi)有解決，使NaF的應(yīng)用仍受到限制〔8〕，NaF組再礦化作用強(qiáng)于普洱茶組是因?yàn)樗菬o(wú)機(jī)化合物直接引發(fā)的離子取代及補(bǔ)給，高濃度的氟離子直接取代了牙釉質(zhì)的主要成分羥基磷灰石的羥基，形成晶格縮小、硬度大的氟磷灰石，再礦化作用強(qiáng)。普洱茶中含有氟化物和茶多酚，氟化物也能使羥基磷灰石轉(zhuǎn)化為硬度更高、穩(wěn)定性更好的氟磷灰石，另外，茶多酚中含有的的兒茶素通過(guò)對(duì)致齲菌-變形球菌所產(chǎn)生的葡糖基轉(zhuǎn)移酶（GTF）活性的抑制作用，有效控制了牙菌斑在牙面的黏附，從而達(dá)到防止牙釉質(zhì)脫礦、促進(jìn)再礦化的作用〔9〕。普洱茶的再礦化作用雖然不及化學(xué)物質(zhì)NaF，但具有天然植物所特有的安全性且云南省資源豐富。隨著研究的不斷深入，在亞熱帶地區(qū)的低氟區(qū)和適氟區(qū)，順著趨勢(shì)的發(fā)展普洱茶也將成為安全有效的防齲用茶品種之一。

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