棗果黑斑病病菌對新疆不同棗樹品種的致病性

劉曉琳，梁英梅，游崇娟，馬 榮，＊，趙景玲，潘 明

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與園藝學(xué)院，烏魯木齊 830052；2.北京林業(yè)大學(xué)標(biāo)本館，北京 100083；3.北京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，省部共建森林培育與保護(hù)教育部重點(diǎn)實驗室，北京 100083；4.新疆阿克蘇市林果業(yè)管理辦公室，阿克蘇 843300）

棗（ZiziphusjujubaMill.）在中國的栽培歷史悠久［1］，是我國極具民族特色的果品之一，富含維生素C和人體所需的微量元素，堪稱果中佳品。新疆獨(dú)特的氣候條件和豐富的光熱資源使得棗樹已成為新疆林果業(yè)發(fā)展中又一新興產(chǎn)業(yè)［2］，種植面積已突破40萬hm2，占全國總面積的近1／3，其中阿克蘇、喀什、和田、巴州、哈密等地區(qū)的棗果產(chǎn)量占到全國總產(chǎn)量的50%以上，紅棗產(chǎn)業(yè)已成為新疆農(nóng)民增收致富的支柱型產(chǎn)業(yè)。棗果病害的發(fā)生影響著紅棗產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。2010-2013年在新疆阿克蘇、和田等地區(qū)棗園里棗果黑斑病的發(fā)病率達(dá)30%［3］，病重棗園發(fā)病率高達(dá)50%［4］，果農(nóng)損失慘重。

棗樹上的黑斑病于1975年在印度哈里亞納首次在葉片上發(fā)現(xiàn)［5］。1985年，在云南‘毛葉棗’的葉片上發(fā)現(xiàn)該病害［6］，隨后在‘青棗’［7］、‘冬棗’［8］、‘梨棗’［9］、‘壺瓶棗’和‘駿棗’［10］等棗果上陸續(xù)發(fā)現(xiàn)該病害。國內(nèi)目前對于棗果黑斑病研究主要集中在防治上，通過化學(xué)方法和生物方法減少該病害造成的損失［11-14］。選育和利用抗病品種是防治植物病害最經(jīng)濟(jì)、有效的途徑［15-16］。關(guān)于棗果黑斑病菌對新疆不同棗樹品種致病性尚未開展過系統(tǒng)的研究。本研究通過對新疆阿克蘇、和田地區(qū)棗果黑斑病發(fā)生情況進(jìn)行調(diào)查，并比較病原菌對不同棗樹品種的致病性差異，為棗果黑斑病抗病品種的選育及該病害的綜合防治奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試棗樹品種與病原菌

于2014年8-10月，在新疆阿克蘇、和田地區(qū)的棗園開展棗果黑斑病發(fā)生情況調(diào)查，同時在實驗室完成病原菌對不同棗樹品種的致病性測定。供試棗樹品種詳細(xì)信息見表1。

棗果黑斑病病原菌（Alternariaalternata）由新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與園藝學(xué)院病理實驗室提供。

表1 供試棗樹品種的相關(guān)信息Table 1 Information of different jujube varieties

1.2 棗果黑斑病在田間不同棗樹品種上發(fā)生情況調(diào)查

在樣地按照5點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)選取3株樹，共15株，每株按東、南、西、北4個方位，每個方位隨機(jī)選取5個棗吊，即每株選取20個棗吊，共300個棗吊，統(tǒng)計每個棗吊掛果數(shù)量及病果數(shù)量，依據(jù)病情分級標(biāo)準(zhǔn)［17］，計算病情指數(shù)［18］。

1.3 不同接種體的制備

在純化培養(yǎng)3d 的菌落邊緣上，打取直徑為6mm的菌齡一致的菌餅，作為菌絲接種體；在純化培養(yǎng)7d的菌落上，打取直徑6mm 的菌齡一致的菌餅作為菌餅接種體；用無菌水沖洗純化培養(yǎng)7d后的病原菌PDA 平板，配成1×105個／mL 的孢子懸浮液作為接種體。

表2 棗果黑斑病病情分級標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Grading standard of jujube black spot disease

1.4 接種前棗果的處理

采集不同品種的白熟期的健康棗果，用自來水將棗果表面沖洗干凈后再用75%乙醇消毒90s，無菌水沖洗3次，自然晾干后待用。用滅菌的接種針在棗果的胴部上扎孔，傷口為直徑5mm 的圓［19］。

1.5 不同接種體對駿棗棗果的致病性測定

在處理好的駿棗的胴部，分別用菌餅和菌絲直接接種，用脫脂棉蘸取孢子懸浮液接種，每處理10個棗果，重復(fù)3次。接種后的棗果用保鮮膜包裹置于無菌托盤內(nèi)，推盤底層為無菌濾紙，注入一定無菌水保濕，將托盤用保鮮膜密封。48h后去除棗果表面的保鮮膜，十字交叉法測量病斑大小，每天觀察病斑變化［20］，通過發(fā)病情況和病斑擴(kuò)展速度篩選最優(yōu)接種體。

1.6 病原菌對不同品種棗果的致病性測定

在不同品種棗果的胴部分別按照1.4的方法處理，以1.5試驗篩選出的最佳接種體進(jìn)行接種，每品種10個棗果，重復(fù)3次，以未接病菌的培養(yǎng)基作為對照，保濕方法同1.5，48h后每天觀察棗果上病斑直徑的變化情況，直至病斑不再變化，統(tǒng)計病斑面積，計算發(fā)病棗果的病情指數(shù)。

1.7 數(shù)據(jù)分析

選用Excel和DPS軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，采用Duncan氏新復(fù)極差法（P＜0.05，P＜0.01）進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 棗果黑斑病菌在不同棗樹品種上的發(fā)生情況

田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，棗果黑斑病菌在不同棗樹品種上發(fā)病情況差異顯著，主栽品種上病害發(fā)生較為普遍，少數(shù)品種未受到危害（表3）?！E棗’上病害發(fā)病率最高，達(dá)34.35%，病情指數(shù)為8.34；其次是‘壺瓶棗’，發(fā)病率為30.12%，病情指數(shù)為4.85；在‘圓脆棗’、‘馬牙棗’和‘酸棗’上病害未發(fā)生；而在‘灰棗’、‘贊皇棗’、‘冬棗’、‘相棗’、‘板棗’、‘雞心棗’和‘金絲棗’上發(fā)病率和病情指數(shù)均較低。

表3 不同棗樹品種棗果黑斑病的田間發(fā)生情況1）Table 3 Occurrence of jujube black spot on different jujube varieties

不同地區(qū)的同一棗樹品種上病害發(fā)生情況差異不大?！E棗’在阿克蘇地區(qū)的發(fā)病率（34.35%）、病情指數(shù)（8.34）略高于和田地區(qū)（32.65%／8.26）；‘壺瓶棗’在阿克蘇的發(fā)病率（30.12%）稍高于和田地區(qū)（21.38%），但是病情指數(shù)相差不大；不同地區(qū)‘灰棗’的發(fā)病率以及病情指數(shù)相差無幾。總體來看，病害在阿克蘇地區(qū)的發(fā)生情況相對和田地區(qū)嚴(yán)重，主要由于棗果收獲期阿克蘇地區(qū)的降雨量較和田地區(qū)豐富，田間濕度較大，病害的發(fā)生相對嚴(yán)重。

2.2 病原菌不同類型接種體對駿棗棗果的致病性

采用菌餅、孢子懸浮液和菌絲3種接種體對‘駿棗’棗果開展致病性測定。結(jié)果表明不同接種體對棗果的致病性存在差異（圖1）。接種菌餅的棗果發(fā)病最早，在接種后2d棗果胴部上出現(xiàn)病斑，接種后10d病斑停止擴(kuò)展，直徑為17mm；接種孢子懸浮液的棗果接種后2d開始發(fā)病，病斑擴(kuò)展較慢，接種后10d病斑停止擴(kuò)展，直徑為9mm；接種菌絲的棗果接種后3d開始表現(xiàn)明顯病狀，接種10d病斑后停止擴(kuò)展，直徑為8mm。采用菌餅接種的棗果發(fā)病較快且病斑擴(kuò)展速度快，故選擇菌餅作為最優(yōu)接種體。

圖1 病原菌不同類型接種體對‘駿棗’棗果的致病性測定結(jié)果Fig.1 Pathogenicity of different pathogen inoculums on‘Junzao’

2.3 病原菌對不同棗樹品種棗果的致病性

病原菌接種于不同品種的棗果上均能致病，且不同品種的棗果發(fā)病癥狀一致，對照不發(fā)病。棗果接種2～3d后開始出現(xiàn)水漬狀圓形或橢圓形病斑，病斑逐漸擴(kuò)大且變黑變硬，病斑內(nèi)部果肉分離（圖2）。病原菌對不同品種的棗果致病性差異顯著（表4），致病性依次為：‘駿棗’＞‘壺瓶棗’＞‘哈密棗’＞‘相棗’＞‘板棗’＞‘酸棗’＞‘圓脆棗’＞‘雞心棗’＝‘金絲棗’＞‘贊皇棗’＝‘灰棗’＝‘冬棗’＝‘馬牙棗’；病原菌對‘駿棗’的致病性最強(qiáng)，病情指數(shù)為58，其次是‘壺瓶棗’，病情指數(shù)為40，對‘馬牙棗’、‘灰棗’、‘贊皇棗’和‘冬棗’的致病性最弱，病情指數(shù)均為20。

供試棗果中，‘冬棗’、‘雞心棗’、‘馬牙棗’和‘酸棗’在接種后3d發(fā)病，其他棗果在接種后2d發(fā)??；所有供試品種在接種后第10天病斑停止擴(kuò)展。病原菌在不同品種棗果中的病斑擴(kuò)展情況存在差異。接種后4～10d時間段內(nèi)，‘贊皇棗’、‘雞心棗’、‘灰棗’、‘圓脆棗’等品種上病斑持續(xù)緩慢擴(kuò)展；‘哈密棗’在接種后4～7d相對擴(kuò)展較慢，接種后7～10d擴(kuò)展較快；‘駿棗’、‘壺瓶棗’和‘板棗’在接種后4～10d內(nèi)持續(xù)快速擴(kuò)展。

表4 病原菌對不同品種棗果的致病性Table 4 Pathogenicity of jujube black spot on fruits of different jujube varieties

3 結(jié)論與討論

本研究通過調(diào)查不同棗樹品種棗果黑斑病的田間發(fā)生情況，發(fā)現(xiàn)‘駿棗’和‘壺瓶棗’上病害發(fā)生較為嚴(yán)重。病原菌對新疆13個棗樹品種棗果的致病性測定結(jié)果表明，病原菌對‘駿棗’棗果的致病性最強(qiáng)，其次為‘壺瓶棗’，對‘冬棗’和‘馬牙棗’的致病性最弱。病害在大果型的棗果上發(fā)生嚴(yán)重，小果型品種上相對較輕，可能與不同品種棗果的生理結(jié)構(gòu)有關(guān)。

國內(nèi)學(xué)者開展棗果黑斑病相關(guān)研究時，多數(shù)選用孢子懸浮液和菌餅作為接種體［3，8-9，21］。本試驗探討了不同接種體對致病性的影響，結(jié)果表明直接在傷口上放置菌餅的接種效果最好。

圖2 不同品種棗果接種菌餅7d后的發(fā)病癥狀Fig.2 Symptoms of different jujube varieties at 7day after inoculation by stabbing with mycelium disk

從已有報道來看，國內(nèi)紅棗產(chǎn)區(qū)棗果黑斑病的發(fā)生情況不盡相同。山東沾化棗果黑斑病主要侵染‘冬棗’的葉片和果實，其病果率一般在30%，最嚴(yán)重達(dá)80%以上［22］。山西太谷縣和交城縣的‘駿棗’和‘壺瓶棗’上病害發(fā)病率在60%左右，嚴(yán)重時達(dá)到80%以上［10］。本研究通過對新疆阿克蘇和和田地區(qū)棗園的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，‘駿棗’和‘壺瓶棗’的發(fā)病最為嚴(yán)重，發(fā)病率在30%左右，病原菌只危害‘冬棗’的果實，且發(fā)病率極低（0.46%）。由此可見，不同地域棗果黑斑病的發(fā)生情況差異較大，可能與地區(qū)間的氣候和地理環(huán)境有關(guān)［23］。

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