清熱膠囊正交優(yōu)選水提工藝*

蹇小婷 郭 冬 李彤暉 王春柳

西電集團(tuán)醫(yī)院 (西安 710077)

清熱膠囊正交優(yōu)選水提工藝*

蹇小婷 郭 冬△李彤暉△王春柳△

西電集團(tuán)醫(yī)院 (西安 710077)

目的：探索清熱膠囊提取工藝。方法：采用正交實(shí)驗(yàn)方法，選用三因素、三水平即L9(34)試驗(yàn)表安排實(shí)驗(yàn)，以方中君藥龍膽所含主要成分龍膽苦苷為指標(biāo)，用高效液相色譜法測得其含量[1]，同時(shí)測定水提干膏得率，通過方差分析，得出水提次數(shù)、加水量和水提時(shí)間最佳參數(shù)，并進(jìn)行三批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，獲得最優(yōu)水提工藝。結(jié)果：加12倍量水，煎煮2次，每次1.5h。結(jié)論：水提工藝方法科學(xué)、穩(wěn)定、可操作性強(qiáng)。

清熱膠囊來源于我院臨床長期使用的經(jīng)驗(yàn)方，由龍膽、黃柏、柴胡等10味中藥組成，具有清熱解毒，利尿通淋作用。用于心煩急躁，大便秘結(jié)，小便黃赤，或尿急，尿頻等疾病，療效顯著。臨床以湯劑使用，服用、攜帶、儲藏很不方便，因此選用服用量小、穩(wěn)定、崩解度快的膠囊劑劑型進(jìn)行研究，針對水提部分藥材用正交試驗(yàn)方法篩選工藝條件，而君藥龍膽中的龍膽苦苷具有抗炎、抗病原微生物等作用，以龍膽苦苷為指標(biāo)，兼顧水提出膏率能較全面的篩選最好水提工藝條件。

1 儀器與試藥 1.1 儀 器 日本島津Waters2690型高效液相色譜儀，UV-VIS紫外-可見檢測器,十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(250mm×4.6mm)；塞多利斯電子天平(d=0.01,北京)。

1.2 試 藥 乙腈為色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。龍膽苦苷對照品(供含量測定用，110770-201013)、對照藥材均購自中國藥品生物制品檢定所。所用中藥材均購自盛興中藥飲片廠，經(jīng)檢驗(yàn)全部符合《中國藥典》2010年版一部規(guī)定[2]。

2 方法與結(jié)果 2.1 提取正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)[3]正交實(shí)驗(yàn)因素為提取次數(shù)、提取時(shí)間及加水量，每因素選三個(gè)水平[1]。見表1。

表1 水提正交因素水平表

2.2 供試品的處理 按處方比例稱取龍膽等水提部分藥材共九份，以L9(34)表進(jìn)行試驗(yàn)，過濾提取液，定容。

2.3 干浸膏制備 精密量取各提取液50mL，分別置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)?05℃烘箱干燥5h，至恒重。放冷，迅速稱重，結(jié)果見表2。

2.4 龍膽苦苷的含量測定[4]色譜條件：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：甲醇-水(25∶75)；檢測波長為270nm；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；對照品溶液制備：精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成0.2148mg/mL的溶液，即得。供試品溶液制備：精密量取上述各提取液5mL，置10mL容量瓶中，加入甲醇定容，粗濾，再用0.45μm微孔濾膜精濾，得濾液，即得[2]。分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀測定，結(jié)果見表2。方差分析結(jié)果見表3、表4。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 因提取最佳工藝不在九組試驗(yàn)中，為此進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，從結(jié)果得出，龍膽苦苷含量及浸膏得率均高于正交表中最優(yōu)值，說明選擇提取條件合理，工藝穩(wěn)定，結(jié)果見下表5。

表2 L9(34)正交試驗(yàn)安排及數(shù)據(jù)分析表

表3 干膏方差分析

注：F0.1(2.2)=9.00， F0.05(2.2)=19.00，F(xiàn)0.01(2.2)=99

表4 龍膽苦苷方差分析

注：F0.1(2.2)=9.00， F0.05(2.2)=19.00，F(xiàn)0.01(2.2)=99

由表3顯示，提取時(shí)間、加水量、提取次數(shù)均無顯著影響，其影響順序?yàn)榧铀?提取次數(shù)>提取時(shí)間；從表4可知，提取時(shí)間、加水量、提取次數(shù)均無顯著影響，其影響順序?yàn)榧铀?提取次數(shù)>提取時(shí)間，結(jié)合大生產(chǎn)實(shí)際及耗能，因此最佳提取條件為B3C2A2，即最佳工藝為加12倍量水，提取2次，每次1.5h。

表5 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討 論 清熱膠囊水提工藝的加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)是決定藥物療效的主要因素；正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選水提工藝，指標(biāo)的選定非常關(guān)鍵。本方中的君藥為龍膽，龍膽苦苷為其主要成分[3-4]；而水溶性成分是中藥湯劑起治療作用的部分，因此以龍膽苦苷含量和水提出膏率兩個(gè)指標(biāo)作為正交實(shí)驗(yàn)評價(jià)指標(biāo)，能客觀、全面的篩選出最佳水提工藝條件。通過三批驗(yàn)證試驗(yàn)及中試放大實(shí)驗(yàn),證明該提取工藝準(zhǔn)確、簡便、可行。

[1] 李 馨,王金宏.HPLC法測定龍膽中龍膽苦苷的含量[J].黑龍江醫(yī)藥,2010,(23)3:319-320.

[2] 國家藥典委員會．中國藥典[S]． 北京：人民衛(wèi)生出版社,2010:291.

[3] 王 凌,白吉慶，李 芳，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選養(yǎng)心開郁片的水提取工藝[J].陜西中醫(yī), 2013,(33)12:1666-1667.

[4] 王艷艷,王英平.龍膽化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].特產(chǎn)研究,2006,17:68-71.

(收稿2014-12-01;修回2015-01-22)

*西安市科技計(jì)劃項(xiàng)目SF1205-(5)

色譜法,高壓液相 @清熱膠囊

R282

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.05.044

△陜西省中醫(yī)藥研究院 (西安 710003)