溫陽(yáng)利水煎對(duì)慢性心力衰竭心肌重構(gòu)鈣調(diào)磷酸酶信號(hào)通道的影響*

任得志 張軍茹 張笑崢 蘇亞秦 天津中醫(yī)藥大學(xué)(天津 300193)

溫陽(yáng)利水煎對(duì)慢性心力衰竭心肌重構(gòu)鈣調(diào)磷酸酶信號(hào)通道的影響*

任得志 張軍茹△張笑崢△蘇亞秦△天津中醫(yī)藥大學(xué)(天津 300193)

目的：觀察溫陽(yáng)利水煎對(duì)鈣調(diào)磷酸酶-活化T細(xì)胞核因子3(CaN-NFAT3)信號(hào)通路中關(guān)鍵分子表達(dá)的影響，揭示其治療心力衰竭的機(jī)制。方法：SD大鼠60只, 除空白對(duì)照組(n=10)外,其余50只采用連續(xù)腹腔注射阿霉素的方法復(fù)制大鼠慢性心力衰竭模型, 待造模成功后將動(dòng)物分為模型對(duì)照組、溫陽(yáng)利水煎治療組 (高、中、低劑量組 )與陽(yáng)性對(duì)照組(地高辛組), 用溫陽(yáng)利水煎藥液治療6周后, 測(cè)定左室及右室質(zhì)量指數(shù)，用免疫組化法檢測(cè)CaN、NFAT3在心肌組織中的表達(dá)。結(jié)果：慢性心力衰竭大鼠經(jīng)溫陽(yáng)利水煎治療,心肌細(xì)胞的變性壞死得以改善,治療組左室及右室質(zhì)量指數(shù)、CaN、NFAT3表達(dá)均低于模型組。結(jié)論：溫陽(yáng)利水煎可抑制CaN、NFAT3在心肌組織中的表達(dá)，這可能是該藥治療慢性心力衰竭作用機(jī)制之一。

慢性心力衰竭(Chronic Heart failure,CHF)是各種心臟疾病導(dǎo)致心功能不全的臨床綜合征?；舅械男呐K疾病發(fā)展到終末階段都將導(dǎo)致急慢性心力衰竭，其具有致殘率及死亡率高的特點(diǎn)。因此，慢性心力衰竭的防治成為新近研究的熱點(diǎn)。心肌重構(gòu)是CHF的病理生理基礎(chǔ)，目前認(rèn)為鈣調(diào)磷酸酶-活化T細(xì)胞核因子3(CaN-NFAT3)介導(dǎo)的信號(hào)通道在心肌細(xì)胞肥厚的發(fā)生發(fā)展中起至關(guān)重要的作用[1-3]，阻斷該信號(hào)通道可以抑制心肌細(xì)胞的肥厚，從而延緩心肌重構(gòu)及其心力衰竭的進(jìn)展。本文旨在通過(guò)建立大鼠心力衰竭模型，觀察溫陽(yáng)利水煎對(duì)CaN-NFAT3信號(hào)通道的干預(yù)作用，探討其治療心力衰竭的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康純種SD大鼠，體重180±20g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心提供。動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(陜)2012-009。

1.2 藥物及制備 溫陽(yáng)利水煎(黃芪、茯苓、丹參、防己、葶藶子、車前子、附片、桂枝) ，由陜西省中醫(yī)醫(yī)院藥劑科提供；地高辛( 賽諾菲杭州制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字320H183)。

1.3 主要試劑與儀器 普通光學(xué)顯微鏡(型號(hào)Motic BISERES,日本奧林巴斯公司)；Motic Med 6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(A)(廈門(mén)麥克奧迪公司)；FA2004電子分析天平(上海光學(xué)儀器廠)；大鼠CaN、 NFAT3 ELISA試劑盒(上海西諾生物科技有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組及給藥 SD大鼠60只, 除空白對(duì)照組(n=10)外,其余50只采用連續(xù)腹腔注射阿霉素的方法復(fù)制大鼠慢性心力衰竭模型, 造模結(jié)束后肉眼觀察大鼠狀態(tài)，若在靜息狀態(tài)下出現(xiàn)精神不振、脫毛、呼吸困難、大便溏瀉、肛周污染、腹腔積液等癥狀,表明慢性心力衰竭造模成功[4],在造模過(guò)程中死亡大鼠共5只,解剖發(fā)現(xiàn)均存在多漿膜腔積液及臟器充血，待造模成功后將動(dòng)物隨機(jī)分為模型對(duì)照組、溫陽(yáng)利水煎治療組 (高、中、低劑量組 )與陽(yáng)性對(duì)照組(地高辛組), 各組實(shí)驗(yàn)大鼠除自由飲食外，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組每天以2mL蒸餾水灌胃1次，溫陽(yáng)利水煎高、中、低劑量組每天以4mL、2mL、1mL藥液灌胃1次，地高辛組灌服0.25mg/kg，1d1次，2月后觀察各項(xiàng)指標(biāo)。

2.2 標(biāo)本采集 大鼠處死后,取出心臟,用生理鹽水將其沖洗干凈,分別稱其左室、右室重量，然后4%多聚甲醛固定24h后酒精脫水、透明、石蠟包埋，超薄切片，進(jìn)行HE染色，CaN和NFAT3均采用S-P法，按免疫組化試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

3 結(jié) 果

3.1 一般情況觀察 溫陽(yáng)利水煎高劑量組共死亡 1只, 中劑量組死亡 2只, 低劑量組死亡 1只, 模型對(duì)照組死亡2只，陽(yáng)性對(duì)照組死亡1只。用藥組大鼠精神情況明顯好于模型對(duì)照組。

3.2 心肌重構(gòu)指標(biāo)變化 與空白對(duì)照組相比，模型組左室、右室質(zhì)量指數(shù)增大明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01 )；與模型組相比，溫陽(yáng)利水煎各組和地高辛組左室、右室質(zhì)量指數(shù)均顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05 )； 與地高辛組比較，溫陽(yáng)利水煎低劑量組左室、 右室質(zhì)量指數(shù)升高， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05 )；而溫陽(yáng)利水煎高、中劑量組與地高組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05 )，見(jiàn)表1。

表1 各組心肌重構(gòu)指標(biāo)測(cè)定±s)

注：與空白組比較，▲P<0.01；與模型組比較,△P<0.05；與地高辛組比較,◇P<0.05

3.3 心肌組織中CaN、NFAT3的表達(dá) 見(jiàn)表2。

表2 心肌組織中CaN、NFAT3的表達(dá)

注：與空白組比較，▲P<0.01；與模型組比較,△P<0.05；與地高辛組比較,◇P<0.05

與空白對(duì)照組相比，模型組CaN、NFAT3在心肌細(xì)胞的積分光密度值顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01 )；與模型組相比較，溫陽(yáng)利水煎各組和地高辛組CaN、NFAT3的積分光密度值均減低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05 )； 與地高辛組比較，溫陽(yáng)利水煎中、低劑量組CaN、NFAT3的積分光密度值升高， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05 )；而溫陽(yáng)利水煎高劑量組與地高辛組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05 )。

4 討 論 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)心力衰竭病理生理機(jī)制研究有了顯著進(jìn)展，已明確認(rèn)識(shí)心力衰竭發(fā)生發(fā)展的基本機(jī)制是心肌重塑，目前認(rèn)為鈣調(diào)磷酸酶-活化T細(xì)胞核因子3(CaN-NFAT3)介導(dǎo)的信號(hào)通道在心肌細(xì)胞肥厚的發(fā)生發(fā)展中起至關(guān)重要的作用[1-3]，阻斷該信號(hào)通可以抑制心肌細(xì)胞的肥厚，從而延緩心肌重構(gòu)及其心力衰竭的進(jìn)展。心力衰竭近幾年治療雖取得療效，但其遠(yuǎn)期療效不能令人滿意，死亡率仍居高不下，且西藥毒副作用相對(duì)較大，其對(duì)各種舒張功能不全的心力衰竭的治療幾乎沒(méi)有特效藥[5]。而中醫(yī)對(duì)心力衰竭的證候研究、病因病機(jī)的探討以及治療方面都積累了一定經(jīng)驗(yàn)，與西醫(yī)相比具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，對(duì)收縮性和舒張性的急慢性心力衰竭均有明顯的療效，明顯改善患者的生活質(zhì)量。

溫陽(yáng)利水煎是我省名老中醫(yī)蘇亞秦主任醫(yī)師在長(zhǎng)期臨床應(yīng)用的基礎(chǔ)上創(chuàng)制的，其認(rèn)為心力衰竭主要是心肺脾腎四臟陽(yáng)氣受損，致使氣化失司、血瘀脈阻、水濕內(nèi)停等本虛標(biāo)實(shí)改變有關(guān)。治宜溫陽(yáng)益氣治其本，利水消腫治其標(biāo)，以活血化瘀貫串治療始終。前期藥理學(xué)和臨床證實(shí)其主要有正性肌力、擴(kuò)張阻力血管、明顯改善肺循環(huán)的作用，從而顯著改善心臟整體功能，減輕肺水腫，減少胸腹腔滲液量，糾正心力衰竭[6]，但就其具體機(jī)制尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，溫陽(yáng)利水煎能明顯降低心衰大鼠左、右心室質(zhì)量指數(shù)，改善心肌重構(gòu)，同時(shí)，本課題從CaN-NFAT3介導(dǎo)信號(hào)通道這一分子生物學(xué)機(jī)制入手，表明溫陽(yáng)利水煎能明顯抑制心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞CaN 及 NFAT 3 的表達(dá)，從而抑制心肌重構(gòu)，改善心衰，這可能是該藥治療慢性心力衰竭作用機(jī)制之一。

[1] Berry JM，LeV，Rotter D，Battiprolu PK，et al. Reversibility of adverse， calcineurin-dependent cardiac remodeling [J]. CircRes，2011，109(4)：407-417.

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[5] 喻本桐，骨髓干細(xì)胞心肌移植治療缺血性心臟病的研究進(jìn)展[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2006,35(2):236-238.

[6] 蘇亞秦. 溫陽(yáng)利水煎治療充血性心力衰竭30例[J].陜西中醫(yī)，2004,15(3):98-99.

(收稿2014-08-11；修回2014-09-24)

The effects of Wenyang Lishui decoction on calcineurin signal pathway of rats with chronic heart failure

Tianjin University of Traditional Chinese Medicine(Tianjin 300193)

Ren Dezhi Zhang Junru Zhang Xiaozheng et al

Objective：To observe the effect of wenyang lishui decoction calcineurin signal pathway of rats with chronic heart failure to explore the possible mechanism on treatmenting heart failure. Method：Except for the blank group(n=10) ,Adria mycin was given intraperitoneally to fifty SPF grade SD rats to copy the model of heart failure . The heart failure rats were divided into model group,wenyang lishui decoction treating group( high , middle and low dose group) and the positive control group(dioxin group). Giving wenyang lishui decoction to the treatment group for 6 weeks , then detect the the left ventricular weight index,right ventricular weight index,CaN and NFAT 3 protein expression. Results：After treatmen, the indexes of hemodynamics in heart failure rats can be improved ,The levels of left ventricular weight index,right ventricular weight index,CaN and NFAT 3 protein expression in treatment significantly reduced.Conclusions：Wenyang lishui decoction can inhibit the expressions of CaN and NFAT3 in the cardiac index, and this maybe a mechanism in postponing the process of the heart failure.

Chronic heart failure/traditional Chinese medicine therapy Wenyang lishui decoction Immunohistochemistry Animal Experimentation Rats

*陜西省自然科學(xué)基礎(chǔ)項(xiàng)目(2014JM4147)

心力衰竭/中醫(yī)藥療法 溫陽(yáng)利水 免疫組織化學(xué) 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 大鼠

R54

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.01.059

△陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安 710003)