發(fā)酵中藥添加劑對(duì)肉仔雞免疫機(jī)能和抗氧化機(jī)能的影響

安勝英，馬學(xué)會(huì)，劉觀忠

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，保定 071000)

發(fā)酵中藥添加劑對(duì)肉仔雞免疫機(jī)能和抗氧化機(jī)能的影響

安勝英，馬學(xué)會(huì)，劉觀忠

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，保定 071000)

本試驗(yàn)旨在研究發(fā)酵中藥制劑對(duì)肉仔雞免疫機(jī)能和抗氧化機(jī)能的影響。發(fā)酵中藥是將中藥粉劑(組方為黃芪、貫眾、板藍(lán)根、何首烏、山楂、女貞子、艾葉)按比例加入六神曲、淀粉、水混勻，在30 ℃的生化培養(yǎng)箱中發(fā)酵48 h制得。為了檢測(cè)該制劑的使用效果，特做以下試驗(yàn)：180只1日齡雄性AA肉仔雞隨機(jī)分為3個(gè)處理，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞，分別飼喂日糧：A組，飼喂基礎(chǔ)日糧；B組，飼喂基礎(chǔ)日糧+0.5%中藥；C組，飼喂基礎(chǔ)日糧+0.5%發(fā)酵中藥。試驗(yàn)結(jié)果表明：(1)與空白對(duì)照組相比，發(fā)酵中藥顯著提高了3周齡仔雞胸腺指數(shù)(P<0.05)、血清溶菌酶的活性(P<0.05)、6周齡仔雞血漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活性(P<0.05)，顯著降低了6周齡仔雞腿肌MDA含量(P<0.05)；(2)與中藥對(duì)照組相比，發(fā)酵中藥顯著提高了3周齡仔雞胸腺指數(shù)(P<0.05)、ND抗體水平(P<0.05)。結(jié)果表明，發(fā)酵中藥顯著改善肉仔雞的免疫機(jī)能和抗氧化機(jī)能，其使用效果優(yōu)于中藥組。

肉仔雞；發(fā)酵中藥；免疫機(jī)能；抗氧化機(jī)能

中草藥是我國(guó)寶貴的文化遺產(chǎn)，是幾千年來(lái)中華民族同疾病作斗爭(zhēng)的智慧結(jié)晶，隨著對(duì)中藥制劑的深入研究，微生物發(fā)酵中藥作為一種新的中藥炮制方法日益受到人們的重視，與中藥相比，發(fā)酵中藥具有明顯優(yōu)勢(shì)。張文等[1]報(bào)道，與未發(fā)酵中藥復(fù)方相比，經(jīng)過(guò)芽孢菌7348發(fā)酵后的中藥對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌具有抑制作用或顯著抑制作用，對(duì)金黃色葡萄球菌具有顯著或極顯著的抑制作用；崔聰[2]研究證明，山茱萸發(fā)酵后對(duì)自由基清除率有大幅度的提高，尤其是山茱萸嗜酸乳桿菌發(fā)酵組的效果最好；韓春楊等[3]利用自制菌液發(fā)酵中藥后制得發(fā)酵中藥，該制劑顯著提高了肉雞免疫機(jī)能、改善了生產(chǎn)性能；劉觀忠等[4]報(bào)道，利用六神曲中的酵母菌發(fā)酵中藥制得的發(fā)酵中藥顯著提高了肉仔雞生產(chǎn)性能，改善了血液生化指標(biāo)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證發(fā)酵中藥的實(shí)際應(yīng)用效果，本研究對(duì)發(fā)酵中藥添加劑對(duì)肉仔雞免疫機(jī)能和抗氧化機(jī)能的影響進(jìn)行了檢測(cè)，旨在為發(fā)酵中藥在家禽上的合理應(yīng)用提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與日糧

180只1日齡雄性AA肉仔雞隨機(jī)分為3個(gè)處理，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞，分別飼喂日糧：A空白對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；B中藥對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧+0.5%中藥；C發(fā)酵中藥組飼喂基礎(chǔ)日糧+0.5%發(fā)酵中藥。日糧配方及免疫程序另文報(bào)道[2]，其他按常規(guī)進(jìn)行。

1.2 中藥及發(fā)酵中藥制劑的制備

中藥組方：黃芪、貫眾、板藍(lán)根、何首烏、山楂、女貞子、艾葉，將上述7味中藥粉碎，過(guò)60目篩，按一定比例混合即得中藥粉劑；發(fā)酵中藥組是將上述中藥粉劑加六神曲、淀粉、水按比例混勻，手握成團(tuán)，撒開即散為宜，裝入發(fā)酵罐中，壓實(shí)密封，在30 ℃生化培養(yǎng)箱中密封發(fā)酵48 h。

1.3 樣品采集及分析方法

在21和42日齡，每個(gè)重復(fù)取1只雞頸靜脈放血，屠宰，摘除脾、胸腺、法氏囊，分別稱重；接血分離血清和血漿各一份并分裝，于-30 ℃冷凍保存，血清用于測(cè)定免疫指標(biāo)，血漿用于測(cè)定抗氧化指標(biāo)；在仔雞腿肌相同部位取樣，4 ℃冰箱冷藏，24 h后制成10%的組織勻漿，用于測(cè)定肌肉中MDA含量和SOD活性。

1.3.1 免疫器官指數(shù) 免疫器官指數(shù)= 器官重量/活體體重×100%。

1.3.2 血清溶菌酶活性、球蛋白含量、NDV抗體水平 血清溶菌酶活性利用比濁法測(cè)定，血清與應(yīng)用菌液反應(yīng)后，根據(jù)透光度計(jì)算溶菌酶含量。

血清球蛋白(GLB)由總蛋白和白蛋白之差求出，血清總蛋白(TP)用雙縮脲法，血清白蛋白(ALB)用溴甲酚綠比色法，以上試劑盒均購(gòu)自于南京建成生物工程研究所，按照說(shuō)明書進(jìn)行測(cè)定。

NDV抗體水平用微量法紅細(xì)胞凝集抑制(HI)試驗(yàn)測(cè)定。

1.3.3 抗氧化機(jī)能 總超氧化物歧化酶(T-SOD)采用黃嘌呤氧化法測(cè)定；血漿及腿肌中MDA的測(cè)定：采用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活性(GSH-PX)以催化GSH的反應(yīng)速度來(lái)表示。腿肌勻漿蛋白質(zhì)測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法(CBB)，試劑盒均為南京建成生物公司產(chǎn)品，嚴(yán)格按照說(shuō)明測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0的One-Way ANOVA進(jìn)行單因素方差分析，采用LSD法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)差異性以P<0.05為顯著水平。

2 結(jié) 果

2.1 免疫器官指數(shù)

在第3周齡，發(fā)酵中藥組肉雞胸腺指數(shù)顯著(P<0.05)高于其他各組，在第6周齡，各個(gè)免疫器官指數(shù)之間沒(méi)有顯著差異(表1)。

2.2 血清溶菌酶的活性、球蛋白含量和ND抗體水平

第3周齡，發(fā)酵中藥組溶菌酶活性顯著高于空白組(P<0.05)，而中藥組肉仔雞血清中球蛋白水平(P<0.05)、ND抗體水平(P<0.05)顯著降低，到第6周齡，中藥組球蛋白含量顯著升高(P<0.05)，而溶菌酶的活性、ND抗體水平各組之間差異均不顯著(表2)。

2.3 仔雞抗氧化機(jī)能

結(jié)果表明，6周齡發(fā)酵中藥(P<0.05)和中藥組(P<0.05)的仔雞血漿的GSH-PX活性都顯著升高，發(fā)酵中藥組(P<0.05)，中藥組(P<0.05)腿肌的MDA含量都顯著降低(表3)。

表1 肉仔雞免疫器官指數(shù)

Table 1 Immune organ index of broilers %

周齡Week分組Group胸腺指數(shù)Thymusindex脾臟指數(shù)Spleenindex法氏囊指數(shù)BursalindexA0.16±0.01b0.10±0.020.18±0.023周3weekB0.17±0.02b0.16±0.020.15±0.03C0.23±0.02a0.11±0.010.21±0.03A0.15±0.020.24±0.030.13±0.016周6weekB0.14±0.030.18±0.030.12±0.02C0.15±0.030.14±0.030.12±0.04

a，b.表中同列平均值肩標(biāo)字母無(wú)相同者差異顯著(P<0.05)。下同

a，b.Means in the same column without common superscripts differ significantly(P<0.05).The same as below

表2 肉仔雞血清免疫指標(biāo)

Table 2 Serum immune indexes of broilers

周齡Week分組Group溶菌酶/(U·mL-1)Lysozyme球蛋白/(g·L-1)GlobulinND抗體/(Log2)NDantibodyA165.56±14.28b9.68±1.14a7.50±0.29a3周3weekB234.72±17.36ab4.58±1.06b5.00±0.00bC302.06±20.35a8.23±1.12ab7.00±1.08aA283.62±24.783.49±2.04b5.33±1.206周6weekB245.59±24.2710.86±2.24a4.00±0.41C292.58±51.278.22±1.90a3.75±0.25

表3 肉仔雞抗氧化機(jī)能

Table 3 Antioxidant ability of broilers

分組Group血漿T-SOD/(U·mL-1)PlasmaT-SOD血漿GSH-PX/(U·mL-1)PlasmaGSH-PX血漿MDA/(nmol·mL-1)PlasmaMDA腿肌SOD/(U·mg-1)ThighSOD腿肌MDA/(nmol·mg-1)ThighMDAA158.78±7.152449.59±167.13b6.85±0.1025.60±4.881.38±0.34aB175.06±6.913334.71±293.15a6.51±0.7027.72±3.830.64±0.08bC169.22±7.133178.42±212.12a6.09±0.5429.67±8.520.37±0.12b

3 討 論

本中藥組方依據(jù)中獸醫(yī)理論，辨證論治的原則制定。黃芪、首烏、女貞子有補(bǔ)血、養(yǎng)肝腎作用；貫眾、板藍(lán)根、艾葉，能清熱解毒、驅(qū)蟲、避穢，用于預(yù)防疾病；山楂消積導(dǎo)滯，有促進(jìn)消化吸收作用?？v觀全方，本方調(diào)節(jié)陰陽(yáng)平衡，提高機(jī)體的正氣，可以減少多種疾病，控制腸道寄生蟲，從而促增重，改善肉品質(zhì)。現(xiàn)代大量研究表明，黃芪多糖[5-6]、黃芪復(fù)方[7]、女貞子[8]、復(fù)方女貞子[9-10]不同程度提高了動(dòng)物免疫功能。然而在本研究中，中藥方的實(shí)際應(yīng)用效果并不理想，中藥組雖然提高了溶菌酶的活性，提高了GSH-PX的活性，降低了腿肌中MDA的含量，但是對(duì)球蛋白產(chǎn)生的影響是先抑制，后促進(jìn)。說(shuō)明中藥發(fā)揮效果可能有時(shí)間效應(yīng)，另外第3周仔雞抗體水平受到抑制，這說(shuō)明中藥的使用也可能產(chǎn)生一定的副作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵中藥組的使用效果優(yōu)于空白組和中藥組，與空白組相比，發(fā)酵中藥顯著提高了第3周齡仔雞胸腺指數(shù)、血清溶菌酶的活性。胸腺是動(dòng)物機(jī)體的3個(gè)重要的免疫器官之一，發(fā)酵中藥促進(jìn)了胸腺的早期發(fā)育，有利于提高機(jī)體早期的細(xì)胞免疫機(jī)能；溶菌酶是由巨噬細(xì)胞合成的一種重要水解酶，為機(jī)體非特異性免疫因子之一，可以反映細(xì)胞免疫功能和機(jī)體抗感染能力[11]。因此溶菌酶的活性的提高，有利于提高機(jī)體非特異性免疫機(jī)能。與中藥組相比，發(fā)酵中藥組仔雞3周齡仔雞胸腺指數(shù)、ND抗體水平都顯著高于中藥組。說(shuō)明了發(fā)酵中藥組細(xì)胞免疫、體液免疫機(jī)能都優(yōu)于傳統(tǒng)中藥。

韓春楊等[3]指出，微生物發(fā)酵中藥是一種新的中藥炮制方法，通過(guò)微生物的降解作用，最大限度地提取藥物的有效成分和活性物質(zhì)，并生成新的藥物成分，這可能是中藥發(fā)酵后藥效增強(qiáng)的主要機(jī)制。并且該作者通過(guò)檢測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)中藥中的一些成分經(jīng)過(guò)發(fā)酵后含量增加1～4倍，并且產(chǎn)生了某些新的特征吸收峰；而秦俊杰[12]研究發(fā)現(xiàn)，利用從動(dòng)物腸道中分離出的某菌株對(duì)中藥黃芪、黨參進(jìn)行發(fā)酵，極顯著提升了黃芪多糖和黨參多糖的含量，最高分別增加了80%和90%；崔聰?shù)萚2]研究發(fā)現(xiàn)山茱萸多糖經(jīng)過(guò)菌種發(fā)酵后，小分子成分含量明顯增加，大分子的多糖含量明顯下降；朱新術(shù)[13]研究表明利用篩選的某乳酸菌株發(fā)酵黃芪后，微生物與中藥之間產(chǎn)生了協(xié)同效果，粗多糖得率提高了131%，菌體濃度提高了110%。微生物與中藥之間存在協(xié)同效應(yīng)[14]，有可能也是發(fā)酵中藥發(fā)揮藥效的作用機(jī)理之一。本研究中所用六神曲含有大量的酵母菌和少量的乳酸菌，復(fù)方中藥通過(guò)酵母菌、乳酸菌發(fā)酵后，中藥中的成分、以及各成分的含量可能發(fā)生了某些改變，鑒于本次試驗(yàn)條件的局限性，僅對(duì)發(fā)酵中藥制劑使用效果進(jìn)行了初步測(cè)定，其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步的研究。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)，與空白組相比，發(fā)酵中藥顯著提高了3周齡仔雞胸腺指數(shù)、血清溶菌酶的活性、6周齡仔雞血漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活性，顯著降低了6周齡腿肌MDA含量；與中藥對(duì)照組相比，發(fā)酵中藥顯著提高了5周齡仔雞胸腺指數(shù)、ND抗體水平。結(jié)果表明，發(fā)酵中藥顯著改善肉仔雞的免疫機(jī)能和抗氧化機(jī)能，其應(yīng)用效果優(yōu)于中藥組。

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(編輯 郭云雁)

Effects of Fermented Chinese Herbs on Immunity and Antioxidant Ability of Broilers

AN Sheng-ying，MA Xue-hui，LIU Guan-zhong

(CollegeofAnimalScience&Technology，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071000，China)

The experiment was conducted to study the effects of fermented Chinese herbs on immune function and antioxidant ability of broilers.The traditional Chinese herbs(Astragalus，Dryopteris crassirhizoma，Radix isatidis，Polygonum multiflorum，F(xiàn)ructus crataegi，Ligustrum lucidum，Argy wormwood leaf) were mixed evenly in proportion with medicated leaven，starch and water，then fermented under 30 ℃ for 48 h in biochemical incubator.In order to test the effects of the fermented herbs，animal trial was carried out as follows.180 one-day-old male AA broiler chicks were randomly divided into 3 treatments，6 replicates per treatment，10 birds each replicate.The different treatments were fed the following diets：A group，fed basal diet；B group，fed basal diet +0.5% Chinese herbs；C group，fed basal diet +0.5% fermented Chinese herbs.The results showed that：(1) Compared with A group，fermented Chinese herbs significantly improved the thymus index(P<0.05)，serum lysozyme activity of broilers at 3 week(P<0.05)，improved plasma GSH-Px activity at 6 week(P<0.05)，decreased MDA content in thigh muscle of broilers at 6 week(P<0.05)；(2) Compared with B group，fermented Chinese herbs significantly improved the thymus index(P<0.05)，ND antibody level of broilers at 3 week(P<0.05).Overall，the immune function and antioxidant ability of broilers can be improved by the fermented Chinese herbs，which have better applicational effect than the herbs.

broiler；fermented Chinese herb；immunity ability；antioxidant ability

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.05.025

2014-08-14

河北省科技支撐項(xiàng)目( 09224015)

安勝英(1972-)，女，河北藁城人，博士，主要從事家禽生產(chǎn)與家禽營(yíng)養(yǎng)研究，E-mail：asybluesky@163.com

S831；S815.5

A

0366-6964(2015)05-0863-05