HPLC法測定甲硫酸新斯的明注射液的含量

孫 莉

(安徽省蕪湖市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽蕪湖 241001)

甲硫酸新斯的明是一種抗膽堿酯酶藥，常用于重癥肌無力、手術(shù)后功能性腸脹氣及尿潴留等病的治療，也能發(fā)揮改善眼睛調(diào)節(jié)功能，減輕眼結(jié)膜充血的作用。對于其制劑甲硫酸新斯的明注射液的含量測定，《中國藥典》則采用半微量定氮法［1]，該方法取樣量，操作繁瑣，結(jié)果誤差大。經(jīng)過系統(tǒng)的試驗(yàn)，筆者采用HPLC法測定甲硫酸新斯的明注射液中甲硫酸新斯的明的含量，方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，獲得了滿意的結(jié)果。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀;紫外檢測器(美國安捷倫公司);梅特勒-托利多AB265-S電子分析天平(德國梅特勒-托利多公司);UV-3900紫外可見分光光度計(jì)(日本日立公司)。甲硫酸新斯的明對照品(批號(hào):100550-200401，中國藥品生物制品檢定所);甲硫酸新斯的明注射液4批(上海信誼金朱藥業(yè)有限公司，批號(hào)120412;上海信誼金朱藥業(yè)有限公司，批號(hào)120706;河南潤弘制藥股份有限公司，批號(hào)1208171;河南潤弘制藥股份有限公司，批號(hào)1302011);乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為二次去離子水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱:Agilent ZORAX Eclipse XDB C18(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:0．05 moL·L－1磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié) pH 為 3．0)—乙腈(90∶10)，流速為 1．0 mL·min－1，檢測波長為215 nm，進(jìn)樣量:10 μL，柱溫:室溫。理論塔板數(shù)按甲硫酸新斯的明峰計(jì)算應(yīng)不小于2 000，甲硫酸新斯的明與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求，2．2項(xiàng)下溶液的色譜圖見圖1(a～b)。

2．2 溶液的制備

2．2．1 對照品溶液的制備 精密稱取甲硫酸新斯的明對照品10．20 mg，置20 mL量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2．2．2 供試品溶液的制備 取本品，用水稀釋制成每1 mL中含甲硫酸新斯的明0．5 mg的溶液，作為供試品溶液。

2．3 線性關(guān)系考察 精密稱取甲硫酸新斯的明對照品51．00 mg，置50 mL量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲(chǔ)備液。精密量取對照品儲(chǔ)備液1．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0 mL 分別置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，按擬定的色譜條件進(jìn)行檢測，記錄色譜圖，以甲硫酸新斯的明濃度(g·L－1)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作線性回歸，得回歸方程 Y=171．75+18 694X，r=0．999 9。表明甲硫酸新斯的明在0．102 ～1．02 g·L－1濃度范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2．4 精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取同一種對照品溶液(0．51 g·L－1)，在上述色譜條件下，重復(fù)測定6次，每次10μL，甲硫酸新斯的明峰面積的RSD為0．049%(n=6)，表明精密度良好。

分別取同一批甲硫酸新斯的明注射液(批號(hào):120706)共6份，在上述色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖，甲硫酸新斯的明含量測定的RSD為0．046%，表明本法重復(fù)性好。

分別取同一種對照品溶液(0．51 g·L－1)，在室溫下放置，分別于 0、2、4、6、8 h 進(jìn)樣，記錄色譜圖。甲硫酸新斯的明峰面積的RSD為0．17%，表明溶液的穩(wěn)定性良好。

2．5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的供試品溶液(120706)2 mL各9份，置10 mL容量瓶中，分別加入對照品溶液(1．02 g·L－1)0．8、1．0、1．2 mL 各 3份，用水稀釋至刻度，搖勻，按2．1項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣。記錄色譜圖與峰面積，本方法的平均回收率為99．57%，RSD為0．95%符合要求。

2．6 專屬性試驗(yàn)

2．6．1 酸降解溶液的配制 精密量取甲硫酸新斯的明注射液(批號(hào):120706)1 mL，置10 mL量瓶中，加5 mol·L－1鹽酸溶液 100 μL，放置 30 min，加 5 mol·L－1氫氧化鈉溶液100μL，加水稀釋至刻度，搖勻。

第三，企業(yè)所得稅。抵債資產(chǎn)的公允數(shù)據(jù)以及繳納的其他稅收金額是企業(yè)所得稅的計(jì)稅基礎(chǔ)。重組債權(quán)的計(jì)稅成本是貸款資產(chǎn)以及表內(nèi)所需收取的利息，另外還需要對收到的抵債資產(chǎn)的公允價(jià)值與計(jì)稅成本之間的差異，明確當(dāng)期的利潤或損失，并對所需繳納得稅款進(jìn)行計(jì)算。抵債資產(chǎn)在持有環(huán)節(jié)獲取的收益(如抵債資產(chǎn)用于租賃所發(fā)生的其他業(yè)務(wù)收入扣除其他業(yè)務(wù)支出后的差額)需按照規(guī)定申報(bào)繳納企業(yè)所得稅；商業(yè)銀行抵債資產(chǎn)處置收入，應(yīng)當(dāng)按照抵債資產(chǎn)在處置環(huán)節(jié)的收入和支出申報(bào)繳納企業(yè)所得稅。

2．6．2 堿降解溶液的配制 精密量取甲硫酸新斯的明注射液(批號(hào):120706)1 mL，置10 mL量瓶中，加5 mol·L－1氫氧化鈉溶液 100 μL，放置 30 min，加5 mol·L－1鹽酸溶液100μL，加水稀釋至刻度，搖勻。

2．6．3 光降解溶液的配制 將甲硫酸新斯的明注射液(批號(hào):120706)，置太陽光下放置24 h后，即得。

2．6．4 熱降解溶液的配制 將甲硫酸新斯的明注射液(批號(hào):120706)，置100℃水浴中加熱3 h后，即得。

按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖(圖1 c～f)。結(jié)果顯示，本品在強(qiáng)酸和強(qiáng)堿破壞條件下，在保留時(shí)間為3．5 min附近降解物峰面積增大明顯，雜質(zhì)個(gè)數(shù)無明顯增加，而在加熱和光照條件下，樣品降解不明顯，在此色譜條件下，主峰的分離度約為8．5，表明該方法專屬性良好。

2．7 檢測限和定量限 取對照品溶液(0．102 g·L－1)用水稀釋若干倍，在上述色譜條件下測定，以信噪比S/N=3計(jì)算檢測限，甲硫酸新斯的明檢測限約為1．0 ng。以信噪比S/N=10估算定量下限，約為4．0 ng。實(shí)配4．0 ng稀溶液，經(jīng)檢測通過。

2．8 樣品含量測定 精密量取本品適量，加水稀釋制成每1 mL中約含0．5 mg的溶液，作為供試品溶液。精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取甲硫酸新斯的明對照品，同法操作，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得，結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

參照《中國藥典》有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下，筆者將流動(dòng)相0．05 moL·L－1磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH 為 3．0)—乙腈(90∶10)和 0．05 moL·L－1磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié) pH為 3．0)—乙腈(90∶10)(含0．001 5 moL·L－1庚烷磺酸鈉)進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)0．001 5 moL·L－1庚烷磺酸鈉對主峰的峰形及塔板無明顯改善，故選擇了相對簡單的前者作為流動(dòng)相。

從表1數(shù)據(jù)可以看出，藥典采用的半微量定氮法所測得結(jié)果相對于液相方法均高出3% ～6%，可見藥典方法的誤差因素較多，而本文所采用的HPLC法檢測甲硫酸新斯的明的含量結(jié)果可靠，可用于甲硫酸新斯的明注射液的質(zhì)量控制。

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