養(yǎng)心通脈有效部位方對(duì)BMSCs移植心血瘀阻證心肌的實(shí)驗(yàn)研究

陳 夏 鄭景輝， 李勇華 袁肇凱 孫貴香 簡(jiǎn)維雄 黃獻(xiàn)平

(1 廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，南寧，530011； 2 湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷研究所，長(zhǎng)沙，410007； 3 重慶三峽醫(yī)藥高等專科學(xué)校，萬(wàn)州，404020)

養(yǎng)心通脈有效部位方對(duì)BMSCs移植心血瘀阻證心肌的實(shí)驗(yàn)研究

陳 夏1鄭景輝1，2李勇華3袁肇凱2孫貴香2簡(jiǎn)維雄2黃獻(xiàn)平2

(1 廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，南寧，530011； 2 湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷研究所，長(zhǎng)沙，410007； 3 重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，萬(wàn)州，404020)

目的：觀察養(yǎng)心通脈部位方(Active Principle Region of Yangxing Tongmai Formula，apr-YTF)對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Mesemchymal Stem Cells，BMSCs)移植心血瘀阻證心肌后分化為心肌樣細(xì)胞的作用。方法：采用“冠脈結(jié)扎法”結(jié)合血流變學(xué)改變建立大鼠心血瘀阻證模型。然后將大鼠分為(apr-YTF)+BMSCs組、集落刺激因子(rhG-CSF)+BMSCs組、NS+BMSCs組、NS+DMEM組。原代培養(yǎng)大鼠BMSCs，體外溴氮胞苷(5-bromouracil Deoxyriboside Brdu)標(biāo)記后注射至大鼠心肌，采用雙染法觀察心肌組織中心肌結(jié)蛋白Desmin-Brdu和肌球蛋白重鏈(Myosin Heavy Chain MHC)-Brdu的表達(dá)。結(jié)果：apr-YTF干預(yù)BMSCs移植心血瘀阻證心肌28 d后經(jīng)心肌結(jié)蛋白Desmin-Brdu抗體染色后，NS+DMEM組梗死邊緣未見(jiàn)雙染表達(dá)，在NS+BMSCs組、(rhG-CSF)+BMSCs和(apr-YTF)+BMSCs組均可有猩紅色Brdu抗體和棕色Desmin蛋白的同時(shí)表達(dá)，其中(rhG-CSF)+BMSCs和(apr-YTF)+BMSCs組陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)高于NS+BMSCs組(P<0.05)；(rhG-CSF)+BMSCs組和(apr-YTF)+BMSCs組兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：apr-YTF能促使移植于心血瘀阻證心肌環(huán)境后BMSCs向心肌細(xì)胞的方向分化。

養(yǎng)心通脈有效部位方；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；心肌梗死/中醫(yī)藥療法；細(xì)胞移植

BMSCs具有多向分化潛能，具有明顯的環(huán)境依賴性，在不同的誘導(dǎo)條件BMSCs可被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞[1-3]等多種組織細(xì)胞。BMSCs移植缺血心肌后可促進(jìn)心肌再生、改善心臟功能[4-5]。在本課題組前期研究中也得到證實(shí)養(yǎng)心通脈部位方(Active Principle Region of Yangxing Tongmai Formula，apr-YTF)能促進(jìn)骨髓干細(xì)胞動(dòng)員入血，并定向歸巢于梗死心肌，其作用與重組人粒細(xì)胞集落刺激因子大體相當(dāng)，在歸巢CD34+細(xì)胞方面甚至強(qiáng)于重組人粒細(xì)胞集落刺激因子，是一種良好的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞動(dòng)員劑[6]。當(dāng)前對(duì)于BMSCs向心肌樣分化的研究重點(diǎn)主要集中在對(duì)其所處微環(huán)境的改善方面。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，復(fù)制心梗心血瘀阻證模型，進(jìn)行同種異體BMSCs移植。使用傳統(tǒng)的活血化瘀名方apr-YTF進(jìn)行干預(yù)，進(jìn)一步了解了解中醫(yī)藥在BMSCs移植后存活分化過(guò)程中的作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 取BMSCs選用6～8周齡清潔級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量(130±20)g，造模大鼠(240±20) g，購(gòu)自湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物處置符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(湘)2009-0004。

1.2 主要試劑 培養(yǎng)基L-DMEM，美國(guó)GIBCO公司；特級(jí)胎牛血清，北京Hyclone公司；5-氮胞苷，美國(guó)Sigma公司；養(yǎng)心通脈有效部位方，由中南大學(xué)藥學(xué)院依本課題組穩(wěn)定的制作工藝制作提供[7]，用時(shí)用蒸餾水稀釋。FITC標(biāo)記CD11b、CD45、CD90抗體，美國(guó)SERANTEC公司；小鼠抗大鼠Desmin和MHC抗體，武漢博士德公司；Trizol，美國(guó)Invitrogen公司。重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(rhG-CSF)，齊魯制藥有限公司(國(guó)藥準(zhǔn)字S19990049，批號(hào)：20121202)。

1.3 大鼠BMSCs的分離、培養(yǎng)和鑒定

1.3.1 BMSCs的分離與培養(yǎng) 雄性SD大鼠頸椎脫臼法處死，在75%乙醇中浸泡10 min。在無(wú)菌條件下快速取脛骨和股骨，去除周圍組織，切除脛骨和股骨兩端，用DMEM液反復(fù)沖洗骨髓腔，將沖洗液收集于離心管中，1 500 r/min離心5 min，棄上清液。加入含10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基，反復(fù)吹打，細(xì)胞計(jì)數(shù)后以109/mL密度接種于50 cm2培養(yǎng)瓶中，37 ℃、飽和濕度、含體積分?jǐn)?shù)為0.05的CO2孵育箱中培養(yǎng)。48 h后棄懸浮液，首次換液。以后每2 d換液1次，懸浮生長(zhǎng)的造血細(xì)胞隨換液被棄去，留下貼壁生長(zhǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。約待細(xì)胞在瓶底融合基本達(dá)到80%左右，胰蛋白酶消化傳代。

1.3.2 BMSCs的傳代及純化 待原代培養(yǎng)的細(xì)胞增殖在瓶底融合基本達(dá)到80%左右時(shí)，用0.25%胰酶消化細(xì)胞后，加培養(yǎng)液中止消化并反復(fù)吹打貼壁細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，按1∶2傳代培養(yǎng)，并標(biāo)記為P2，以后每天觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，直至貼壁細(xì)胞彼此融合達(dá)到80%左右時(shí)，重復(fù)上述操作，反復(fù)傳至第4代。

1.3.3 BMSCs的鑒定 取第3代MSCs，0.25%胰酶消化后配制成細(xì)胞懸液，1%BSA封閉液10 min，PBS洗滌3次，加入FITC熒光標(biāo)記的抗CD11b、CD45、CD90抗體，對(duì)照組加PBS，4 ℃孵育30 min，1 500 r/min離心5 min，PBS沖洗3次，1%以多聚甲醛固定，采用FACScan流式細(xì)胞儀檢查細(xì)胞表面抗原。

1.4 大鼠BMSCs標(biāo)記及細(xì)胞懸液配制 用PBS緩沖液配制溴氮胞苷(Brdu)，終末濃度調(diào)至10 μmol/L，加入第3代大鼠BMSCs細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，共同孵育72 h，倒掉培養(yǎng)基，用0.01 mol/L的PBS緩沖液漂洗細(xì)胞6次，以去除未結(jié)合的Brdu；再用胰蛋白酶消化后離心收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)，加入無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基，配制成3×106/100 μL濃度的細(xì)胞懸液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 大鼠心血瘀阻證模型制備 取健康清潔級(jí)雄性SD大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)觀察1周。大鼠腹腔麻醉，仰臥位固定，呼吸機(jī)呼吸，行心電監(jiān)測(cè)，左胸縱切口分層開(kāi)胸，在肺動(dòng)脈圓錐和左心耳之間，距左冠狀動(dòng)脈起始2 mm處5-0號(hào)無(wú)創(chuàng)傷絲線，結(jié)扎左冠脈前降支，使左室前壁失去原有光澤而變蒼白，出現(xiàn)搏動(dòng)減弱，心電監(jiān)測(cè)見(jiàn)肢體導(dǎo)聯(lián)R波振幅明顯升高，隨后出現(xiàn)I導(dǎo)聯(lián)和aVL導(dǎo)聯(lián)J點(diǎn)明顯抬高，證實(shí)大鼠AMI造模成功。亦作為心血瘀阻證定位在“心”的客觀指標(biāo)。

1.6 大鼠血液流變學(xué)檢測(cè) 造模后24 h，動(dòng)物眶后動(dòng)脈取血2 mL測(cè)定全血黏度值、血漿黏度值、全血高切、低切相對(duì)黏度等血液流變學(xué)指標(biāo)。同時(shí)取10只空白大鼠檢測(cè)液流變學(xué)指標(biāo)，以空白組數(shù)值95%參考值范圍作為正常值。造模組與空白組對(duì)比，血液流變學(xué)血漿黏度和全血黏度中的一項(xiàng)高于正常值，即出現(xiàn)“黏、聚、凝、稠”特征，作為心血瘀阻證定性為“血瘀”的客觀指標(biāo)。

1.7 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

1.7.1 (apr-YTF)+BMSCs組 為實(shí)驗(yàn)觀察組。于梗死區(qū)邊緣心肌組織的3個(gè)位點(diǎn)直接注入共約100 μL的apr-YTF注射液[生理鹽水稀釋，含生藥約20 μg，1.2 g/(kg·d)劑量]和共100 μL的BMSCs細(xì)胞懸液(含細(xì)胞數(shù)3×106)。

1.7.2 (rhG-CSF)+BMSCs組 為陽(yáng)性對(duì)照組。于梗死區(qū)邊緣心肌組織的3個(gè)位點(diǎn)直接注入共100 μL的rhG-CSF注射液和共100 μL的BMSCs細(xì)胞懸液(含細(xì)胞數(shù)3×106)。

1.7.3 生理鹽水+BMSCs組 為空白對(duì)照組。于梗死區(qū)邊緣心肌組織的3個(gè)位點(diǎn)直接注入共100 μL的生理鹽水和共100 μL的BMSCs細(xì)胞懸液(含細(xì)胞數(shù)3×106)。

1.7.4 生理鹽水+DMEM組 為模型對(duì)照組。于梗死區(qū)邊緣心肌組織的3個(gè)位點(diǎn)直接注入共100 μL的生理鹽水和共100 μL的DMEM緩沖液。

1.8 心肌Desmin-Brdu、MHC-Brdu蛋白免疫組織化學(xué)雙染 標(biāo)本選擇10%福爾馬林固定24 h；修復(fù)一抗，非免疫的羊血清工作液(含10%驢血清)封閉，常溫下10 min；加一抗，4 ℃過(guò)夜；加兔抗鼠生物素化二抗37 ℃ 15 min，鏈酶卵白素-堿磷酶軛合物37 ℃ 15 min，堿磷酶的底物-色素混合液37 ℃ 15 min，第二次一抗孵育4 ℃過(guò)夜，相應(yīng)的生物素化二抗37 ℃ 15 min，過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈酶卵白素37 ℃ 15 min，過(guò)氧化物酶的底物-色素混合液，常溫10 min，中性樹(shù)膠封片。采用顯微鏡拍照后下手工計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行，取個(gè)標(biāo)本相同部位梗死區(qū)切片，200倍拍照，然后計(jì)數(shù)整個(gè)切片中細(xì)胞核猩紅色(Brdu標(biāo)記與細(xì)胞和結(jié)合)和胞漿棕色(Desmin或MHC)同時(shí)著色的細(xì)胞為雙染陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 apr-YTF對(duì)BMSCs移植后Desmin-Brdu表達(dá)的影響 apr-YTF干預(yù)BMSCs移植心血瘀阻證心肌28 d后經(jīng)心肌結(jié)蛋白Desmin-Brdu抗體染色后，NS+DMEM組梗死邊緣未見(jiàn)雙染表達(dá)，在NS+BMSCs組、(rhG-CSF)+BMSCs和(apr-YTF)+BMSCs組均可有猩紅色Brdu抗體和棕色Desmin蛋白的同時(shí)表達(dá)(見(jiàn)圖1)，其中(rhG-CSF)+BMSCs和(apr-YTF)+BMSCs組陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)高于NS+BMSCs組(P<0.05)；(rhG-CSF)+BMSCs組和(apr-YTF)+BMSCs組兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(見(jiàn)表1)

2.2 apr-YTF對(duì)BMSCs移植后MHC-Brdu表達(dá)的影響 apr-YTF干預(yù)BMSCs移植心血瘀阻證心肌28 d后經(jīng)心肌重鏈蛋白MHC-Brdu抗體染色后，NS+DMEM組梗死邊緣未見(jiàn)有雙染表達(dá)；在NS+BMSCs組、(rhG-CSF)+BMSCs和(apr-YTF)+BMSCs組均可見(jiàn)到猩紅色Brdu抗體著色和棕色MHC蛋白的同時(shí)表達(dá)(見(jiàn)圖2)，其中(rhG-CSF)+BMSCs組和(apr-YTF)+BMSCs組陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)高于NS+BMSCs組(P<0.05)；前兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(見(jiàn)表1)

表1 apr-YTF對(duì)BMSCs移植后Desmin-Brdu、 MHC-Brdu雙染陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)(例數(shù)

注：與NS+BMSCs組比較，*P<0.05。

A:NS+DMEM組；B：NS+BMSCs組；C：(rhG-CSF)+BMSCs組；D：(apr-YTF)+BMSCs組

圖1 apr-YTF干預(yù)BMSCs移植心肌后Desmin-Brdu雙染圖片(×100)

A：NS+DMEM組；B：NS+BMSCs組；C：(rhG-CSF)+BMSCs組；D：(apr-YTF)+BMSCs組

圖2 apr-YTF干預(yù)BMSCs移植心肌后MHC-Brdu雙染圖片(×100)

3 討論

養(yǎng)心通脈方是我國(guó)著名中醫(yī)學(xué)家秦伯未先生運(yùn)用“扶養(yǎng)心氣，和通血脈”之法治療胸痹心痛的有效名方[8]。是用人參、桂枝補(bǔ)益心氣，溫通血脈；生地黃滋陰生津，和通氣血；丹參活血養(yǎng)血、宣通經(jīng)脈，佐以澤瀉利水滲濕，化其痰濁而補(bǔ)陰。諸藥合用，達(dá)到和通血脈、調(diào)養(yǎng)心氣之效。國(guó)內(nèi)多年研究表明，該方對(duì)于缺血性心臟病、高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化等均具有顯著的臨床療效[9-10]?？筛纳乒跔钛h(huán)，增加冠狀微循環(huán)血流量；增強(qiáng)心血管內(nèi)皮細(xì)胞的抗血栓性，抑制凝血活性；調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝；具有對(duì)抗心肌缺血再灌注損傷，防止氧自由基的毒害和增加機(jī)體的胰島素敏感性等作用[11-13]。

本課題組在臨床和實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，由養(yǎng)心通脈方中提取出人參皂苷、丹參酮Ⅱa、總生物堿、人參多糖、復(fù)方多糖、總揮發(fā)油等有效部位，通過(guò)對(duì)各有效成分部位的有效劑量配伍抗心肌缺血的實(shí)驗(yàn)研究，研制成apr-YTF。有效部位組方可減少服用劑量，提高療效，更好更直接地發(fā)揮中醫(yī)方藥中有效物質(zhì)的藥理活性作用。莫莉等[14]研究顯示apr-YTF與養(yǎng)心通脈方原方、麝香保心丸及重組牛堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Basic Fibroblast Growth Factor，bFGF)同樣具有促血管新生的作用，且apr-YTF作用與bFGF作用相當(dāng)，明顯優(yōu)于養(yǎng)心通脈方原方組、麝香保心丸。袁肇凱等[15]研究顯示apr-YTF功擅益氣活血，可通過(guò)刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞“增殖”“遷移”和“管腔結(jié)構(gòu)形成”等不同環(huán)節(jié)，促進(jìn)缺血心肌的血管生成。

心肌的修復(fù)再生與中醫(yī)“生脈、生新”理論密切相關(guān)，中醫(yī)的“氣血互根，脈為血之府”等理論為益氣活血方藥的“生脈、生新”作用提供了理論依據(jù)。冼紹祥等[16]研究中證實(shí)黃芪甲苷體外誘導(dǎo)BMSCs分化為心肌樣細(xì)胞。宋清等[17]用藥物預(yù)適應(yīng)方法觀察中藥參三七皂苷Rg1對(duì)5-aza誘導(dǎo)大鼠BMSCs向心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化中的作用證實(shí)參三七皂苷Rg1預(yù)適應(yīng)在體外可顯著刺激5-aza誘導(dǎo)的鼠BMSCs向心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化和增殖。

我們研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，apr-YTF干預(yù)BMSCs移植心血瘀阻證心肌28 d后經(jīng)心肌結(jié)蛋白Desmin-Brdu抗體染色后，NS+DMEM組梗死邊緣未見(jiàn)雙染表達(dá)，在NS+BMSCs組、(rhG-CSF)+BMSCs和(apr-YTF)+BMSCs組均可有猩紅色Brdu抗體和棕色Desmin蛋白的同時(shí)表達(dá)，其中(rhG-CSF)+BMSCs組陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)與高于NS+BMSCs組；(rhG-CSF)+BMSCs組和(apr-YTF)+BMSCs組兩者之間無(wú)差異。MHC-Brdu抗體染色后，NS+DMEM組梗死邊緣未見(jiàn)有雙染表達(dá)；在NS+BMSCs組、(rhG-CSF)+BMSCs和(apr-YTF)+BMSCs組均可見(jiàn)到猩紅色Brdu抗體著色和棕色MHC蛋白的同時(shí)表達(dá)，其中(rhG-CSF)+BMSCs組和(apr-YTF)+BMSCs組陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)與高于NS+BMSCs組，前兩者之間無(wú)差異。急性心肌心血瘀阻證大鼠移植BMSCs后28 d表達(dá)心肌特異性蛋白Desmin和肌球蛋白MHC，(apr-YTF)+BMSCs明顯高于空白組和陰性對(duì)照組，與陽(yáng)性對(duì)照的(rhG-CSF)無(wú)明顯差異。說(shuō)明apr-YTF能夠在局部用藥的情況下加強(qiáng)微環(huán)境下的BMSCs向宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化，是益氣活血法治療心血瘀阻證的微觀機(jī)制之一。有望為臨床協(xié)助BMSCs移植增加療效提供一種安全、有效的治療手段。本實(shí)驗(yàn)為益氣活血法治療缺血性心臟病提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

盡管本研究初步探索改良移植微環(huán)境從而增強(qiáng)移植骨髓BMSCs在體存活、分化和效應(yīng)，并取得初步成效，但是未能全面探討這種改良的機(jī)制。未能在更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)考察藥物改良移植微環(huán)境對(duì)移植BMSCs的動(dòng)態(tài)影響。另外，本研究也未考察藥物改良基礎(chǔ)上移植BMSCs是否會(huì)產(chǎn)生一些新的不良反應(yīng)，這些均有待今后進(jìn)一步深入研究。再就是使用apr-YTF對(duì)心血瘀阻證微環(huán)境干預(yù)后，可顯著改善梗死心肌局部微環(huán)境，有利于移植細(xì)胞的存活和分化，但是具體的干預(yù)方式(全身用藥/局部用藥)干預(yù)的時(shí)間、藥物長(zhǎng)期的不良反應(yīng)及細(xì)胞是否有惡性化傾向或返祖現(xiàn)象，都需要作進(jìn)一步研究。

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(2014-04-02收稿 責(zé)任編輯：曹柏)

Experimental Study on Effect of Active Principle Region of Yangxing Tongmai Formula on BMSCs Transplantation in Myocardium with Blood Stasis Syndrome

Chen Xia1,Zheng Jinghui1,2,Li Yonghua3,Yuan Zhaokai2,Sun Guixiang2,Jian Weixiong2,Huang Xianping2

(1RuikangHospitalofGuangxiTraditionalChineseMedicineUniversity,Nanning530011,China; 2DiagnosisResearchInstituteofHunanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Changsha410007,China; 3ChongqingThreeGorgesMedicalCollege,Wanzhou404020,China)

Objective:To observe the effect of active principle region of site Yangxing Tongmai Formula(apr-YTF) improving the rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) transplanted in myocardium with blood stasis syndrome differentiated into myocardial like cells.Methods:Coronary ligation combining blood rheology changes was used to set up rat blood stasis syndrome models.Then the rats were divided into (apr-YTF) + BMSCs group,recombinant human granulocyte colony-stimulating factor + BMSCs group,NS + BMSCs group,and NS + DMEM group.Primary cultured rat BMSCs,in vitro labeled by 5-romouracil deoxyriboside Brdu was injected into rat myocardium,using double staining myocardial tissue myocardial desmin Desmin-Brdu and myosin heavy chain (myosin heavy chain MHC)-Brdu expression.Results:After 28 days Desmin-Brdu myocardial desmin antibody staining,NS + DMEM group infarct border no double staining expressed in NS + BMSCs group,(rhG-CSF) + BMSCs and (apr-YTF) + BMSCs group can had scarlet and brown Desmin antibody Brdu simultaneous expression of proteins,including (rhG-CSF) + BMSCs and (apr-YTF) + BMSCs group-positive cell counts higher than NS + BMSCs group (P<0.05); (rhG-CSF) + BMSCs group and (apr-YTF) + BMSCs had no difference (P>0.05).Conclusion:Apr-YTF can promote BMSCs transplanted myocardial environmental blood stasis syndrome differentiation to cardiomyocytes .

Active principle region of Yangxing Tongmai Formul; Apr-YTF; Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells; Myocardial Infarction / TCM Therapy; Cell Transplantation

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)：81102595)；廣西自然科學(xué)基金(編號(hào)：2012GXNSFAA053113，2013GXNSFAA019126)；廣西科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：桂科合1347004-26)；廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥民族醫(yī)藥自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(編號(hào)：GZZC1223)

陳夏(1976—)，女，主治醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合心腦血管給疾病的臨床與基礎(chǔ)研究

鄭景輝(1976—)，男，漢族，醫(yī)學(xué)博士，副教授，主要研究方向：心腦血管疾病的中西醫(yī)結(jié)合診療，E-mail：jinghuizheng@yeah.net

R332；R256.2

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.01.020