3種梅毒血清學(xué)檢測方法的應(yīng)用評價

顧文剛，南志敏，蔣 芬，陳淑云△

（1.武警北京總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100027；2.武警北京總隊(duì)第二醫(yī)院信息科，北京100037）

梅毒是常見性傳播疾病，感染性強(qiáng)，危害大，臨床表現(xiàn)也比較復(fù)雜。早期潛伏狀態(tài)時無臨床表現(xiàn)，患者自身難以察覺，很容易通過性行為傳播給他人。目前實(shí)驗(yàn)室主要通過血清學(xué)試驗(yàn)來檢測梅毒螺旋體［1］，梅毒血清學(xué)檢測的方法很多，特異度和靈敏度都有差別，選擇合適、有效的檢測方法有利于梅毒的早期診斷和治療。為此本研究對梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TPELISA）陽性的患者進(jìn)行梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）、膠體金免疫層析法（GIGA）以及梅毒螺旋體非特異性血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR），以比較后3種方法的診斷效率，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院2011年1月至2013年12月的住院及門診患者359例，TP－ELISA 結(jié)果均為陽性，年齡20～85 歲，其中男187例，女172例。

1.2 儀器與試劑 水浴箱、振蕩器、水平轉(zhuǎn)動儀、酶標(biāo)儀（上?？迫A），TP－ELISA 和RPR 試劑購自上?？迫A生物工程股份有限公司，GIGA 試劑來自英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司，TPPA試劑購于富士瑞必歐株式會社。

1.3 方法 采集靜脈血標(biāo)本3 mL，分離血清，用TP－ELISA法進(jìn)行篩檢，陽性標(biāo)本做TPPA、GIGA 和RPR 檢測，TPELISA 法采用兩步法設(shè)置空白、陰性和陽性對照，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。TPPA 法在U 型板上1～4 空分別加入標(biāo)本稀釋液100、25、25、25μL，取待測血清25μL 加入第1孔中混勻后吸出25μL加入第2孔，依此加到第4孔，然后在第3孔加入25μL未致敏粒子，第4孔加入25μL 致敏粒子，用振蕩器混勻，靜置2h后觀察結(jié)果。GIGA 法直接滴板，15 min后觀察結(jié)果即可。RPR 法取50μL 待測血清加入紙卡的圓圈中，然后垂直滴加一滴RPR 試劑到血清中，在水平轉(zhuǎn)動儀上轉(zhuǎn)8min后3min內(nèi)觀察結(jié)果。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn) 以TPPA 陽性或TPPA 為陰性的高危人群，結(jié)合臨床回訪調(diào)查及性接觸史綜合判定符合梅毒判定標(biāo)準(zhǔn)的患者為確診梅毒感染者。特異度＝真陰性／（假陽性＋真陰性），靈敏度＝真陽性／（真陽性＋假陰性）。

2 結(jié) 果

2.1 3種方法的檢測陽性率比較 TP－ELISA 法進(jìn)行篩檢，陽性患者359例，對359例疑似梅毒感染者的標(biāo)本進(jìn)行TPPA、GIGA、RPR 檢 測，GIGA 陽 性 率 最 高，為95.0%（343／359），TPPA 法陽性率為93.3%（335／359），RPR 法 陽性率最低，為70.2%（252／359）。

2.2 3種方法的特異度和靈敏度 359例TP－ELISA 陽性患者中，確診338例為梅毒感染者。TPPA 法真陽性333例，假陽性2例，真陰性19例，假陰性5例；GIGA 法真陽性335例，假陽性8例，真陰性13例，假陰性3例；RPR 法真陽性251例，假陽性1例，真陰性20例，假陰性87例。TPPA 法、GIGA 法、RPR法的靈敏度分別為98.5%（333／338）、99.1%（335／338）、74.3%（251／338），TPPA 法、GIGA 法、RPR 法的特異度分別為90.5%（19／21）、61.9%（13／21）、95.2%（20／21）。

3 討 論

隨著人們生活方式的改變和人口流動性增加，梅毒發(fā)病率呈逐年增高的趨勢［2］，選擇合適有效的檢測方法對梅毒的診斷和治療具有重要的意義。本研究結(jié)果顯示TPPA 法靈敏度（98.5%）和特異度（90.5%）均較高，GIGA 法靈敏度（99.1%）較高但特異度（61.9%）較低，RPR 法的靈敏度（74.3%）較低但特異度（95.2%）較高，綜合比較TPPA 法更適合梅毒的篩查和確診。TPPA 法是將梅毒的精致菌體成分包被在人工載體明膠粒子上，而這種致敏粒子與樣品中的梅毒螺旋體進(jìn)行反應(yīng)后會發(fā)生凝集，由此可檢測血清中的梅毒螺旋體［3］，TPPA法被美國疾病預(yù)防控制中心定為確診方法，是當(dāng)前國內(nèi)外公認(rèn)的梅毒血清 學(xué) 確 證 實(shí) 驗(yàn)［4－5］。但 本 文 中TPPA 法 出 現(xiàn) 了5 例假陰性和2例假陽性結(jié)果，分析假陰性患者可能是新近感染（窗口期）的患者，這是因?yàn)槊范韭菪w感染人體后，首先產(chǎn)生IgM 抗體而后產(chǎn)生IgG 抗體，IgM 在感染2～4 周方可 檢出，IgG 出現(xiàn)較晚，且一旦出現(xiàn)會一直存在，窗口期患者體內(nèi)還未產(chǎn)生抗體，故TPPA 法檢測為陰性，與文獻(xiàn)［6］報道一致，如何提高窗口期的梅毒檢出率有待進(jìn)一步探討。TPPA 假陽性可能是患者服用了免疫球蛋白制劑，也有文獻(xiàn)顯示由于患者本身和試劑的原因，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)有一定的假陽性，在對高齡老人的檢測中尤為突出［7］。GIGA 法采用膠體金免疫技術(shù)和層析原理，是當(dāng)前快速的體外診斷技術(shù)，其包被的單克隆梅毒螺旋體抗原，能夠選擇性地結(jié)合與之相對應(yīng)的抗體，具有快速簡便準(zhǔn)確的特點(diǎn)，但在本文中有假陽性和假陰性出現(xiàn)，原因尚不明確。RPR 法是檢測梅毒非特異性反應(yīng)素，該反應(yīng)素在軟下疳后才會出現(xiàn)，其陽性滴度水平與梅毒感染情況呈正相關(guān)，經(jīng)梅毒的有效治療后反應(yīng)素逐步下降到最后消失，RPR 不適合梅毒的單獨(dú)篩查，必須與梅毒特異性抗體聯(lián)合檢測才能更為準(zhǔn)確有效地判斷病情及療效［8］。考慮到RPR 法是非特異性反應(yīng)素試驗(yàn)，麻風(fēng)等患者也可出現(xiàn)陽性。鑒于多種因素影響，臨床對梅毒血清學(xué)結(jié)果的解釋，必須結(jié)合患者病史、臨床表現(xiàn)及梅毒治療情況等進(jìn)行綜合分析［9］。

綜上所述，GIGA 試驗(yàn)快速、簡便，敏感性好，適合對急診患者的快速檢測，但陽性結(jié)果需經(jīng)過TPPA 確證，普通患者可直接用TPPA 法篩檢，TPPA 陽性患者聯(lián)合RPR 滴度檢測，以更好了解感染情況及監(jiān)測預(yù)后，TPPA 陽性RPR 為陰性的患者排除服用免疫球蛋白制劑等因素的干擾，需定期復(fù)查RPR，做到早發(fā)現(xiàn)早治療。

［1］袁余，李冬冬，王婷婷，等.3種梅毒血清學(xué)檢測方法的應(yīng)用評價［J］.預(yù)防醫(yī)學(xué)情報雜志，2011，32（15）：1718－1719.

［2］唐滿玲，顧敏，將最明，等.幾種梅毒血清學(xué)檢測方法的評價及臨床應(yīng)用［J］.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（9）：1105－1106.

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［8］王華，李代渝，雷麗明，等.梅毒螺旋體血清學(xué)檢測方法比較［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30（6）：660－661.

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