血清降鈣素原檢測在新生兒細(xì)菌感染性疾病診斷中的應(yīng)用

高 原，鄒 琛，王 歡，王寶平，張 泓

（上海交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200040）

血清降鈣素原檢測在新生兒細(xì)菌感染性疾病診斷中的應(yīng)用

高 原，鄒 琛，王 歡，王寶平，張 泓

（上海交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200040）

目的探討降鈣素原（PCT）在新生兒細(xì)菌感染性疾病中的診斷價值。方法用酶聯(lián)免疫熒光分析技術(shù)對90例新生兒血清PCT進(jìn)行檢測。細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果陽性、臨床有發(fā)熱感染癥狀符合細(xì)菌感染診斷的歸為觀察組（48例）；細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果為陰性、臨床資料未顯示有感染癥狀的歸為對照組（42例）。記錄同期檢測的PCT、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）結(jié)果，計(jì)算各項(xiàng)指標(biāo)的靈敏度和特異度，繪制受試者工作特征（ROC）曲線并進(jìn)行比較。結(jié)果PCT靈敏度87.50%、特異度85.71%、陽性預(yù)測值（PPV）87.50%、陰性預(yù)測值（NPV）85.71%；CRP靈敏度81.25%、特異度83.33%、PPV 84.78%、NPV 79.54%；IL-6靈敏度93.75%、特異度71.43%、PPV 78.95%、NPV 90.91%；WBC靈敏度68.75%、特異度57.14%、PPV 64.70%、NPV 61.53%。PCT、CRP、IL-6、WBC用于新生兒細(xì)菌感染性疾病診斷的ROC曲線下面積分別為0.859、0.852、0.803、0.647。結(jié)論與其他感染性指標(biāo)相比，PCT在診斷新生兒細(xì)菌感染性疾病時有較高的靈敏度和特異度，操作方法簡便可行，能為診斷提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

降鈣素原； 細(xì)菌感染性疾??； 新生兒

全世界每年大約有160萬新生兒死于各種感染［1］，新生兒感染的早期臨床表現(xiàn)和其他疾病相似，不具備特異性，滯后的微生物學(xué)培養(yǎng)結(jié)果或陰性結(jié)果使得臨床早期診斷尤為困難［2］。在細(xì)菌培養(yǎng)確認(rèn)之前提早治療是非常重要的。在診斷新生兒化膿性腦膜炎、細(xì)菌性肺炎、泌尿系統(tǒng)感染和膿毒血癥時降鈣素原（PCT）檢測是一個可靠的方法［3-5］。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集上海市兒童醫(yī)院2014年1～3月新生兒血清90人份，以及同期的抗凝全血標(biāo)本，新生兒日齡5～28 d。記錄標(biāo)本來源的90例患者的臨床資料，包括病史、無菌體液（中段尿、腦脊液或血液）細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果。以無菌體液細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果和臨床體征診斷作為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，將細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果陽性、臨床有發(fā)熱感染癥狀符合細(xì)菌感染診斷的作為觀察組（48例）；細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果為陰性、臨床資料未顯示有感染癥狀的作為對照組（42例）。

1.2 儀器與試劑 主要儀器包括MiniVIDAS全自動熒光酶標(biāo)免疫分析儀（法國生物梅里埃公司）、XS 800i全自動血液分析儀（日本Sysmex公司）、Quikreadgo#C反應(yīng)蛋白（CRP）分析儀（Orion Diagnostica Oy公司），Thermo scientific酶標(biāo)儀、Heal ForceNeofuge 15臺式高速離心機(jī)、海爾-80℃低溫冰箱。主要試劑包括血清PCT檢測使用的VIDAS BRAHMS PCT定量測定試劑盒（法國生物梅里埃公司）。白細(xì)胞介素-6（IL-6）檢測使用人IL-6酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）分析試劑盒（美國R&D公司）。外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、CRP檢測試劑均為儀器配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 外周血WBC檢測 用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝的Eppendorf管采集新生兒末梢血，在XS-800i全自動血液分析儀上進(jìn)行檢測并記錄原始數(shù)據(jù)。全自動血液分析儀每天開機(jī)后進(jìn)行質(zhì)控分析，數(shù)據(jù)在控后方可進(jìn)行檢測。

1.3.2 CRP檢測 采集末梢血20μL于CRP緩沖液反應(yīng)杯中混勻上機(jī)，記錄原始數(shù)據(jù)。每天檢測前進(jìn)行質(zhì)控分析，數(shù)據(jù)在控后方可進(jìn)行檢測。CRP大于8 mg/L為陽性。

1.3.3 PCT檢測 采集新鮮血液標(biāo)本1 mL，離心吸取上層血清200μL備用，在MiniVIDAS全自動熒光酶標(biāo)免疫分析儀上進(jìn)行檢測，每次檢測之前進(jìn)行質(zhì)控分析，對開啟新批號的試劑進(jìn)行定標(biāo)。PCT濃度高于0.1 ng/m L為陽性［6］。

1.3.4 IL-6檢測 采集同期新鮮血液標(biāo)本1 m L，離心吸取上層血清50μL分裝于-80℃低溫保存，待標(biāo)本集中后進(jìn)行ELISA檢測。標(biāo)本從冰箱取出、復(fù)溫、融解和混勻后，嚴(yán)格按照試劑說明書步驟進(jìn)行操作。IL-6的最佳臨界濃度為14.5 ng/L。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 記錄患者的WBC、CRP、PCT、IL-6的檢測結(jié)果，計(jì)算靈敏度和特異度，繪制這4項(xiàng)指標(biāo)用于細(xì)菌感染診斷的受試者工作特征（ROC）曲線，計(jì)算曲線下面積。

2 結(jié) 果

2.1 病例統(tǒng)計(jì) 48例觀察組患者中24例肺炎（50.00%）、17例敗血癥（35.43%）、3例特指感染（6.25%）、2例尿路感染（4.16%）、2例化膿性腦膜炎（4.16%）。細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果43例血培養(yǎng)結(jié)果陽性（89.59%）、3例腦脊液細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果陽性（6.25%）、2例中段清潔尿細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果陽性（4.16%）。42例對照組中23例高膽紅素血癥（55.0%）、7例咽下綜合征（16.67%）、5例圍產(chǎn)窒息（11.90%）、4例先天性心臟病（9.52%）、2例早產(chǎn)兒（4.76%）、1例ABO溶血癥（2.38%）。無菌體液細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果均為陰性。

2.2 PCT檢測 觀察組48例有42例陽性，6例陰性；對照組42例中有6例陽性，36例陰性；靈敏度87.50%、特異度85.71%、陽性預(yù)測值（PPV）87.50%、陰性預(yù)測值（NPV）85.71%。

2.3 CRP檢測 觀察組48例中有39例陽性，9例陰性；對照組42例中有7例陽性，35例陰性；靈敏度81.25%、特異度83.33%、PPV 84.78%、NPV 79.54%。

2.4 IL-6檢測 觀察組中45例陽性、3例陰性；對照組中12例陽性、30例陰性；靈敏度93.75%、特異度71.43%、PPV 78.95%、NPV 90.91%。

2.5 WBC檢測 新生兒細(xì)菌感染時WBC波動很大，WBC明顯增高（＞20×109/L）且伴核左移和中毒顆粒時對新生兒細(xì)菌感染性疾病早期診斷有重要意義［7］。觀察組中33例WBC＞20×109/L，15例WBC≤20×109/L；對照組中18例WBC＞20 ×109/L，24例WBC≤20×109/L；靈敏度68.75%、特異度57.14%、PPV 64.70%、NPV 61.53%。

2.6 比較不同指標(biāo)之間的靈敏度和特異度 繪制PCT、CRP、IL-6和WBC用于感染性疾病診斷的ROC曲線，曲線下面積分別為0.859、0.852、0.803、0.647。見圖1（見《國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”）。

3 討 論

細(xì)菌感染性疾病是新生兒常見病，而重癥感染是導(dǎo)致新生兒死亡的主要原因。由于新生兒免疫功能不健全，病原菌和一些條件致病菌可以引起不同系統(tǒng)的感染，早期正確地診斷新生兒細(xì)菌感染性疾病是減少新生兒死亡的重要途徑之一。

PCT作為診斷細(xì)菌感染性疾病的指標(biāo)，能夠幫助臨床早期鑒別細(xì)菌和非細(xì)菌感染，診斷嚴(yán)重細(xì)菌感染和膿毒癥，評估膿毒癥的嚴(yán)重程度和指導(dǎo)抗菌藥物的應(yīng)用及隨訪。PCT是降鈣素的前肽物質(zhì)，無激素活性，生物半衰期25～30 h，健康人血液中PCT濃度很低，只有在細(xì)菌感染時，在細(xì)菌毒素和炎性細(xì)胞因子的誘導(dǎo)下PCT濃度會升高，誘導(dǎo)期為4～12 h，其濃度隨感染的擴(kuò)散和加重而升高［8］。本研究中，PCT診斷新生兒細(xì)菌性感染的靈敏度和特異度分別為87.50%和85.71%，與文獻(xiàn)［9］的報(bào)道相近。但值得注意的是，新生兒出生后幾天可存在炎性指標(biāo)的生理性升高，不一定是細(xì)菌感染相關(guān)的，連續(xù)監(jiān)測PCT變化有助于鑒別生理性升高和細(xì)菌感染。

CRP是由肝臟合成的一種生物半衰期為19 h左右的全身炎性反應(yīng)急性期的非特異性標(biāo)志物，為一種急性時相反應(yīng)蛋白，是反映機(jī)體炎性反應(yīng)的敏感指標(biāo)。CRP血清濃度超過10 mg/L時可考慮感染的診斷，當(dāng)濃度超過100 mg/L時，可預(yù)測存在嚴(yán)重感染，但這樣的濃度可發(fā)生在不同非細(xì)菌誘導(dǎo)的疾病中，如病毒感染、自身免疫性疾病等。本研究中，CRP用于細(xì)菌性感染疾病診斷的靈敏度和特異度分別為81.25%和83. 33%，特異度低于PCT，與文獻(xiàn)［10-11］的報(bào)道一致。

IL-6是一種生物半衰期為1 h左右且能夠與多種細(xì)胞反應(yīng)具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞因子，可由免疫細(xì)胞產(chǎn)生。細(xì)菌感染時IL-6比PCT更早出現(xiàn)在血液中，但細(xì)菌/病毒感染、自身免疫過程或組織創(chuàng)傷均可誘導(dǎo)IL-6，因此IL-6不是感染的非特異性指標(biāo)，同時升高的IL-6降低比較快，體內(nèi)變化水平很大，給在臨床實(shí)際判讀起來帶來困難，本實(shí)驗(yàn)中IL-6的靈敏度比PCT、CRP和WBC都較高，但特異度較PCT、CRP低，比WBC高，與文獻(xiàn)［12］的報(bào)道一致。

WBC在新生兒細(xì)菌感染時受生理病理因素影響，波動范圍較大。當(dāng)外周血WBC顯著升高（＞20×109/L）時，有診斷意義。本研究中WBC的靈敏度為72.91%、特異度為57.14%，說明WBC用于新生兒感染性疾病診斷時缺乏特異性。

本研究中，PCT、CRP、IL-6、WBC在診斷新生兒感染性疾病中均有一定的作用，從不同指標(biāo)的ROC曲線下面積比較來看，對細(xì)菌感染性疾病的診斷價值由大到小依次為PCT、CRP、IL-6、WBC。PCT在診斷新生兒細(xì)菌感染性疾病具有一定的診斷價值且檢測方法簡便，具有較大的可行性。但不同感染性指標(biāo)的靈敏度、特異度參差不齊，各有特點(diǎn)，需要在診斷細(xì)菌感染性疾病中聯(lián)合幾個指標(biāo)同時檢測，或組合檢測指標(biāo)來提高診斷效率。在平行試驗(yàn)中觀察組有44例PCT或CRP檢測為陽性結(jié)果，4例PCT和CRP檢測結(jié)果均為陰性；對照組有13例PCT或CRP檢測為陽性結(jié)果，29例PCT和CRP檢測結(jié)果均為陰性；聯(lián)合檢測PCT和CRP的靈敏度為91.67%，特異度為69.05%，PPV為77.19%，NPV為87.88%，均大于PCT和CRP單獨(dú)檢測的靈敏度，但特異度均有所下降。在序列試驗(yàn)中觀察組PCT和CRP結(jié)果同時為陽性的有37例，而PCT或CRP為陰性結(jié)果的有11例；在對照組中，PCT和CRP結(jié)果同時為陽性的有2例，PCT或CRP檢測結(jié)果為陰性的40例；此時靈敏度77.08%、特異度95.24%、PPV 94.87%、NPV 78.43%。PCT和CRP同時陽性作為診斷細(xì)菌感染性疾病靈敏度雖然下降，但比單獨(dú)應(yīng)用PCT或CRP的特異度都要高，細(xì)菌感染性疾病的陽性檢出率增加（PPV 94.87%），NPV下降，避免了假陰性發(fā)生。

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Application of serum procalcitonin test in diagnosis of neonatal bacterial infectious diseases

GaoYuan，Zou Chen，Wang Huan，Wang Baoping，Zhang Hong

（Department of Clinical Laboratory，Children's Hospital Affiliated to Shnaghai Jiaotong University，Shanghai 200040，China）

ObjectiveTo investigate the diagnostic value of procalcitonin（PCT）in bacterial infectious diseases for newborns.MethodsUsing enzyme-linked immune fluorescence analysis technology to determine PCT of 90 samples of neonatal serum.The Observation group（48 cases）and control group（42 cases）were grouped according to the gold standard which were microbial culture result of sterile body fluid and clinical diagnosis.Recorded the values of PCT，WBC，CRP and IL-6 detected in the same period，then calculate the sensitivity and specificity，and draw the ROC curve to compare sensitivity and specificity between PCT and the other infectious indicators.ResultsThe sensitivity and specificity of PCT were 87.50%and 85.71%respectively，the positive predictive value（PPV）and negative predictive value（NPV）of it were 87.50%and 85.71%.However，the sensitivity and specificity of CRP were 81.25%and 83.33%，the PPV and NPV of it were 84.78%and 79.54%.The sensitivity and specificity of WBC were 68.75%and 57.14%，the PPV and NPV of it were 64.70%and 61.53%.The sensitivity and specificity of IL-6 were 93.75%and 71.43%，the PPV and NPV of it were 78.95%and 90.91%.In addition to that，the area under the ROC of PCT，CRP，IL-6 and WBC，which were 0.859，0.852，0.803 and 0.647 respectively.ConclusionCompared with the other 3 infectious indicators，PCT has high sensitivity and specificity in the diagnosis of neonatal bacterial infection diseases.Moreover，the detection method of PCT is simple and feasible，PCT could also provide laboratory basis for the diagnosis.

procalcitonin； bacterial infectious diseases； newborns

10.3969/j.issn.1673-4130.2015.17.027

A

1673-4130（2015）17-2519-03

2015-01-08）

高原，女，副主任技師，主要從事臨檢專業(yè)和細(xì)胞形態(tài)學(xué)的研究。