良惡性卵巢甲狀腺腫組織中CK 19、Galectin-3、CD56蛋白的表達及鑒別診斷價值

邵世清，楊少琴#，黃 貴，田 君，張紅霞，王社蓮

1)河南大學淮河醫(yī)院婦產科開封475000 2)河南大學淮河醫(yī)院病理科開封475000

#通信作者，女，1962年10月生，主任醫(yī)師，教授，研究方向:婦科腫瘤，E-mail:shaosq1978@sina.com

卵巢甲狀腺腫是一種特殊類型的畸胎瘤，腫瘤完全或主要由甲狀腺組織構成，是一種單胚層、高度特異性腫瘤，可辨認出甲狀腺組織。卵巢甲狀腺癌發(fā)病率占卵巢甲狀腺腫的5%～10%［1］。卵巢甲狀腺癌若能早期診斷、及時治療，幾乎可達到根治，因此卵巢甲狀腺腫組織的良惡性鑒別就顯得十分重要。由于卵巢甲狀腺腫臨床特異性差，并且良、惡性卵巢甲狀腺腫組織結構特點差異不明顯，僅根據(jù)腫瘤本身的組織結構、細胞學的非典型性和核分裂象并不能斷定良惡性。CK19是最常見的細胞角蛋白之一，在甲狀腺乳頭狀癌的診斷中有重要作用［2-3］。Galectin-3可以作為包括甲狀腺癌在內的甲狀腺濾泡細胞起源的惡性腫瘤的標志［4］。CD56屬于免疫球蛋白超家族，在良性卵巢甲狀腺腫中表達較高，在卵巢甲狀腺癌中存在失表達現(xiàn)象［5］。作者對卵巢甲狀腺癌和良性卵巢甲狀腺腫組織中CK19、Galectin-3及CD56蛋白的表達進行了檢測，并分析了其對卵巢甲狀腺癌和良性卵巢甲狀腺腫的鑒別診斷價值，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集河南大學附屬淮河醫(yī)院病理科1998年5月至2014年3月診斷為卵巢甲狀腺癌6例患者的存檔蠟塊及臨床資料，患者年齡49～68 (58.7±8.4)歲，其中2例合并腹水且CA125升高(分別為1 541、485 U/mL)，其余4例CA125均在正常范圍;收集同期10例良性甲狀腺腫患者的資料，年齡38～59(49.5±6.9)歲，CA125均在正常范圍。卵巢甲狀腺腫診斷標準［6］:①腫瘤的50%以上為甲狀腺組織。②甲狀腺組織未超過50%者，診斷為畸胎瘤合并甲狀腺腫。③甲狀腺組織很少(＜10%或僅在顯微鏡下可見到)，則作為畸胎瘤的特殊成分之一，在診斷中特殊注明。卵巢甲狀腺癌診斷標準參照頸部甲狀腺癌。所有患者術前查體甲狀腺均無腫大，未行甲狀腺功能檢查，術后查甲狀腺功能FT3、FT4、TSH均在正常范圍，復查CA125均在正常范圍。

1.2 CK19、Galectin-3及CD56的免疫組化染色檢測 將石蠟包埋組織進行4μm厚切片，HE染色，進行病理觀察。CK19、Galectin-3和CD56兔抗多克隆抗體，DAB顯色試劑等購自北京中杉金橋生物工程有限公司。應用 ABC三步法染色，一抗均按1∶100稀釋，操作中緩沖液用PBS，進行防脫片處理，采用高溫高壓修復抗原。已知陽性切片為陽性對照，應用PBS代替一抗作為陰性對照。CK19陽性信號主要定位于細胞質，或少許定位于細胞膜，陽性信號為黃色、棕褐色顆粒狀分布。Galectin-3陽性信號主要定位于細胞質或少許定位于細胞核，呈黃色、棕褐色顆粒狀分布。CD56陽性信號主要定位于細胞膜或少許定位于細胞質，呈黃色、棕褐色顆粒狀分布。每張切片均由病理科兩名副主任醫(yī)師進行單盲法閱片，低倍鏡(×40)下觀察全片陽性信號分布特點，再于100倍鏡下采用Leica Owin系統(tǒng)測定染色區(qū)域灰度值，灰度值越高，表明蛋白表達水平越低。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS13.0進行數(shù)據(jù)處理，兩組間CK19、Galectin-3及CD56灰度值比較采用兩獨立樣本t檢驗;繪制ROC曲線，分析3個蛋白的鑒別診斷價值;檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 病理表現(xiàn)特點 卵巢甲狀腺癌組織鏡下特點為典型乳頭狀結構，細胞核大并相互重疊，毛玻璃樣細胞核和間質內砂粒體，可見核縱溝，細胞核擁擠，細胞極向混亂，并可見少量核內嗜酸性(紅染)的包涵體，染色質欠細膩，符合甲狀腺乳頭狀癌的特點。良性卵巢甲狀腺腫組織中腺體形態(tài)較一致，細胞質豐富，染色質細膩，細胞核圓形或橢圓形，無明顯異型性。見圖1。

圖1 卵巢甲狀腺癌(A)和良性卵巢甲狀腺腫(B)的病理表現(xiàn)(HE，×40)

2.2 CK19、Galectin-3及CD56在卵巢甲狀腺癌及良性卵巢甲狀腺腫中表達水平的比較 3種蛋白染色結果見圖2，表達水平的比較見表1。

圖2 CK 19、Galectin-3及CD56在卵巢甲狀腺癌及良性卵巢甲狀腺腫中的表達(ABC，×100)A1、B1、C1:分別為卵巢甲狀腺癌組織中CK19、Galectin-3及CD56的表達;A2、B2、C2:分別為良性卵巢甲狀腺腫組織中CK19、Galectin-3及CD56的表達。

2.3 CK19、Galectin-3及CD56蛋白對良、惡性卵巢甲狀腺腫的鑒別診斷價值 分別利用CK19、Galectin-3及CD56蛋白灰度值繪制ROC曲線，曲線下面積(AUC)分別為0.983、0.933和0.867，提示3者均有很好的鑒別診斷價值，診斷界點分別為134.8、139.4和153.4，靈敏度和特異度分別為0.833和0.900、0.833和0.900、0.667和0.900;以CK19蛋白灰度值＜134.8、Galectin-3蛋白灰度值＜139.4、CD56蛋白灰度值＞153.4為惡性標準，以其中一個指標惡性即判定為惡性，則鑒別診斷的靈敏度可達100%。

3 討論

卵巢甲狀腺腫是一種罕見的卵巢腫瘤，大多數(shù)為良性，僅不到5%是惡性［7］。有報道［8］約17%卵巢甲狀腺腫患者可出現(xiàn)腹腔積液或假Meigs綜合征，甚至可伴有CA125升高，易被誤診為惡性。該研究中全部卵巢甲狀腺腫患者中出現(xiàn)腹腔積液及CA125升高者占2/16，略低于上述報道，可能與研究例數(shù)偏少有關。卵巢甲狀腺癌發(fā)病率低，往往需要與良性卵巢甲狀腺腫相鑒別。良性卵巢甲狀腺腫組織有時顯著增生，胞質嗜酸性變，出現(xiàn)異型性，與卵巢甲狀腺癌鑒別時較困難。作者結合國內外研究成果，選擇CK19、Galectin-3及CD56作為評價指標，探討其對卵巢甲狀腺腫良惡性的鑒別診斷價值。

CK19是構成細胞骨架的一種中間絲狀物，相對分子質量為40 000～56 000。林軍等［2］通過研究發(fā)現(xiàn)CK19在甲狀腺乳頭狀癌中呈中等至強陽性表達，而在良性甲狀腺腫病變中呈陰性或局灶弱陽性表達，提示CK19在甲狀腺乳頭狀癌診斷中有重要作用。據(jù)報道［3］CK19作為乳頭狀癌的標志，敏感性達到100%，特異性達到82.5%。因此，可以推測CK19對鑒別良惡性卵巢甲狀腺腫有重要意義。由于卵巢甲狀腺癌與甲狀腺癌組織結構相似，因此卵巢甲狀腺癌組織中CK19同樣呈彌漫性強陽性表達，該研究免疫組化結果也證實了這一點。卵巢甲狀腺癌組織中CK19表達水平高于良性卵巢甲狀腺腫，在良惡性鑒別診斷方面，準確性可達0.983。

Galectin-3參與許多生理和病理過程，包括免疫調節(jié)、細胞生長、炎癥反應、腫瘤轉化等，是β-半乳糖苷結合蛋白，屬凝集素蛋白家族成員，在正常組織中不表達，在良性腫瘤中大多不表達或呈局灶性弱陽性表達，而惡性腫瘤中為高表達。Inohara等［4］采用免疫組化方法檢測發(fā)現(xiàn)，Galectin-3在甲狀腺惡性腫瘤組織中均彌漫性和強陽性表達，而在良性或正常甲狀腺組織中均不表達，其得出結論認為Galectin-3可以作為包括甲狀腺癌在內的甲狀腺濾泡細胞起源的惡性腫瘤的一個標志，可用于提高良惡性甲狀腺病變鑒別診斷的準確性。該研究結果顯示，卵巢甲狀腺癌組織中Galectin-3表達水平高于良性卵巢甲狀腺腫，在良惡性鑒別診斷方面，準確性可達0.933。

CD56是神經細胞黏附分子中的一種，屬于免疫球蛋白超家族，在惡性腫瘤的侵襲、浸潤及轉移過程中以及在胚胎組織發(fā)育過程中起重要作用。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，多種惡性腫瘤組織中存在CD56的表達。解娜等［5］研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺乳頭狀癌組織中CD56均為陰性表達，而所有良性甲狀腺病變中均呈持續(xù)性陽性表達。該研究中卵巢甲狀腺癌組織中CD56表達水平低于良性甲狀腺腫，在良惡性鑒別診斷方面，準確性可達0.867。聯(lián)合檢測3個蛋白對良惡性卵巢甲狀腺腫的診斷靈敏度可達100%。

綜上所述，鏡下明確卵巢甲狀腺組織結構，若難以確診良惡性，可通過CK19、Galectin-3及CD56等3種蛋白的檢測來進一步確診，3個蛋白聯(lián)合檢測，良惡性鑒別診斷靈敏度可達100%。

［1］Bokhari A，Rosenfeld GS，Cracchiolo B，etal.Cystic struma ovarii presenting with ascites and an elevated CA-125 level:a case report［J］.Reprod Med，2003，48(1):52

［2］林軍，應亞君，瞿海江，等.CK19、Galectin-3、HBME-1、p27及CyclinD1在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及意義［J］.中國癌癥雜志，2009，19(6):433

［3］ Guyétant S，Michalak S，Valo I，et al.Diagnosis of the follicular variantof papillary thyroid carcinoma Significance of immunohistochemistry［J］.Ann Pathol，2003，23(1):11

［4］Inohara H，Honjo Y，Yoshii T，et al.Expression of galectin-3 in fine-needle aspirates as a diagnosticmarker differentiating benign from malignant thyroid neoplasms［J］.Cancer，1999，85(11):2475

［5］解娜，薛逢貴，黃幼生，等.CD56、CK19、Galectin-3在甲狀腺病變鑒別診斷中的應用［J］.中國熱帶醫(yī)學，2013， 13(10):1193

［6］卿松，李曉紅，苗娜，等.良、惡性卵巢甲狀腺腫臨床病理分析［J］.中國癌癥雜志，2013，23(7):524

［7］張伶，關鍵，李梅，等.卵巢甲狀腺腫的CT診斷及病理對照(附3例報道及文獻復習)［J］.影像診斷與介入放射學，2011，20(5):330

［8］ Huh JJ，Montz FJ，Btistow RE.Struma ovarii associated with pseudo-Meigs，syndrome and elevated serum CA125［J］.Gynecol Oncol，2002，86(2):231