補腎疏肝湯對大鼠抗疲勞的作用機制研究※

牛占忠 張喜平 周紅軍 王 慧

(滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校針推教研室，河北 滄州 061000)

補腎疏肝湯對大鼠抗疲勞的作用機制研究※

牛占忠 張喜平1周紅軍 王 慧

(滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校針推教研室，河北 滄州 061000)

目的 觀察補腎疏肝湯對疲勞大鼠血紅蛋白、肝糖原及肌糖原含量的影響，探討其抗疲勞的作用機制。方法 將50只雄性健康SD大鼠隨機分為5組，即空白對照組、模型對照組及補腎疏肝湯低、中、高劑量組，每組各10只。除空白對照組外，其余4組大鼠采用力竭游泳加剝奪睡眠法制備疲勞大鼠模型，同時予相應(yīng)藥液40 mL/(kg·d)灌胃。14 d后取各組大鼠主動脈血，檢測大鼠血紅蛋白、肝糖原和肌糖原水平，進行比較。結(jié)果 與模型對照組比較，補腎疏肝湯低、中、高劑量組血紅蛋白、肝糖原及肌糖水平均升高(P<0.05，P<0.01)，其中補腎疏肝湯中劑量組血紅蛋白水平高于補腎疏肝湯低、高劑量組(P<0.05)，補腎疏肝湯高、中劑量組肝糖原、肌糖原水平高于補腎疏肝湯低劑量組(P<0.05)。結(jié)論 補腎疏肝湯能通過提高疲勞大鼠血紅蛋白、肝糖原和肌糖原水平而發(fā)揮抗疲勞作用。

疲勞綜合征，慢性；疾病模型，動物；大鼠；補腎；疏肝；血紅蛋白；肝糖原

慢性疲勞綜合征(chronic fatigue syndrome，CFS)是以持續(xù)或反復(fù)發(fā)作6個月或6個月以上的慢性疲勞為特征，并伴有短期記憶力或注意力下降、咽痛、頭痛、睡眠障礙等多種精神、神經(jīng)癥狀的一組癥候群[1]。隨著現(xiàn)代社會生活方式的改變及工作壓力的增大，CFS患病率逐年增高，世界衛(wèi)生組織(WHO)于20年前將其確認為一種疾病，美國疾病控制與預(yù)防中心預(yù)測，CFS將成為21世紀影響人類健康的主要公共衛(wèi)生問題之一[2]。目前，我國關(guān)于CFS的研究略滯后[3]。近年來，我們在臨床上運用補腎疏肝湯治療CFS取得了良好效果。本研究通過動物實驗，探討補腎疏肝湯的抗疲勞機制，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 成年雄性健康SD大鼠50只，清潔級，體質(zhì)量230～260 g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號 SCXK(京)201120001。飼養(yǎng)環(huán)境：實驗室清潔飼養(yǎng)，溫度21～26 ℃，濕度50%左右，噪聲60 dB，工作照明明暗各半。

1.1.2 實驗藥品及試劑 補腎疏肝湯，藥物組成：熟地黃20 g，淫羊藿10 g，枸杞子15 g，生地黃20 g，玄參15 g，麥門冬15 g，當(dāng)歸12 g，川芎10 g，柴胡10 g，枳殼10 g，黃芩12 g，黃連6 g，甘草6 g。以上藥物按比例加重蒸水浸泡1 h后，武火煎開，文火煎煮20 min后濾取藥液，藥渣再加重蒸水煎煮20 min后濾取藥液。合并2次藥液，濃縮至含生藥2 g/mL藥液，滅菌密封備用。肌糖原及肝糖原測定試劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.1.3 主要儀器 大鼠實驗泳缸(自制)；剝奪睡眠用加鐵絲網(wǎng)的塑料盆；Sysmex KX-21N血細胞分析儀，日本東亞公司；電子天平，ES461型，上?；ǔ彪娖饔邢薰?；秒表等。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 將50只雄性SD大鼠隨機分為5組，即空白對照組、模型對照組、補腎疏肝湯低劑量組、補腎疏肝湯中劑量組及補腎疏肝湯高劑量組，每組各10只。

1.2.2 模型制備 各組大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，除空白對照組外，其余4組大鼠采用力竭游泳加剝奪睡眠20 h方法[4]制備疲勞大鼠模型。具體方法：每日9：00，大鼠在水深50 cm，水溫(25±1) ℃的玻璃游泳缸(60 cm×40 cm×100 cm)中，尾根部綁縛體質(zhì)量5%的鉛皮，行1次力竭游泳，并記錄力竭游泳時間(力竭標準：大鼠肢體游泳動作特別失調(diào)、慌張，泳缸內(nèi)游泳范圍逐漸縮小，基本不會大范圍游動，僅在泳缸一處勉強維持浮于水面。鼻尖部頻繁在水面上下浮動，頭部完全沒入水面下 10 s 不能浮出)[4]。然后從水中將大鼠撈出，熱風(fēng)機將皮毛吹干，放回籠中正常飼養(yǎng)。13：00放入水深1.5 cm塑料盒(用鐵絲網(wǎng)蓋住，大鼠不能逃脫且可以自由進食飲水)內(nèi)，予足夠飲食和水。每日1次，連續(xù)14 d。

1.2.3 給藥方法 在模型制備同時，補腎疏肝湯低、中、高劑量組大鼠分別予相應(yīng)濃度補腎疏肝湯40 mL/(kg·d) [分別含生藥17.28 g/(kg·d)、34.56 g/(kg·d)、69.12g(/kg·d)，分別相當(dāng)于人體用量的1、2、4倍]灌胃給藥。空白對照組及模型對照組予等容積0.9%氯化鈉注射液灌胃。

1.2.4 檢測指標及方法 在造模第14 d，大鼠末次力竭游泳后禁食24 h，0.03%水合氯醛腹腔麻醉后腹主動脈取血，血細胞分析儀檢測各組大鼠血紅蛋白。取大鼠肝臟及后腿肌肉，分別測定肝糖原和肌糖原(用蒽酮法)，操作方法嚴格按試劑盒說明書進行。

2 結(jié) 果

5組大鼠血紅蛋白、肝糖原及肌糖原水平比較見表1。

表1 5組大鼠血紅蛋白、肝糖原及肌糖原水平比較 ±s

與空白對照組比較，*P<0.05；與模型對照組比較，△P<0.05；與補腎疏肝湯中劑量組比較，#P<0.05；與補腎疏肝湯低劑量組比較，○P<0.05

由表1可見，與空白對照組比較，模型對照組血紅蛋白、肝糖原及肌糖原水平均明顯下降(P<0.05)。與模型對照組比較，補腎疏肝湯低、中、高劑量組血紅蛋白、肝糖原及肌糖水平均升高(P<0.05)。補腎疏肝湯中劑量組血紅蛋白水平高于補腎疏肝湯低、高劑量組(P<0.05)；補腎疏肝湯高、中劑量組肝糖原、肌糖原水平高于補腎疏肝湯低劑量組(P<0.05)。

3 討 論

CFS的病因及發(fā)病機制至今尚未被完全闡明，常見的學(xué)說主要有病毒感染、體內(nèi)免疫功能失調(diào)、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)異常、營養(yǎng)代謝障礙、心理社會因素及遺傳因素等。從中醫(yī)學(xué)角度來看，CFS相當(dāng)于“虛勞”范疇，其病因病機主要為外邪、情志、飲食、勞累及體質(zhì)等諸因素，引起臟腑(肺、心、肝、脾、腎)陰陽氣血功能失調(diào)，使臟腑生理功能低下，持續(xù)日久，導(dǎo)致臟腑氣血不足，氣血運行遲滯，經(jīng)絡(luò)痹阻，病久則氣血漸衰，導(dǎo)致腎精漸虧，腎氣漸虛，形成“虛勞”。諸多病因中，情志變化是重要的因素之一。情志不遂，肝失疏泄，肝氣郁滯，氣機不暢，運行腎氣乏力，則腎氣漸衰，形成肝郁腎虛的病理狀態(tài)，久則便成虛勞。所以，肝郁腎虛是虛勞形成的主要病機之一。針對這一病機，我們擬補腎疏肝湯，方中以熟地黃、淫羊藿、枸杞子平補腎陽；以生地黃、玄參、麥門冬滋腎陰；以柴胡、枳殼疏肝理氣；以當(dāng)歸、川芎行血；以黃芩、黃連清內(nèi)郁之肝火；以少量甘草調(diào)和諸藥。全方藥味精簡，配伍合理，共同起到補腎、疏肝、活血作用。

血紅蛋白是機體內(nèi)運輸氧、二氧化碳等的載體，能從肺攜帶氧經(jīng)由動脈血運送給組織，又能攜帶組織代謝所產(chǎn)生的二氧化碳經(jīng)靜脈血送到肺，再排出體外。血紅蛋白在機體中一般保持在恒定范圍之內(nèi)。在劇烈運動、缺氧的狀態(tài)下，血紅蛋白可應(yīng)激性增高，從而滿足機體供氧。如果機體體質(zhì)差，在應(yīng)激狀態(tài)不能生成更多的血紅蛋白應(yīng)激，消耗增多，則機體出現(xiàn)血紅蛋白減少。所以，在長時間高強度運動后，血紅蛋白含量可以反映機體氧和二氧化碳的交換能力，進而反映機體抗疲勞的能力，可以作為抗疲勞的指標。本研究結(jié)果顯示，相對于模型對照組，補腎疏肝湯高、中、低劑量都可以提高機體血紅蛋白含量，中劑量更為明顯。

機體活動需要能量，而供能最重要、快速的能源物質(zhì)是糖，它是滿足肌肉運動最主要的能源物質(zhì)。糖原是主要的能源儲備物質(zhì)，糖和糖原在體內(nèi)可以相互轉(zhuǎn)化。在機體調(diào)節(jié)下，血糖濃度高時，糖可以轉(zhuǎn)化為糖原儲存；血糖濃度低時，糖原又可以轉(zhuǎn)化為糖釋放到血液中，以維持血糖濃度。所以，糖原儲備的多少直接影響運動能力的強弱[5]。在機體劇烈運動時，肝糖原可以轉(zhuǎn)化為糖進入血液而供能；肌糖原通過無氧酵解，直接為肌肉供能，以延長運動時間[6]。因此，能量儲備物質(zhì)肝糖原和肌糖原可以作為機體抗疲勞指標。本實驗結(jié)果顯示，與模型對照組相比，補腎疏肝湯高、中、低劑量組均可以提高大鼠肝糖原和肌糖原含量，尤其是中、高劑量組效果更明顯(P<0.05)。所以，補腎疏肝湯可以通過提高機體糖原含量而使機體具有明顯的抗疲勞作用。

綜上所述，補腎疏肝湯可通過提高疲勞大鼠機體血紅蛋白及肌糖原、肝糖原的含量發(fā)揮其抗疲勞作用，其他具體機制還有待進一步研究。

[1] 劉愛霞，王雅娟，丁梅，等.健脾解郁消疲膏治療青年慢性疲勞綜合征40例臨床觀察[J].河北中醫(yī)，2014，36(11)：1625-1626.

[2] Hyland ME，Sodergren SC，Lewith GT.Chronic Fatigue Syndrome：The Role of Positivity to illness in Chronic Fatigue Syndrome Patients[J].J Health Psychol，2006，11(5)：731-741.

[3] 夏杰瓊，黃金.慢性疲勞綜合征中西醫(yī)治療的研究進展[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，19(21)：2720-2722.

[4] 鄭娟娟，趙毅，姚斐.慢性疲勞綜合征的動物造模方法研究概況[J].時珍國醫(yī)國藥，2009，20(9)：2289-2291.

[5] Nakatani A，Han DH，Hansen PA，et al.Effect of endurance exercise training on muscle glycogensupercompensation in rats[J].J Appl Physiol，1997，82(2)：711-715.

[6] 李良鳴，魏源，王步標.補氣活血中藥和力竭游泳對大鼠不同類型肌纖維LDH及其同功酶的影響[J].湖北三峽學(xué)院學(xué)報，1999，21(2)：67-70.

(本文編輯：曹志娟)

Investigation of anti-fatigue effect of Bushen-shugan decoction in rats and its mechanism

NIUZhanzhong*，ZHANGXiping，ZHOUHongjun，etal.

*TeachingandResearchSectionofAcupunctureandMassage，CangzhouSeniorMediccalSchool，Hebei，Cangzhou061000

Objective To investigate the effect of Bushen-shugan decoction on the contents of hemoglobin，hepatic glycogen and muscle glycogen in fatigued rats，and its mechanism of anti-fatigue.Methods 50 healthy male SD rats were randomly divided into five groups that blank control group，model control group，Bushen-shugan decoction low dose，middle dose and high dose group，10 rats in each group.Except the blank control group，the fatigued rat models were induced by exhaustive swimming and sleep deprivation in other four groups，and received corresponding medicine 40 mL/(kg·d)by gavage.The aortic blood was collected after 14 days in all groups，and the contents of hemoglobin，hepatic glycogen and muscle glycogen were detected and compared.Results As compared with model control group，the contents of hemoglobin，hepatic glycogen and muscle glycogen in Bushen-shugan decoction low dose，middle dose and high dose groups were increased (P<0.05)，and the hemoglobin content in Bushen-shugan decoction middle dose group was higher than that in Bushen-shugan decoction low dose and high dose group (P< 0.05)，the contents of hepatic glycogen and muscle glycogen in Bushen-shugan decoction middle dose and high dose group were higher than those in Bushen-shugan decoction low dose group (P< 0.05).Conclusion Bushen-shugan decoction can increase the contents of hemoglobin，hepatic glycogen and muscle glycogen in fatigued rats，thus play the anti-fatigue role.

Fatigue syndrome; Chronic; Disease model; Animals;Rats; Tonifying kidney; Soothing the liver; Hemoglobin; Hepatic glycogen

10.3969/j.issn.1002-2619.2015.09.029

※ 項目來源：河北省滄州市科技局2011年滄州市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計劃(編號：1123079ZD)

R872.7；R285.5

A

1002-2619(2015)09-1363-03

2014-03-03)

1 滄州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)?；A(chǔ)護理教研室，河北 滄州 061000作者簡介：牛占忠(1970—)，男，副主任醫(yī)師，碩士。研究方向：中醫(yī)藥防治亞健康狀態(tài)。