第三代HIV ELISA診斷試劑初篩試驗假陽性原因分析*

吳志奇，黃慧青，陳 丹，劉雁雁，倪 芳，宋為娟，謝而付，徐華國△

(1.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗學(xué)部 210029；2.江蘇省連云港市東方醫(yī)院檢驗科 222042 )

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·臨床探討·

第三代HIV ELISA診斷試劑初篩試驗假陽性原因分析*

吳志奇1，黃慧青2，陳 丹1，劉雁雁1，倪 芳1，宋為娟1，謝而付1，徐華國1△

(1.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗學(xué)部 210029；2.江蘇省連云港市東方醫(yī)院檢驗科 222042 )

目的 探討第三代HIV ELISA診斷試劑檢測HIV抗體假陽性的原因。方法 對HIV抗體初篩試驗呈陽性而確證試驗為陰性的90例患者(HIV抗體假陽性組)的臨床資料進行分析，與90例健康體檢者(健康對照組)的相關(guān)實驗室檢測指標進行比較，分析HIV抗體假陽性結(jié)果產(chǎn)生的原因。 結(jié)果 HIV假陽性組白細胞計數(shù)(WBC)、乳酸脫氫酶(LDT)、α-羥丁酸脫氫酶(HBDH)水平均顯著高于健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平明顯低于健康對照組，差異也有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 WBC、LDH和HBDH的異常升高及HDL-C的明顯降低與第三代HIV ELISA試劑初篩試驗假陽性密切相關(guān)。

人類免疫缺陷病毒抗體； 篩查試驗； 確證試驗； 假陽性

獲得性免疫缺陷綜合征即艾滋病(AIDS)，由HIV感染所致，已成為21世紀危害人類健康的主要疾病之一。為了能夠早期診斷HIV感染，篩查試驗極為重要[1]。但現(xiàn)有的篩查技術(shù)，依然難以避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，這給實驗室工作帶來諸多不便，也給臨床診斷帶來困擾。收集并分析了2010年1月至2014年4月在南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診的90例門診及住院患者的臨床資料，其HIV抗體初篩為陽性，經(jīng)南京市疾病預(yù)防控制中心確證為陰性，以期明確假陽性結(jié)果的具體原因，為早期、快速、準確診斷HIV感染提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 HIV抗體假陽性組為2010年1月至2014年4月在南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院及門診的HIV抗體初篩試驗呈陽性而確證試驗為陰性的資料完整的90例患者(HIV抗體假陽性組)，其中男42例，女48例，年齡20～98歲，平均(51.52±18.25)歲。健康對照組為該院健康體檢者90例，其中男42例，女48例，年齡24～86歲，平均(51.89±17.84)歲。研究對象均排除肝臟、血液系統(tǒng)和心腦血管疾病及惡性腫瘤。兩組研究對象年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.136，P=0.892)。

1.2 方法

1.2.1 HIV抗體檢測 初篩HIV抗體采用ELISA法，試劑為第三代診斷試劑，由上海科華生物工程股份有限公司提供，儀器為全自動酶聯(lián)免疫系統(tǒng)，包括MICROLAB STAR VENUS加樣系統(tǒng)和MICROLAB FAME分析系統(tǒng)。對初篩試驗陽性的標本，使用原試劑和膠體金試劑復(fù)檢。膠體金試劑由英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司提供。篩查陽性標本送南京市疾病預(yù)防控制中心做確證試驗。

1.2.2 其他實驗室指標檢測 生化指標檢測標本為早上空腹采集靜脈血3～4 mL，3 000 r/min離心5 min后分離血清于2 h內(nèi)進行檢測。所有生化指標均采用Olympus AU5400全自動生化分析儀進行測定，分析試劑由上海科華東菱診斷用品有限公司提供。血常規(guī)檢測使用EDTA-K2抗凝靜脈血，采用Sysmex EX2100血細胞分析儀及其配套試劑檢測。檢測指標包括：白細胞計數(shù)(WBC)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、α-羥丁酸脫氫酶(HBDH)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、脂蛋白a[LP(a)]。

2 結(jié) 果

從90例HIV抗體假陽性組標本ELISA法檢測S/CO值分布可見，S/CO≤6的標本占97.78%(88/90)，見表1。HIV抗體假陽性組WBC、AST、LDH、HBDH、HDL-C、LDL-C水平與健康對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。Spearman相關(guān)分析顯示，WBC、LDH、HBDH、HDL-C與ELISA法假陽性率的相關(guān)系數(shù)r分別為：0.308、0.446、0.549、-0.561，在置信度為0.01時，相關(guān)性是顯著的。Logistic回歸分析各檢測指標與假陽性結(jié)果的關(guān)系，見表3。

表1 90例HIV抗體假陽性標本ELISA法及膠體金法檢測結(jié)果比較(n)

表2 兩組生化指標及血常規(guī)檢測結(jié)果比較

續(xù)表2 兩組生化指標及血常規(guī)檢測結(jié)果比較

表3 假陽性標本檢測指標的Logistic回歸分析

3 討 論

目前，絕大多數(shù)實驗室采用ELISA法作為HIV抗體篩查試驗，假陽性結(jié)果不可避免。考慮到本院已經(jīng)采用全自動酶聯(lián)免疫系統(tǒng)進行HIV檢測，檢測步驟相比手工操作更加標準化，重復(fù)性好，人為因素的干擾明顯減少。同時，初篩試驗為陽性或有疑問時，會要求患者抽第2份標本進行重復(fù)檢測，也大大地減少了隨機誤差和系統(tǒng)誤差的影響。因此在分析HIV抗體假陽性標本的結(jié)果時不需要過多地考慮人為因素。

ELISA法檢測HIV抗體為陽性的標本再采用膠體金法進行復(fù)檢。膠體金法依靠肉眼判斷結(jié)果，容易受主觀因素影響。為避免漏檢，凡肉眼可見的弱反應(yīng)都判定為陽性，本文90例假陽性標本中，膠體金法檢測HIV陽性8例。S/CO為客觀指標，以S/CO≥1為陽性。本文90例HIV抗體確證陰性標本在用第三代ELISA試劑篩查時，S/CO為1.0～6.0的標本有88例，S/CO>6的標本有2例。可見隨著S/CO值的升高，假陽性例數(shù)明顯減少[2]。

為了找到疾病與假陽性之間的關(guān)系，本文對患者的其他實驗室指標檢測結(jié)果進行了分析，發(fā)現(xiàn)在90例HIV抗體假陽性標本所屬的患者中，有10例進行過自身抗體檢測，其中6例自身抗體檢測呈陽性，分別為風(fēng)濕科2例，腎科、呼吸科、消化科和感染科各1例，提示自身免疫性疾病產(chǎn)生的自身抗體可能導(dǎo)致HIV抗體假陽性，與之前的報道結(jié)論相近[3-4]。

90例HIV抗體假陽性標本中，WBC顯著高于健康對照組(P<0.05)，可能是因為90例患者中有36例來自血液科，占40%(36/90)。由于WBC升高伴巨脾癥可考慮腫瘤性疾病[5]，提示血液病患者自身或接受治療的情況可能對HIV抗體的檢測有影響。有研究表明，LDH可能與血液系統(tǒng)腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[6]。LDH水平與急性T細胞白血病患者骨髓血管增生程度呈正相關(guān)，且與腫瘤侵襲性及耐藥相關(guān)[7]。LDH存在于心肌、肝臟、骨骼肌、紅細胞等組織細胞的細胞質(zhì)和線粒體中，在惡性腫瘤發(fā)生時，LDH和HBDH活力就會明顯增高，血清中LDH和HBDH水平可以反映出細胞增殖和代謝等生物學(xué)性狀。由于白血病患者腫瘤細胞富含LDH和HBDH，而且具有較強的代謝性和增殖性，因此白血病患者血清LDH和HBDH水平顯著升高。本研究發(fā)現(xiàn)，HIV抗體假陽性標本的LDH和HBDH水平也明顯高于健康對照組(P<0.05)，提示腫瘤性疾病可能是導(dǎo)致HIV抗體假陽性的原因之一。AST、HBDH和LDH是心肌酶譜中的一部分，在心肌梗死的診斷中具有良好的臨床價值[8]。本研究中，HIV抗體假陽性組的AST、HBDH和LDH顯著高于對照組(P<0.05)，提示心肌梗死可能是引起HIV抗體假陽性的原因之一。

非高密度脂蛋白膽固醇是指除HDL-C以外其他脂蛋白中含有膽固醇的總和。即非高密度脂蛋白膽固醇等于TC減去HDL-C?？梢姺歉呙芏戎鞍啄懝檀寂cHDL-C呈負相關(guān)，即TC一定，HDL-C降低，則非高密度脂蛋白膽固醇增加。有研究發(fā)現(xiàn)，隨著非高密度脂蛋白膽固醇水平的升高，冠心病、心肌梗死、缺血性卒中的發(fā)病風(fēng)險也會增加[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，HIV抗體假陽性標本的TC水平與健康對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而HDL-C水平明顯低于健康對照組(P<0.05)，并且這90例標本中，HDL-C≤1 mmol/L的標本有56例，占62.22%(56/90)，這56例標本所屬的患者中，年齡≥50歲者占50%(28/56)，提示老年冠心病、心肌梗死、腦血管病及缺血性卒中等疾病可能是HIV抗體產(chǎn)生假陽性的風(fēng)險因素之一。Logistic回歸結(jié)果也表明WBC、LDH和HBDH的異常增高及HDL-C的明顯降低與第三代HIV ELISA初篩試驗假陽性密切相關(guān)。

本研究結(jié)果將為HIV檢測結(jié)果提供更加科學(xué)的解釋，為早期、快速并準確診斷HIV感染提供科學(xué)依據(jù)。

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國家自然科學(xué)基金青年項目(81302531)；江蘇省自然科學(xué)基金青年基金項目(BK20131018)；江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.19.051

A

1672-9455(2015)19-2937-03

2015-01-26

2015-04-12)

△通訊作者，E-mail：huaguoxu@njmu.edu.cn。