兩種降鈣素原定量檢測試劑盒的比較研究

李沛然，苑文雯，王 晗，朱劍功，何葉莉，郭桐生

(中國人民解放軍第三〇二醫(yī)院臨床檢驗醫(yī)學(xué)中心，北京 100039)

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·論 著·

兩種降鈣素原定量檢測試劑盒的比較研究

李沛然，苑文雯，王 晗，朱劍功，何葉莉，郭桐生△

(中國人民解放軍第三〇二醫(yī)院臨床檢驗醫(yī)學(xué)中心，北京 100039)

目的 比較馬鞍山國聲生物技術(shù)有限公司研制的降鈣素原(PCT)定量檢測試劑盒(免疫層析法)與已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品檢測結(jié)果的符合率和定量檢測的等效性，判斷其研制產(chǎn)品是否符合臨床使用要求。方法 選取2014年3～4月收集的各類臨床標(biāo)本122例，分別用兩種方法進行檢測，比較兩種試劑盒的檢測結(jié)果。統(tǒng)計軟件采用Bland-Altman方法分析、回歸分析、組內(nèi)相關(guān)分析及Pearson積距相關(guān)分析，分析兩種檢測方法的一致性。結(jié)果 cut off值為0.5 ng/mL時，兩種試劑盒分析的一致性為99.18%；cut off值為2 ng/mL時，兩種試劑盒分析的一致性為95.08%。一致性限度值為(0.205 7，0.088 4)，小于專業(yè)界值±0.5。Pearson相關(guān)系數(shù)為0.979 5，Spearman相關(guān)系數(shù)為0.972 1，兩種試劑盒的檢測結(jié)果顯著相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論 兩種試劑盒具有等效性。

降鈣素原； 定量； 比較

降鈣素原(PCT)是由116氨基酸組成的多肽，它由CALA-1基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。在非感染狀態(tài)下，甲狀腺C細(xì)胞主要分泌PCT，調(diào)節(jié)體液中的鈣濃度。健康狀態(tài)下，血液中PCT水平難以檢測到。當(dāng)嚴(yán)重細(xì)菌、真菌、寄生蟲感染及膿毒癥和多臟器功能衰竭時，PCT在血液中的水平升高。自身免疫、過敏和病毒感染時PCT不會升高。局部有限的細(xì)菌感染、輕微的感染和慢性炎癥不會導(dǎo)致其升高。細(xì)菌內(nèi)毒素在誘導(dǎo)過程中擔(dān)任了至關(guān)重要的作用。因此，血液PCT水平的檢測是炎癥診斷的一個重要指標(biāo)[3-5]。中國市場上定量檢測PCT的主要方法是化學(xué)放光法，檢測結(jié)果準(zhǔn)確、線性范圍很寬，但是設(shè)備和試劑昂貴，不適合在小醫(yī)院開展，特別是不適合現(xiàn)場檢測。馬鞍山國聲生物技術(shù)有限公司研制的PCT定量檢測試劑盒(免疫層析法)操作簡便、容易攜帶，但是其定量檢測能力有待驗證，本研究以羅氏電化學(xué)發(fā)光法作為驗證方法對其進行驗證，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年3～4月收集的各類臨床標(biāo)本122例，其中PCT異常(>0.5 ng/mL)的標(biāo)本數(shù)為51例。離心后收集血清或血漿置于2～8 ℃保存，2 d內(nèi)采用考核試劑和對照試劑同時進行臨床試驗?？己嗽噭篜CT定量檢測試劑盒(免疫層析法，中國國聲生物技術(shù)有限公司)，批號0122131101；驗證試劑：PCT檢測試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法，德國羅氏)，批號17333903，對照試劑配套專用儀器為羅氏的Cobas e601。

1.2 方法

1.2.1 馬鞍山國聲生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的PCT定量檢測試劑盒(免疫層析法)的檢測，所有操作均按照試劑盒操作說明嚴(yán)格執(zhí)行。在RH-100上進行操作。

1.2.2 羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司生產(chǎn)的PCT檢測試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法)的檢測,所有操作均按照試劑盒操作說明嚴(yán)格執(zhí)行。

1.3 觀察指標(biāo) 將不同試劑盒所得數(shù)據(jù)錄入EXCEL 2007，采用統(tǒng)計軟件PRISM分析比較兩組數(shù)據(jù)的異同，判斷馬鞍山國聲生物技術(shù)有限公司研制的PCT定量檢測試劑盒(免疫層析法)是否符合臨床使用要求。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

1.4.1 吻合度 分別在cut off 值為0.5 ng/mL和2 ng/mL時，計算考核試劑與對照試劑分析的一致率；實驗與對照結(jié)果不符合和有疑問的標(biāo)本可用確證試劑檢測。與確證試劑檢測結(jié)果的一致率可作為分析差異的指標(biāo)。根據(jù)研究假定，若診斷一致率大于90%，可以推斷考核試劑和參比試劑具有等效性，考核試劑臨床應(yīng)用有效。上述3項指標(biāo)的檢驗均不做檢驗水準(zhǔn)的調(diào)整。

1.4.2 相關(guān)性 對定量檢測結(jié)果進行了Bland-Altman方法、配對t檢驗及Spearman、Pearson積距相關(guān)分析，考核試劑與對照試劑的一致性限度值小于專業(yè)界值±0.5；考核試劑與對照試劑之間的相關(guān)性分析得出相關(guān)系數(shù)若大于0.90，且二者間具顯著正相關(guān)(P<0.05)，為滿足臨床等效定量檢測使用要求。

2 結(jié) 果

2.1 考核試劑與對照試劑對臨床標(biāo)本檢測的實驗結(jié)果比較 在cut off 值為0.5 ng/mL時，計算考核試劑與對照試劑分析的一致率，見表1。以對照試劑結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)進行比較：一致率=(PCT≥0.5 ng/mL標(biāo)本診斷一致的例數(shù)+PCT<0.5 ng/mL標(biāo)本診斷一致的例數(shù))/總標(biāo)本數(shù)=(70+51)/122=99.18%。在cut off 值為2 ng/mL時，計算考核試劑與對照試劑分析的一致率(見表2)。以對照試劑結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)進行比較：一致率=(PCT≥2.0 ng/mL標(biāo)本診斷一致的例數(shù)+PCT<2.0 ng/mL標(biāo)本診斷一致的例數(shù))/總標(biāo)本數(shù)=101+15/122=95.08%。cut off 值為0.5 ng/mL和2 ng/mL時，考核試劑與對照試劑分析的診斷一致率均大于90%，可以推斷考核試劑和參比試劑具有等效性。

表1 評價cut off值為0.5ng/mL的一致性(n)

表2 評價cut off值為2.0 ng/mL的一致性(n)

2.2 考核試劑與對照試劑定量檢測結(jié)果不一致情況分析 cut off 值為0.5 ng/mL時，有1例標(biāo)本的考核試劑與對照試劑定量檢測結(jié)果不一致，分別為0.512、0.440 ng/mL，確證試劑檢測結(jié)果為0.480 ng/mL。確證結(jié)果與對照試劑結(jié)果一致，該例標(biāo)本PCT結(jié)果在0.25～0.50 ng/mL的灰色區(qū)內(nèi)，有PCT異常的疑問。cut off 值為2 ng/mL時考核試劑與對照試劑定量檢測結(jié)果不一致的6標(biāo)本確證實驗結(jié)果，見表3。6例考核試劑與對照試劑實驗結(jié)果不一致的標(biāo)本中，有3例考核試劑檢測結(jié)果顯示陽性，而對照試劑檢測結(jié)果陰性，有2例在臨界值附近，差距較大的只有1例。

2.3 考核試劑與對照試劑對標(biāo)本定量檢測結(jié)果的相關(guān)性統(tǒng)計

2.3.1 Bland-Altman方法統(tǒng)計分析 根據(jù)兩種檢測系統(tǒng)的定量檢測結(jié)果，計算了兩組測量值差值對應(yīng)于測量值均值的散點圖，即D-A圖(圖1)，其中D=Xa-Xb，A=(Xa+Xb)/2。分析發(fā)現(xiàn)，考核試劑與對照試劑檢測數(shù)據(jù)的一致性限度值為(0.205 7，0.088 4)，小于專業(yè)界值±0.5。Bland-Altman方法統(tǒng)計分析表明考核試劑與對照試劑定量檢測PCT有可靠的一致性，滿足臨床等效使用要求。

表3 cut off 值為2.0 ng/mL時6例標(biāo)本確證實驗結(jié)果(ng/mL)

圖1 考核試劑與對照試劑的D-A分析圖

2.3.2 相關(guān)性統(tǒng)計分析 考核試劑與對照試劑定量檢測結(jié)果的Pearson相關(guān)系數(shù)為0.979 5，考核試劑與對照試劑定量檢測結(jié)果之間具顯著性相關(guān)(P<0.01)?？己嗽噭┡c對照試劑定量檢測結(jié)果的Spearman相關(guān)系數(shù)為0.972 1，考核試劑與對照試劑定量檢測結(jié)果之間具顯著性相關(guān)(P<0.01)。以上分析均支持考核試劑產(chǎn)品能夠達(dá)到與已上市同類對照檢測方法的定量檢測效能，符合臨床使用要求，見圖2。

圖2 考核試劑與對照試劑定量檢測PCT的相關(guān)分布圖

3 討 論

PCT用于診斷細(xì)菌感染特異性強，靈敏度高，尤其是對膿毒血癥及敗血癥的早期診斷具有重要意義。敗血癥作為一種全身性炎癥反應(yīng)綜合征，其病死率可達(dá)25%以上，已經(jīng)成為ICU患者死亡的重要原因之一[4]?，F(xiàn)階段常用臨床檢測指標(biāo)受影響較大且其發(fā)現(xiàn)相對較晚，而PCT不僅特異性強，而且其水平升高明顯早于其他指標(biāo)，對于提高診斷的準(zhǔn)確性和早期診斷具有重要意義。膿毒癥也屬于一類全身性炎癥反應(yīng)綜合征，且伴有明顯的多器官衰竭癥狀，PCT作為嚴(yán)重全身性感染的特異性檢測指標(biāo)，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，為膿毒癥等全身性炎癥反應(yīng)綜合征的診斷提供了很好的依據(jù)[1-2]。

以羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司的PCT檢測試劑盒對照試劑，馬鞍山國聲生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的PCT定量檢測試劑盒(免疫層析法)作為考核試劑，共檢測了臨床標(biāo)本122例，cut off 值為0.5 ng/mL(全身性細(xì)菌感染和抗菌藥物啟用指標(biāo))時，PCT指標(biāo)異常標(biāo)本數(shù)為51例(異常率為41.80%)，考核試劑與對照試劑分析的一致性為99.18%；cut off值為2 ng/mL(敗血癥確認(rèn)指標(biāo))時，PCT指標(biāo)異常標(biāo)本數(shù)為18例(異常率為14.75%)，考核試劑與對照試劑分析的一致性為95.08%。進一步對考核試劑與對照試劑的定量檢測結(jié)果進行了Bland-Altman方法分析、回歸分析、組內(nèi)相關(guān)分析及Pearson積距相關(guān)分析。Bland-Altman方法分析表明，計算得出考核試劑與對照試劑檢測數(shù)據(jù)的一致性限度值為(0.205 7，0.088 4)，小于專業(yè)界值±0.5。考核試劑與對照試劑定量檢測結(jié)果的Pearson相關(guān)系數(shù)為0.979 5，考核試劑與對照試劑定量檢測結(jié)果之間顯著相關(guān)(P<0.01)。考核試劑與對照試劑定量檢測結(jié)果的Spearman相關(guān)系數(shù)為0.972 1，考核試劑與對照試劑定量檢測結(jié)果之間顯著相關(guān)(P<0.01)。

綜上所述，馬鞍山國聲生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的PCT定量檢測試劑盒(免疫層析法)能夠達(dá)到與已上市同類對照檢測方法的定量檢測效能，符合臨床使用要求。

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Comparative study of two kinds of procalcitonin quantitative detection kit

LIPei-ran,YUANWen-wen,WANGHan,ZHUJian-gong,HEYe-li,GUOTong-sheng△

(ClinicalLaboratoryMedicalCenter,302HospitalofPLA,Beijing100039,China)

Objective To compare the coincidence rate and the equivalence of quantitative detection between the procalcitonin(PCT) quantitative detection kit(immunochromatography) researched and developed by the Maanshan Guosheng Biotechnology Co.,Ltd.and the approved marketed similar products to judge whether the developed product meeting the clinical use requirements.Methods 122 cases of various clinical samples collected from March to April 2014 were selected and detected by the two kinds of method.The detection results by using the two kinds of reagent kit were compared.The statistical software adopted the Bland-Altman analysis,regression analysis,intraclass correlation analysis and Pearson product correlation analysis.The consistency of the two kinds of detection method was analyzed.Results When the cut off value was 0.5 ng/mL,the analysis consistency of the two kinds of method was 99.18%;when the cut off value was 2 ng/mL,which was 95.08%.The consistency limit values were 0.205 7 and 0.088 4,which were less than the profession value±0.5.The Pearson correlation coefficient was 0.979 5,the Spearman correlation coefficient was 0.972 1,showing the detection results by the two kinds of reagent kit had a significant correlation(P<0.01).Conclusion The two kinds of reagent kit possess the equivalence.

procalcitonin; quantitative; comparison

李沛然，男，本科，檢驗技師，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗實驗室基礎(chǔ)研究。

△通訊作者，E-mail：gts302@126.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.19.024

A

1672-9455(2015)19-2873-02