微粒色譜法和高效液相色譜法檢測糖化血紅蛋白的相關(guān)性研究

楊朝美，馬 珍

(重慶市急救中心檢驗(yàn)科 400015)

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·論 著·

微粒色譜法和高效液相色譜法檢測糖化血紅蛋白的相關(guān)性研究

楊朝美，馬 珍△

(重慶市急救中心檢驗(yàn)科 400015)

糖化血紅蛋白； 相關(guān)性； 微粒色譜法； 高效液相色譜法

近年來，隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，糖尿病的患病率逐年上升，成為威脅大眾健康的主要慢性非傳染性疾病之一。血糖水平的大幅度變化會激發(fā)多途徑代謝從而損傷微血管和大血管[1-2]，血糖控制較差的糖尿病患者更易并發(fā)感染,其致死、致殘率高[3]。糖化血紅蛋白(HbA1c)水平能體現(xiàn)患者近2個(gè)月的血糖情況，其作為糖尿病血糖回顧性觀察的常用指標(biāo)，在病情評估的同時(shí)，有助于臨床醫(yī)生調(diào)整患者的降糖方案。近年來，HbA1c作為糖尿病患者的血糖監(jiān)測指標(biāo)在臨床上被廣泛認(rèn)可，臨床醫(yī)生已將其作為評估糖尿病血糖控制水平的相對金標(biāo)準(zhǔn)[4]。微粒色譜法和高效液相色譜法是檢測HbA1c的兩種常用方法，根據(jù)美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)的指南文件EP9-A2[5]，本研究比較分析了上述兩種方法用以HbA1c檢測的相關(guān)性?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 樣本標(biāo)準(zhǔn)遵循EP9-A2[5]文件要求，隨機(jī)選定抽血時(shí)間，每日從本院門診和住院患者中選取8例全血標(biāo)本，連續(xù)收集5 d，共收集40例，其中男17例、女23例，所有標(biāo)本均無溶血，均以乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝，均在6 h以內(nèi)檢測。

1.2 儀器與試劑 微粒色譜法檢測系統(tǒng)采用挪威NycoCard?ReaderⅡ檢測儀；高效液相色譜法檢測系統(tǒng)采用上?；葜嗅t(yī)療科技有限公司MQ-2000PT糖化血紅蛋白儀。所有試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均為相應(yīng)廠家提供的配套產(chǎn)品。

1.3 檢測方法 按照EP9-A2[5]文件的方法采樣后，以統(tǒng)計(jì)學(xué)隨機(jī)標(biāo)記的方法標(biāo)注每日的8份臨床全血標(biāo)本，按順序運(yùn)用2個(gè)檢測系統(tǒng)檢測HbA1c，再反序檢測，即每份標(biāo)本獲得2個(gè)值，連續(xù)測定5 d。檢測過程保證儀器的良好性能，由本院檢驗(yàn)科經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)章進(jìn)行檢測，使每日獲得的結(jié)果有良好的質(zhì)量控制。X(比較方法)和Y(試驗(yàn)方法)分別為微粒色譜法檢測系統(tǒng)和高效液相色譜法檢測系統(tǒng)。

1.3.3 數(shù)據(jù)作散點(diǎn)圖和偏倚圖 以比較方法測定的結(jié)果為X,試驗(yàn)方法測定的結(jié)果為Y，制作散點(diǎn)圖和偏倚圖，計(jì)算回歸方程，評價(jià)線性程度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 將兩個(gè)檢測系統(tǒng)所測得的對應(yīng)的HbA1c數(shù)據(jù)，根據(jù)EP9-A2[5 ]文件中的統(tǒng)計(jì)分析流程，運(yùn)用Excel2012進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.3 相關(guān)散點(diǎn)圖及偏倚圖分析 以比較方法結(jié)果為X，試驗(yàn)方法結(jié)果為Y制作散點(diǎn)圖，相關(guān)系數(shù)r=0.993，r2=0.986，線性回歸方程為Y=1.088 5X-0.521 4，回歸線性良好，且r≥0．975，表明兩種方法的數(shù)據(jù)相關(guān)性好，見圖1。兩種方法測定的平均值無明顯差異，且在X軸兩側(cè)均勻排列，見圖2。

圖1 挪威NycoCard?ReaderⅡ檢測儀和

Xi(%)

圖2 兩種檢測系統(tǒng)的偏倚圖

3 討 論

糖尿病患者的血糖監(jiān)測具有重要的臨床意義，臨床上主要通過檢測末梢血糖反映患者的實(shí)時(shí)血糖水平；而長期的血糖水平則主要依據(jù)HbA1c水平的檢測值，該值可反映患者近2個(gè)月的血糖控制情況[7]。人體血液紅細(xì)胞中的正常血紅蛋白(Hb)主要由HbA1組成，占97%；其次為HbA2和HbF，分別占2.5%、0.5%。糖化血紅蛋白為葡萄糖分子與血紅蛋白A組分的組合產(chǎn)物，通過紅細(xì)胞的非酶促反應(yīng)，生成HbA1c酮胺化合物。HbA1c水平可體現(xiàn)被檢測者的長期血糖水平，對糖尿病患者的血糖控制和用藥方案的制訂具有指導(dǎo)作用。目前用于HbA1c檢驗(yàn)的方法較多，主要依靠電荷或被檢測物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢測。而色譜法是臨床檢測HbA1c的“金標(biāo)準(zhǔn)”，主要包括陽離子交換層析法和高效液相色譜法[8-9]。本研究通過比較分析同一被測物微粒色譜法與高效液相色譜法的臨床評價(jià)結(jié)果，分析其檢驗(yàn)性能，為實(shí)驗(yàn)室HbA1c檢測方法的選擇提供指導(dǎo)和參考依據(jù)。

挪威NycoCard?ReaderⅡ檢測儀(微粒色譜法)的原理：檢測包含紅、綠、藍(lán)3對發(fā)光二極管[10]。光電二極管路線以白色樣品為參比樣品，對檢測樣品的光反射情況進(jìn)行測量。在NycoCard?ReaderⅡ檢測儀的測試菜單中選擇某一種檢測后，檢測所需發(fā)光二極管將照亮待測樣品，樣品對某些光的反射將在光電二極管回路中引起相反的電流，從而對電容進(jìn)行放電，使其電壓從V1線性降低至V2。電壓降至V2后，微處理器接受系統(tǒng)發(fā)送的訊號，并計(jì)算電壓從V1降低至V2所需時(shí)間(T)。反射光密度(I)與T呈反比，微處理器將時(shí)間轉(zhuǎn)換為濃度值，并將其顯示出來。

MQ-2000PT糖化血紅蛋白分析儀采用高效液相色譜法，由于非糖化血紅蛋白帶正電荷，而HbA1c幾乎不帶電，因此可根據(jù)所帶電量的不同將其分離。固定相選擇弱酸性陽離子交換固定相，存在交換陽離子的基團(tuán)，能同帶正電荷的非糖化血紅蛋白結(jié)合，在低濃度下洗脫出HbA1c，再利用高濃度洗脫液洗脫獲得非糖化血紅蛋白。被分離出來的血紅蛋白洗脫液通過415nm波長的紫外光檢測吸光度，得到相應(yīng)的血紅蛋白層色譜。HbA1c水平以色譜圖中HbA1c的峰面積占血紅蛋白面積的百分率表示。高效液相色譜法分離效率高，能分離HbF、L-A1c等血紅蛋白的變異體，降低血紅蛋白變異體對穩(wěn)定的HbA1c檢測結(jié)果的干擾，使HbA1c的測定結(jié)果更加可靠。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，上述兩種檢測方法的重復(fù)性好，相互間無離群點(diǎn)存在；r=0.993，符合r≥0.975，相關(guān)性好。兩種方法在可進(jìn)行相關(guān)性研究的范圍內(nèi)，結(jié)果無明顯差異。此外，系統(tǒng)誤差可接受，偏倚分布佳。兩種方法的檢測原理雖有差異，檢測手段雖然不同，但實(shí)際所測結(jié)果無明顯差異。臨床上同一實(shí)驗(yàn)室采用多種方法測定HbA1c的現(xiàn)象較多，而實(shí)際的臨床應(yīng)用要求所獲得的結(jié)果不受測定方法的影響，因此實(shí)驗(yàn)室在應(yīng)用不同方法測定HbA1c時(shí)必須可比、可替代。微粒色譜法和高效液相色譜法測定的HbA1c結(jié)果具有可比性和較好的相關(guān)性，表明兩種方法的測定結(jié)果類似，可相互替換，均可用于臨床。

綜上所述，微粒色譜法和高效液相色譜法可比性高，相關(guān)性好，符合臨床需求。實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自身?xiàng)l件，選擇適合的測定方法。

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Study on relationship between particle chromatography and high performance liquid chromatography in detection of glycosylated hemoglobin

YANGChao-mei,MAZhen△

(DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingEmergencyMedicalCenter,Chongqing400015，China)

glycosylated hemoglobin; correlation; particulate chromatography; high performance liquid chromatography

楊朝美，女，本科，主管檢驗(yàn)技師，主要從事生化檢驗(yàn)研究?！?/p>

,E-mail:mzhen100@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.024

A

1672-9455(2015)05-0641-03

2014-10-26

2014-12-28)