干化學(xué)與濕化學(xué)分析儀的可比性分析

李金密，龔春梅，何秀玲，陳開(kāi)春，王 豐

(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所檢驗(yàn)科，重慶 400042)

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·論 著·

干化學(xué)與濕化學(xué)分析儀的可比性分析

李金密，龔春梅，何秀玲，陳開(kāi)春，王 豐△

(第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所檢驗(yàn)科，重慶 400042)

目的 探討不同生化分析儀16項(xiàng)常規(guī)生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果的可比性。方法 參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)EP9-A2文件，以貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀為參比系統(tǒng)，以強(qiáng)生VITROS5600全自動(dòng)生化免疫分析儀為待比系統(tǒng)，用患者新鮮血清分別在2臺(tái)儀器上檢測(cè)16項(xiàng)常規(guī)生化指標(biāo)，檢查離群點(diǎn)，計(jì)算相關(guān)系數(shù)和直線回歸方程，評(píng)估2個(gè)系統(tǒng)的預(yù)期偏差，并以美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正案(CLIA′88)對(duì)室間評(píng)估的允許誤差的1/2為判斷依據(jù)，對(duì)強(qiáng)生VITROS5600干化學(xué)系統(tǒng)的臨床可接受性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果 參比系統(tǒng)與待比系統(tǒng)具有良好的相關(guān)性，除丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酐(Crea)及部份醫(yī)學(xué)決定水平處天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總鈣(Ca)、血清總蛋白(TP)測(cè)定結(jié)果的偏差外，其余指標(biāo)測(cè)定結(jié)果的偏差臨床均可接受。結(jié)論 強(qiáng)生VITROS5600干化學(xué)分析儀與Beckman DXC800全自動(dòng)生化分析儀的檢測(cè)結(jié)果具有可比性，但ALT、AST、LDH、Ca、Crea、TP臨床比對(duì)多水平處的偏差不可接受，仍有必要針對(duì)不同方法建立不同的參考區(qū)間。

干化學(xué)； 醫(yī)學(xué)決定水平； 可比性

近年來(lái)隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，為滿(mǎn)足不同層次的臨床需求，各檢驗(yàn)科配備了多套生化分析系統(tǒng)分別承擔(dān)急診和平診的生化檢驗(yàn)工作。干化學(xué)法以其操作簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，成為急診生化檢測(cè)的一種新手段[1]。但在臨床實(shí)踐中，同一標(biāo)本同一項(xiàng)目在不同儀器上的檢測(cè)結(jié)果可能存在一定的差異，在一定程度上會(huì)影響臨床診療過(guò)程[2-3]。因此，分析不同檢測(cè)系統(tǒng)之間的相關(guān)性及各個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的檢驗(yàn)性能具有十分重要的意義[4]。故本文參考美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)的EP9-A2文件要求，以貝克曼DXC800系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果為基準(zhǔn)，將強(qiáng)生VITROS5600干化學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果與基準(zhǔn)儀器檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較及偏倚評(píng)估。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集本院門(mén)診及住院患者不同濃度新鮮血清40份，濃度覆蓋各項(xiàng)目醫(yī)學(xué)決定水平，排除黃疸、乳糜、溶血標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑 美國(guó)貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀(簡(jiǎn)稱(chēng)DXC800)及原裝配套試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品；美國(guó)強(qiáng)生VITROS5600全自動(dòng)生化免疫分析儀(簡(jiǎn)稱(chēng)VITROS5600)及原裝配套試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本處理 DXC800具有較好的量值傳遞性能，測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)小，重復(fù)性好，參加室間質(zhì)評(píng)成績(jī)優(yōu)秀，且定期校準(zhǔn)，測(cè)定結(jié)果可靠，作為參比系統(tǒng)[4-5]；美國(guó)強(qiáng)生VITROS 5600作為待比系統(tǒng)[6-7]。參照NCCLS的 EP9-A2文件要求[5-8]，每日選取患者新鮮血標(biāo)本8份，使用上述2個(gè)系統(tǒng)對(duì)血清總蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、淀粉酶(AMY)、尿酸(UA)、尿素(Urea)、鈉(Na+)、氯(Cl-)、鉀(K+)、葡萄糖(Glu)、總膽紅素(TBIL)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總鈣(Ca)、肌酐(Crea)分別進(jìn)行雙份重復(fù)測(cè)定，連續(xù)5 d，共分析40個(gè)標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)前按常規(guī)方法進(jìn)行檢測(cè)前的維護(hù)和保養(yǎng)，確保儀器處于正常運(yùn)行狀態(tài)，每個(gè)指標(biāo)的檢測(cè)嚴(yán)格按照廠商試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，室內(nèi)質(zhì)控在控，各標(biāo)本均在采集后2 h內(nèi)完成測(cè)定。

1.3.2 離群值檢查 按EP9-A2文件進(jìn)行方法間離群值檢查。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 (1)參比方法(X)測(cè)定范圍的檢驗(yàn)：參比方法的測(cè)定范圍是否合適，采用相關(guān)系數(shù)(r)進(jìn)行評(píng)估，若r≥0.975或r2≥0.95，認(rèn)為2種方法具有良好的相關(guān)性；否則，說(shuō)明2種方法的相關(guān)性不高。(2)計(jì)算線性回歸方程：以待比方法Y=bX+a計(jì)算臨床可接受性，把各指標(biāo)的醫(yī)學(xué)決定水平值代入回歸方程，計(jì)算待比方法(Y)與參比方法(X)之間的預(yù)期值、預(yù)期偏差、相對(duì)偏差(SE%)。(3)臨床可接受性判斷：以美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正案(CLIA′88)對(duì)室間評(píng)估的允許誤差為判斷依據(jù)，要求方法學(xué)比較評(píng)估的SE小于或等于CLIA′88標(biāo)準(zhǔn)的1/2屬臨床可接受水平，即不同檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)定結(jié)果具有可比性。

2 結(jié) 果

2.1 離群點(diǎn)判斷 按EP9-A2文件進(jìn)行方法間離群點(diǎn)檢驗(yàn)，此次所驗(yàn)證的16項(xiàng)常規(guī)生化指標(biāo)均未發(fā)現(xiàn)離群點(diǎn)。

2.2 各指標(biāo)相關(guān)系數(shù)及直線回歸方程 經(jīng)線性回歸分析結(jié)果顯示，貝克曼DXC800系統(tǒng)與強(qiáng)生VITROS5600干化學(xué)系統(tǒng)16項(xiàng)目常規(guī)生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果具有良好的相關(guān)性，r2均大于0.95，且回歸分析的斜率和截距可靠。見(jiàn)表1。

表1 各指標(biāo)相關(guān)系數(shù)及直線回歸方程待比方法 與參比方法的

2.3 實(shí)驗(yàn)方法的預(yù)期偏差及臨床可接受性評(píng)價(jià) 本次共研究16個(gè)常規(guī)生化項(xiàng)目發(fā)現(xiàn)TP在低水平的預(yù)期偏差不能接受，且AST、LDH、ALT、Crea、Ca這5個(gè)指標(biāo)在多水平的預(yù)期偏差不能接受，其余各指標(biāo)各不同醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏差均小于1/2 CLIA′88，可以接受。見(jiàn)表2。

表2 實(shí)驗(yàn)方法的預(yù)期偏差可接受性評(píng)價(jià)

續(xù)表2 實(shí)驗(yàn)方法的預(yù)期偏差可接受性評(píng)價(jià)

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)按EP9-A2文件要求采用患者血清標(biāo)本進(jìn)行方法比對(duì)，VITROS 5600與DXC800的檢測(cè)結(jié)果具有良好的相關(guān)性，但偏差評(píng)估結(jié)果顯示本次共研究16個(gè)常規(guī)生化指標(biāo)發(fā)現(xiàn)TP在低水平的預(yù)期偏差不能接受，且AST、LDH、ALT、Crea、Ca這5個(gè)項(xiàng)目在多水平的預(yù)期偏差不能接受，其余各指標(biāo)各不同醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏差均小于1/2 CLIA′88，可以接受。分析出現(xiàn)預(yù)期偏差不可接受的原因，TP低水平處偏差不可接受可能是由于方法學(xué)不一致所致。干化學(xué)分析儀按濃度-反射光度關(guān)系，將非線性關(guān)系轉(zhuǎn)換成線性關(guān)系；而濕化學(xué)分析儀遵循Lam-bert-Beer定律，根據(jù)溶液顏色的深淺或測(cè)定光線被溶液吸收的程度來(lái)測(cè)定物質(zhì)含量，即濃度-透光度的關(guān)系，呈線性。而AST、LDH、ALT、Crea、Ca這5項(xiàng)指標(biāo)不但分析方法不一致，兩個(gè)系統(tǒng)的基本反應(yīng)原理也不盡相同，從而可以解釋兩者檢測(cè)結(jié)果偏差在多水平不可接受。

強(qiáng)生干化學(xué)分析儀所使用的干片試劑由多層薄膜組成，第1層為分布擴(kuò)散層，能使標(biāo)本均勻分布，過(guò)濾大分子，將溶血、高血脂及膽紅素干擾減低至最低，同時(shí)還提供反射測(cè)定的背景；第2層為試劑層，包含干性試劑，控制反應(yīng)順序；第3層為指示劑層，包含染料以產(chǎn)生顯色復(fù)合物[9]。其獨(dú)特的多層膜技術(shù)，不僅能掩蓋待測(cè)物的有色物質(zhì)并提供背景，還能選擇性地阻留或去除干擾物質(zhì)，有效提高其抗干擾能力[10]。VITROS 5600的干片試劑主要有2種類(lèi)型，其中比色/速率干片主要用以檢測(cè)TP、ALB、AMY、AST、AMY等，通過(guò)顏色的變化來(lái)測(cè)定化合物的濃度；電動(dòng)電勢(shì)干片主要用以檢測(cè)K+、Na+、Cl-離子，通過(guò)測(cè)定兩極間電勢(shì)變化檢測(cè)相應(yīng)的離子濃度[11]。

DXC 800與VITROS 5600對(duì)ALT、AST測(cè)定的底物一樣，化學(xué)反應(yīng)原理一樣，除反應(yīng)體系的干、濕差別外，其區(qū)別主要在于VITROS 5600干化學(xué)反應(yīng)體系中加入了磷酸吡哆醛作為輔基，可增強(qiáng)ALT的活性，所以理論上同一樣本的ALT測(cè)定值，VITROS 5600應(yīng)高于DXC 800。在DXC 800系統(tǒng)對(duì)LDH的檢測(cè)中，LDH催化L-乳酸氧化為丙酮酸，同時(shí)將β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)可逆地還原為還原型β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，系統(tǒng)通過(guò)監(jiān)測(cè)340 nm處的吸光度變化檢測(cè)LDH活性。而VITROS 5600系統(tǒng)則通過(guò)反射光光度測(cè)定法監(jiān)測(cè)LDH催化丙酮酸和 NADH 轉(zhuǎn)化為乳酸和 NAD+的氧化過(guò)程，再將其轉(zhuǎn)化成LDH活性而進(jìn)行檢測(cè)。在Ca的測(cè)定中，DXC800系統(tǒng)采用一個(gè)鈣離子選擇電極和一個(gè)鈉參考電極測(cè)定總鈣濃度；而強(qiáng)生VITROS5 600系統(tǒng)采用比色法，即鈣與偶氮胂Ⅲ染料形成一種復(fù)合物，使最大吸收峰發(fā)生偏移，孵育后有色復(fù)合物的反射強(qiáng)度通過(guò)分光光度法進(jìn)行測(cè)定[12]。DXC800系統(tǒng)采用堿性苦味酸法測(cè)定Crea濃度，標(biāo)本中的Crea與堿性苦味酸結(jié)合，生成一種紅色絡(luò)合物，光吸收率顯示與樣品中Crea濃度成正比[13]。VITROS5600系統(tǒng)測(cè)定Crea濃度時(shí)，Crea擴(kuò)散到試劑層水解為肌酸，通過(guò)肌酸脒基水解酶的作用，Crea轉(zhuǎn)化為肌氨酸和尿素；肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下氧化為甘氨酸、甲醛和過(guò)氧化氫；最后通過(guò)一種無(wú)色染劑的過(guò)氧化物酶催化氧化作用產(chǎn)生一種有色物質(zhì)；測(cè)量?jī)蓚€(gè)時(shí)間點(diǎn)上所產(chǎn)生的反射強(qiáng)度的變化，該反射強(qiáng)度差值與標(biāo)本中的Crea濃度成正比。

目前，干化學(xué)和濕化學(xué)分析儀均已得到廣泛的應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)中VITROS 5600與DXC800的檢測(cè)結(jié)果具有可比性，但ALT、AST、LDH、Ca、Crea、TP臨床比對(duì)多個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平處的偏差不可接受。楊萍[14]報(bào)道，臨床應(yīng)用中可各自建立獨(dú)立的參考區(qū)間，不能以單一改變校正因數(shù)或系數(shù)來(lái)矯正干、濕化學(xué)的分析偏倚。因此，干化學(xué)分析儀在臨床應(yīng)用中，尤其對(duì)于預(yù)期偏差不能接受的檢測(cè)指標(biāo)，應(yīng)建立適合本實(shí)驗(yàn)室的參考區(qū)間。

[1]李鴻飛，邱廣斌．常用生化指標(biāo)干化學(xué)與濕化學(xué)檢測(cè)結(jié)果的比較分析[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(1)：109-111．

[2]梁瑞蓮，周遠(yuǎn)青，謝麗明，等．同室不同生化檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定結(jié)果的比對(duì)的比對(duì)和偏倚評(píng)估[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2009，6(14)：1159-1160．

[3]馮仁豐．互換性依然是問(wèn)題[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，28(12)：1063-1068．

[4]叢玉隆．臨床實(shí)驗(yàn)室管理[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2004：48-50．

[5]何謙，趙麗華，王香玲，等．不同檢測(cè)系統(tǒng)生化結(jié)果的可比性研究[J]．現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，22(6)：53-55．

[6]National Committee for Clinical Laboratory Standards．EP9-A2 Method comparison and bias estimation using patient samples [S]．Wayne,PA：NCCLS，2002．

[7]楊有業(yè)，張秀明．臨床檢驗(yàn)方法學(xué)評(píng)價(jià)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：118-136．

[8]黃維綱，賈汝靜，張健，等．醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域能力驗(yàn)證計(jì)劃的比較[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013，28(10)：937-943．

[9]袁平宗，湯雪彪，胡江紅，等．強(qiáng)生干化學(xué)350與日立7600-020檢測(cè)系統(tǒng)可比性分析[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(10)：1299-1301．

[10]Curc H，Rand RN．Early history of Eastman Kodak ektachem slides[J]．Clin Chem，1997，43(9)：1647-1652．

[11]劉豐偉，鄒國(guó)英，賀軍宇，等．強(qiáng)生VITROS 5600全自動(dòng)生化免疫分析儀生化檢測(cè)項(xiàng)目正確度評(píng)價(jià)[J]．中國(guó)醫(yī)療前沿，2012，7(18)：1-3．

[12]鐘金清，胡亞遠(yuǎn)．貝克曼庫(kù)爾特DxC800生化分析儀離子選擇電極國(guó)產(chǎn)試劑的應(yīng)用與評(píng)價(jià)[J]．實(shí)用醫(yī)技雜志，2010，17(10)：968-969．

[13]梁凌云，陳佳，周德鵬．不同檢測(cè)系統(tǒng)間肌酐,淀粉酶結(jié)果參考區(qū)間轉(zhuǎn)移的可行性研究[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35(2)：210-212．

[14]楊萍．干、濕化學(xué)法檢測(cè)部分生化項(xiàng)目結(jié)果比較[J]．蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，31(1)：83-84．

Comparability analysis between dry chemistry analyzer and wet chemistry analyzer

LIJin-mi,GONGChun-mei,HEXiu-ling,CHENKai-chun,WANGFeng△

(DepartmentofClinicalLaboratory,ResearchInstituteofFieldSurgery,DapingHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400042,China)

Objective To investigate the comparability of the results of 16 routine biochemical indexes detected by different biochemical analyzers.Methods With the Beckman DXC800 automatic biochemical analyzer as the reference system and the VITROS5600 automatic biochemical immune analyzer as the compared system according to the EP9-A2,guideline established by NCCLS.The 16 routine biochemical indexes were detected in serum of patients by the two instruments.The clinical acceptability of the VITROS5600 dry chemistry system was evaluated according to the judgment basis of 1/2 allowable error of the external quality assessment in CLIA′88 standard.Results The reference system and the compared system had better comparability.All tests showed good correlation between the two analytical systems.The biases of all tests were clinically acceptable,except for ALT,LDH,Crea,AST,Ca and TP.Conclusion The VITROS5600 dry chemical instrument could have good comparability with the Beckman DXC800 automatic biochemical analyzer.But the biases of ALT,AST,LDH,Ca and Crea and TP in the clinical comparison at multiple levels were not acceptable.It is necessary to establish the different reference ranges aiming at different methods.

dry chemistry； medical decision level； comparability

李金密，女，本科，主管技師，主要從事臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)與臨床研究?！?/p>

，Email：wangfnew@gmail.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.011

A

1672-9455(2015)05-0606-03

2014-11-10

2014-12-20)