丙型肝炎病原學(xué)不同檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用價(jià)值對(duì)比分析*

龍宏洋，葉玉芬，朱學(xué)強(qiáng)，王 涵

(廣東省珠海市香洲區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 519070)

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·論 著·

丙型肝炎病原學(xué)不同檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用價(jià)值對(duì)比分析*

龍宏洋，葉玉芬，朱學(xué)強(qiáng)，王 涵

(廣東省珠海市香洲區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 519070)

目的 探討抗體、抗原及核酸檢測(cè)在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 收集2012年1月到2013年12月珠海市香洲區(qū)人民醫(yī)院篩查抗-HCV抗體陽(yáng)性標(biāo)本48份。用3種抗體試劑、2種抗原試劑及HCV-RNA復(fù)核檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 復(fù)核陽(yáng)性麗珠37份，科華36份，新創(chuàng)36份，萊博21份，康潤(rùn)18份，HCV-RNA 28份。3種抗體試劑復(fù)核均陰性的10份標(biāo)本中檢出HCV-RNA陽(yáng)性1份，萊博抗原陽(yáng)性3份，康潤(rùn)抗原陽(yáng)性1份。3種抗體靈敏度均為96.4%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為72.9%～75.0%；2種抗原試劑靈敏度分別為40.0%和83.3%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值分別為57.0%和83.3%。結(jié)論 丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)具有較高的診斷靈敏度，但診斷特異性較低，對(duì)抗-HCV抗體陽(yáng)性標(biāo)本采用抗體加抗原模式進(jìn)行復(fù)核對(duì)丙型肝炎診斷具有重要的價(jià)值，對(duì)有疑問(wèn)的標(biāo)本再用HCV-RNA進(jìn)行確證，可預(yù)防誤診、漏診。

丙型肝炎病毒； 丙型肝炎病毒抗體； 丙型肝炎病毒抗原； 丙型肝炎病毒核酸

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的疾病，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球HCV感染者超過(guò)1.7億，每年全球新發(fā)感染者約350萬(wàn)人[1]。全國(guó)流行病學(xué)調(diào)查資料顯示，我國(guó)一般人群HCV抗體(抗-HCV)陽(yáng)性率約為3.2%，中國(guó)約有4 000萬(wàn)人感染HCV，約占全球總感染人數(shù)的1/4，居世界之首。在HCV感染者中，約80%的急性丙型肝炎患者無(wú)明顯癥狀，且在發(fā)病初期常被隱匿，這些感染者常發(fā)展成嚴(yán)重的肝硬化，甚至肝癌。此外，目前尚無(wú)HCV的預(yù)防疫苗，一旦感染HCV，僅有20%的患者能自發(fā)清除病毒，而潛伏的丙型肝炎患者不僅自身健康風(fēng)險(xiǎn)巨大，同時(shí)也是威脅社會(huì)公共衛(wèi)生的隱患?？刂艸CV傳播，需依賴(lài)實(shí)驗(yàn)室及時(shí)、準(zhǔn)確的診斷，并盡早地進(jìn)行有效的治療。目前臨床用于HCV的檢測(cè)方法主要有抗-HCV抗體檢測(cè)、HCV核心抗原檢測(cè)及核酸檢測(cè)。本研究通過(guò)采用不同的檢測(cè)方法對(duì)48份臨床抗-HCV抗體陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，探討不同病原學(xué)檢測(cè)方法在HCV感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集2012年1月至2013年12月本院手術(shù)前、輸血前患者、產(chǎn)檢孕婦和門(mén)診疑似HCV感染患者抗-HCV抗體篩查陽(yáng)性標(biāo)本48份。所有標(biāo)本用原批次抗體試劑雙孔復(fù)核陽(yáng)性，收集雙份血清，其中一份以專(zhuān)用管收集用于HCV-RNA檢測(cè)，另一份于-20 ℃保存用于抗-HCV抗體、HCV核心抗原檢測(cè)。

1.2 儀器與試劑 所用儀器有美國(guó)Bio-Tek公司生產(chǎn)的ELX-800酶標(biāo)儀、ELX-50洗板機(jī)，美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的7500熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)儀。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)試劑由湖南圣湘生物科技有限公司提供。常規(guī)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 抗-HCV抗體篩查試劑為珠海麗珠試劑股份有限公司生產(chǎn)的抗-HCV檢測(cè)試劑盒(簡(jiǎn)稱(chēng)麗珠)。復(fù)核抗-HCV抗體的試劑有3種：麗珠試劑(批號(hào)201310512)，上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)的抗-HCV抗體檢測(cè)試劑盒(簡(jiǎn)稱(chēng)科華，批號(hào)201308011)，英科新創(chuàng)(廈門(mén))科技有限公司生產(chǎn)的HCV-Ab檢測(cè)試劑盒(簡(jiǎn)稱(chēng)新創(chuàng)，批號(hào)2013085808)；檢測(cè)HCV核心抗原的試劑有2種：山東萊博生物科技有限公司生產(chǎn)的HCV核心抗原檢測(cè)試劑盒(簡(jiǎn)稱(chēng)萊博，批號(hào)201308003)，湖南康潤(rùn)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的HCV核心抗原檢測(cè)試劑盒(簡(jiǎn)稱(chēng)康潤(rùn)，批號(hào)20130902)。所有試劑均在有效期內(nèi)使用，儀器設(shè)備定期進(jìn)行維護(hù)、校準(zhǔn)。

1.3 檢測(cè)方法 3種抗-HCV抗體檢測(cè)方法均為間接ELISA，2種HCV核心抗原檢測(cè)方法均為雙抗體夾心法，由同一人在相同條件下嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，檢測(cè)HCV核心抗原、抗體。核酸檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)，由廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心有限公司完成，HCV-RNA水平小于500 拷貝為陰性，≥500 拷貝為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)與百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 48份抗-HCV抗體初篩陽(yáng)性標(biāo)本各種試劑復(fù)核結(jié)果 所有試劑復(fù)核結(jié)果與抗體初篩結(jié)果比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3種抗體檢測(cè)試劑的復(fù)核結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；2種抗原檢測(cè)試劑的復(fù)核結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；抗體檢測(cè)的陽(yáng)性率高于HCV-RNA，但只有麗珠試劑與HCV-RNA檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；抗原檢測(cè)的陽(yáng)性率低于HCV-RNA，但只有康潤(rùn)試劑與HCV-RNA檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 3種抗體試劑復(fù)核全部陰性的10份標(biāo)本抗原及HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果 10份抗體復(fù)核陰性的標(biāo)本檢出HCV-RNA陽(yáng)性1份，萊博抗原陽(yáng)性3份，康潤(rùn)抗原陽(yáng)性1份，比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表1 48份抗-HCV抗體陽(yáng)性標(biāo)本各種試劑復(fù)核結(jié)果[n(%)]

表2 3種抗體試劑復(fù)核全陰性標(biāo)本抗原及 HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果

2.3 抗體、抗原試劑檢測(cè)結(jié)果與HCV-RNA結(jié)果比較 3種抗體的診斷靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；而抗原試劑中，康潤(rùn)的靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均高于萊博，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?？贵w的診斷靈敏度及陰性預(yù)測(cè)值均高于抗原，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而康潤(rùn)抗原檢測(cè)的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值高于抗體，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 抗體、抗原試劑檢測(cè)結(jié)果與HCV-RNA結(jié)果的比較

3 討 論

丙型肝炎是我國(guó)常見(jiàn)的傳染病，由HCV感染引起，主要經(jīng)輸血傳播，對(duì)人類(lèi)健康危害極大。目前大部分醫(yī)院已經(jīng)開(kāi)展了HCV檢測(cè)項(xiàng)目，常規(guī)用于術(shù)前、輸血前及孕前產(chǎn)前檢查等?，F(xiàn)階段HCV的檢測(cè)方法主要有3種，即抗體、核酸及抗原檢測(cè)。抗-HCV抗體檢測(cè)是最早確立的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，被廣泛用于HCV感染的臨床診斷、健康人群體檢和血液篩查[2]。HCV核心抗原幾乎與HCV-RNA同時(shí)出現(xiàn)，是HCV感染的早期標(biāo)志，目前市售的HCV核心抗原檢測(cè)試劑盒多采用雙抗體夾心ELISA法來(lái)檢測(cè)血清總核心抗原或游離核心抗原。本研究結(jié)果顯示，48份抗體初篩陽(yáng)性標(biāo)本的抗體、抗原及HCV-RNA的復(fù)核結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且復(fù)核陽(yáng)性率由大到小依次為抗體、HCV-RNA、核心抗原，與龍潤(rùn)?quán)l(xiāng)等[3]研究結(jié)果相似。分析原因可能有：(1)抗-HCV抗體篩查存在較大的假陽(yáng)性率，美國(guó)疾病預(yù)防控制中心(CDC)研究報(bào)道，在抗-HCV抗體陽(yáng)性率小于10%的人群中，假陽(yáng)性率平均為35%[4]。值得注意的是有5份標(biāo)本3種抗體試劑檢測(cè)均為強(qiáng)陽(yáng)性[樣本吸光度(OD)值/臨界值比值(S/CO值)大于9]而HCV-RNA復(fù)核為陰性，可能與抗體試劑盒的假陽(yáng)性有關(guān)。(2)核心抗原因其水平較低，對(duì)檢測(cè)試劑和檢測(cè)人員的要求高，或由于標(biāo)本中的抗-HCV抗體與用于核心抗原檢測(cè)的單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原而造成假陰性[5]。

本研究所選48份標(biāo)本均為抗-HCV抗體陽(yáng)性標(biāo)本，理論上用抗體試劑復(fù)查時(shí)應(yīng)顯示全陽(yáng)性，但仍有10份(22.9%)標(biāo)本3種抗體試劑檢測(cè)全陰性。這與王迅等[6]研究結(jié)果相似，45.53%的標(biāo)本抗體復(fù)核陰性。與文獻(xiàn)[6]自動(dòng)化初篩大量標(biāo)本不同，本研究初篩與復(fù)核都為小批量、手工操作，由于初篩與復(fù)核有1種相同試劑，排除該因素，10份標(biāo)本的初篩S/CO都小于3.8。作者認(rèn)為可能是抗-HCV抗體降解所致，降解的發(fā)生可能與標(biāo)本保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、保存溫度過(guò)高及反復(fù)凍融有關(guān)，也可能與手工操作存在的差異有關(guān)。在該10份抗-HCV抗體復(fù)核陰性標(biāo)本中有1份標(biāo)本的2種抗原試劑復(fù)核陽(yáng)性，HCV-RNA復(fù)核陽(yáng)性，結(jié)合該患者臨床出現(xiàn)黃疸、肝功能異常等癥狀，判斷此患者處于感染早期，抗體效價(jià)較低，單純用抗體試劑復(fù)核則有漏檢的可能。本研究還發(fā)現(xiàn)，假定HCV-RNA檢測(cè)為真陽(yáng)性，3種抗體的靈敏度都為96.4%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為72.9%～75.0%，三者的靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?？乖瓩z測(cè)中，康潤(rùn)的靈敏度、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均優(yōu)于萊博(P<0.05)。此外，抗體的診斷靈敏度及陰性預(yù)測(cè)值均高于抗原(P<0.05)，而抗原檢測(cè)的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值高于抗體(P<0.05)。然而，張健等[7]研究表明抗體與抗原試劑的檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯差異。

近年來(lái)關(guān)于丙型肝炎抗體檢測(cè)試劑的研究較多。因檢測(cè)抗-HCV抗體試劑盒的各生產(chǎn)廠家使用的HCV基因重組抗原種類(lèi)、抗原區(qū)段及各區(qū)段的比例不同，所以不同廠家的試劑的靈敏度和特異性存在一定的差異，抗-HCV抗體的檢測(cè)結(jié)果不盡相同[8-9]。本研究顯示，3種抗體試劑的陽(yáng)性檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；但假陽(yáng)性率高達(dá)32.1%(9/28)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值低；同時(shí)漏檢了1份陽(yáng)性標(biāo)本，假陰性率為3.6%(1/28)。2種抗原檢測(cè)試劑檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但靈敏度、特異性等比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義，說(shuō)明抗原試劑的質(zhì)量在各廠家之間也存在差異。由此可見(jiàn)，僅用一種試劑判斷HCV感染需謹(jǐn)慎，HCV篩查陽(yáng)性標(biāo)本同樣需要進(jìn)行確證。HCV的確證試驗(yàn)一般有重組免疫印跡試驗(yàn)(RIBA)和HCV-RNA檢測(cè)。RIBA是具有高特異性的抗-HCV抗體的確證試驗(yàn)，但因試劑價(jià)格昂貴其在實(shí)際檢測(cè)中的應(yīng)用受到了限制。而HCV-RNA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜，容易交叉污染形成假陽(yáng)性，且儀器、試劑同樣昂貴，仍然難以在基層實(shí)驗(yàn)室推廣。我國(guó)CDC在HCV臨床診斷的相關(guān)規(guī)范中要求抗-HCV抗體陽(yáng)性的標(biāo)本需要采用原有試劑雙孔或原有試劑加另一種不同實(shí)驗(yàn)原理或廠家的試劑進(jìn)行復(fù)核試驗(yàn)。國(guó)內(nèi)已有研究對(duì)各種不同復(fù)核模式進(jìn)行了探討[10-11]。

綜上所述，采用抗體雙孔或抗體加抗體的復(fù)核模式容易造成誤診或漏診。而抗原試劑有較高的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，采用抗體加抗原的復(fù)核模式，對(duì)HCV的診斷具有重要的價(jià)值。對(duì)有疑問(wèn)的標(biāo)本再用HCV-RNA或RIBA進(jìn)行確證，可預(yù)防誤診及漏診。

[1]Lauer GM，Walker BD．HePatitis C virus infection[J]．N Engl J Med，2001，345(1)：41-52．

[2]張瑞，李金明．丙型肝炎病毒感染臨床檢測(cè)程序的建立及結(jié)果報(bào)告與解釋[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，33(10)：990-992．

[3]龍潤(rùn)?quán)l(xiāng)，楊蓉，白慧珠，等．HCV抗體陽(yáng)性樣品核酸及核心抗原檢測(cè)分析[J]．醫(yī)學(xué)研究雜志，2010，39(12)：41-43．

[4]Alter MJ,Kuhnert WL,Finelli L,et al.Guidelines for laboratory testing and result reporting of antibody to hepatitis C virus.Centers for Disease Control and Prevention[J]．MMWR Recomm Rep，2003，52(RR-3)：1-13．

[5]譚曉霞，紀(jì)勇平，駱昊翠．丙型肝炎病毒核心抗原檢測(cè)的臨床應(yīng)用價(jià)值[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，25(2)：134-136．

[6]王迅，劉宇寧，賈堯，等．丙型肝炎病毒抗體篩查陽(yáng)性結(jié)果確證方案的探討[J]．中國(guó)輸血雜志，2008，21(4)：255-258．

[7]張健，劉宜仲，楊珊，等．HCV核心抗原檢測(cè)在血液篩查中的初步研究[J]．現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，27(2)：110-111．

[8]孟慶玲，魯健，邱豐，等．丙型肝炎IgG抗體ELISA診斷試劑比對(duì)分析[J]．中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2013，27(3)：221-223．

[9]傅立強(qiáng)，桑列勇，蔣國(guó)瑾．ELISA試劑檢測(cè)抗HCV反應(yīng)性結(jié)果分析[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012，27(7)：588-591．

[10]鮮玉萍，楊紅英．丙型肝炎核心抗原檢測(cè)的臨床意義[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9(18)：2320-2321．

[11]金一鳴，方志紅，曹誼．血液篩查中丙型肝炎病毒檢測(cè)方法的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(5)：552-553．

Comparative analysis on clinical application values of different methods for detecting hepatitis C pathogens*

LONGHong-xiang,YEYu-fen,ZHUXue-qiang,WANGHan

(DepartmentofClinicalLaboratory,XiangzhouDistrictPeople′sHospital,Zhuhai,Guangdong519070,China)

Objective To investigate the application value of antibody,antigen and nucleic acid detections in the diagnosis of hepatitis C.Methods 48 anti-HCV positive specimens in our hospital from Jan. 2012 to Dec. 2013 were collected.The detection results were re-detected by HCV-RNA,3 kinds of antibody reagent and 2 kinds of antigen reagent.Results The positive result of re-detection was in 37 specimens by Lizhu,in 36 specimens by Kehua,in 36 specimens by Xinchuang,in 21 specimens by Laibo,in 18 specimens by Kangrun,in 28 specimens of HCV-RNA.Among 10 specimens of negative result re-detected by 3 kinds of antibody reagent,1 specimen of HCV-RNA positive,3 specimens of Laibo antigen positive and 1 specimen of Kangrun positive were detected out.The sensitivities of 3 kinds of antibody all were 96.4%,the positive predictive value was 72.9%-75.0%;the sensitivity of 2 kinds of antigen reagent was 40.0% and 83.3% respectively,and the positive predictive value was 57.0% and 83.3% respectively.Conclusion The HCV antibody detection could have the higher diagnostic sensitivity,but its specificity may be lower.Re-detecting the anti-HCV positive samples by using antibody plus antigen model could be of great value to the diagnosis of hepatitis C.Using HCV-RNA for confirming the questionable specimens could be prevent misdiagnosis and missed diagnosis.

hepatitis C virus; hepatitis C virus antibody； hepatitis C virus antigen； hepatitis C virus antigen RNA

廣東省珠海市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012D0401990008)。

龍宏洋，男，本科，主管檢驗(yàn)師，主要從事臨床檢驗(yàn)方面研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.008

A

1672-9455(2015)05-0597-03

2014-11-10

2014-12-28)