IL-6、IL-8、CD64和CD11b檢測對新生兒感染性疾病的診斷價值*

鄭 婧，李 莉，藺麗慧

(上海市第一人民醫(yī)院檢驗科 200080)

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·論 著·

IL-6、IL-8、CD64和CD11b檢測對新生兒感染性疾病的診斷價值*

鄭 婧，李 莉，藺麗慧△

(上海市第一人民醫(yī)院檢驗科 200080)

目的 探討白細(xì)胞介素-6(IL-6)、IL-8、CD64和CD11b在新生兒感染性疾病早期診斷中的價值。方法 選取2013年3月至2014年3月上海市第一人民醫(yī)院兒科和產(chǎn)科收治的新生兒，分為感染組(50例)、非感染對照組(30例)、健康對照組(50例)；采用定量夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定血清IL-6和IL-8水平，采用全血三色熒光標(biāo)記法流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中性粒細(xì)胞表面CD64和CD11b分子表達(dá)水平，比較分析3組新生兒的IL-6、IL-8、CD64和CD11b水平及陽性率。結(jié)果 對于血清IL-6、IL-8兩項檢測指標(biāo)，感染組分別為(187.3±25.1)ng/L、(1.05±0.32)pg/mL，非感染對照組分別為(60.9±5.2)ng/L、(0.35±0.12)pg/mL，健康對照組分別為(53.2±9.3)ng/L、(0.30±0.05)pg/mL；感染組分別高于非感染對照組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。并且感染組中性粒細(xì)胞表面CD64、CD11b分子表達(dá)水平分別高于非感染對照組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 臨床檢測新生兒血清IL-6、IL-8水平及外周血中性粒細(xì)胞表面CD64和CD11b分子的表達(dá)水平，可更加及時、準(zhǔn)確、靈敏地診斷新生兒早期感染性疾病。

白細(xì)胞介素-6； 白細(xì)胞介素-8； CD64； CD11b； 新生兒感染

新生兒由于免疫力低，易發(fā)生感染性疾病，其病死率高，是圍生期及新生兒期嬰兒死亡的重要原因之一[1]。但通常情況下患兒感染后不表現(xiàn)出明顯、典型的臨床癥狀，再加上缺乏特異有效的檢測手段，嚴(yán)重制約了新生兒感染的臨床診療工作[2]。已有大量研究報道，白細(xì)胞介素-6(IL-6)、IL-8、外周血中性粒細(xì)胞表面CD64和CD11b分子可作為新生兒早期感染的診斷指標(biāo)[3]。因此本研究對2013年3月至2014年3月本院兒科和產(chǎn)科收治的新生兒血清IL-6、IL-8水平和外周全血中性粒細(xì)胞表面CD64和CD11b分子表達(dá)水平進(jìn)行檢測，探討其在新生兒感染性疾病早期診斷中的價值。現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年3月至2014年3月在本院新生兒疾病病房住院、發(fā)病3 d以內(nèi)的患兒50例納入感染組。所有患兒均經(jīng)血培養(yǎng)、血常規(guī)、膿性分泌物培養(yǎng)、X線片確診為感染性疾病，其中肺炎25例(包括細(xì)菌性感染15例，非細(xì)菌感染10例)，腸道感染11例(均為病毒感染)，細(xì)菌性敗血癥5例，臍炎4例(均為細(xì)菌感染)，膿皰疹3例(均為病毒感染)，細(xì)菌性腦膜炎2例。選取同期住院的非感染性疾病患兒30例納入非感染對照組，其中新生兒高膽紅素血癥9例，顱內(nèi)出血3例，新生兒缺血缺氧性腦病14例，新生兒出血癥2例，咽下綜合征2例。選取同期在本院產(chǎn)科出生、經(jīng)體檢完全健康的新生兒50例納入健康對照組。3組患兒的性別、出生胎齡和出生體質(zhì)量等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 感染組于住院后、使用抗菌藥物治療前，非感染對照組和健康對照組于出生后1周內(nèi)，采用真空采血管抽取靜脈血3 mL，一半血液分離血清后于-20 ℃保存，用于檢測IL-6和IL-8；另一半血液置于含肝素(25 U/mL)的聚苯乙烯試管中混勻抗凝，4 ℃暫存，留待檢測中性粒細(xì)胞表面CD64和CD11b分子。

1.2.2 檢測方法 采用定量夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定IL-6、IL-8水平，試劑盒購自美國Bioscience公司。健康人血清IL-6水平為30～70 ng/L，大于70 ng/L視為陽性；參考文獻(xiàn)[4]，IL-8水平大于或等于0.65 pg/mL視為陽性。采用三色熒光標(biāo)記法流式細(xì)胞術(shù)檢測中性粒細(xì)胞表面CD64和CD11b分子。異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的CD64抗體(CD64-FITC)、藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的CD11b抗體(CD11b-PE)、多甲藻(黃)素葉綠素蛋白標(biāo)記的CD45抗體(CD45-PerCP)和其他必需試劑均購自美國BD公司；FACS Calibur流式細(xì)胞儀購自美國BD公司。上機(jī)檢測采用同一電壓，用BD CellQuest軟件分析標(biāo)本資料。每個標(biāo)本計數(shù)10 000個細(xì)胞，以CD45-PerCP標(biāo)記，選定中性粒細(xì)胞群，分析CD64和CD11b的平均熒光強(qiáng)度(MFI)。

2 結(jié) 果

2.1 各組血清IL-6水平和陽性率比較 感染組血清IL-6水平分別高于非感染對照組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t分別為13.25、12.68，P<0.01)；且感染組IL-6陽性率分別高于非感染對照組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2分別為6.93、7.18，P<0.01)。見表1。

表1 各組血清IL-6水平和陽性率比較

2.2 各組血清IL-8水平和陽性率比較 感染組血清IL-8水平分別高于非感染對照組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t分別為4.16、4.02，P<0.05)；且感染組IL-8陽性率分別高于非感染對照組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2分別為7.24、7.35，P<0.01)。見表2。

表2 各組血清IL-8水平和陽性率比較

2.3 各組中性粒細(xì)胞表面CD64分子表達(dá)水平比較 感染組中性粒細(xì)胞CD64 MFI值分別高于非感染對照組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t分別為3.52、3.17，P<0.05)；非感染對照組與健康對照組CD64 MFI值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.39，P>0.05)。見表3。

表3 各組中性粒細(xì)胞表面CD64分子表達(dá)水平比較

2.4 各組中性粒細(xì)胞表面CD11b分子表達(dá)水平比較 感染組中性粒細(xì)胞CD11b MFI值分別高于非感染對照組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t分別為3.48、3.32，P<0.05)；非感染對照組與健康對照組CD11b MFI值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.41，P>0.05)。見表4。

表4 各組中性粒細(xì)胞表面CD11b分子表達(dá)水平比較

3 討 論

IL-6、IL-8及中性粒細(xì)胞表面CD64、CD11b分子都是臨床上可用于診斷新生兒感染性疾病的指標(biāo)。本研究在本院產(chǎn)科和兒科選取了感染、非感染及健康3組研究對象，檢測各組的4項指標(biāo)并對比分析。研究結(jié)果顯示，與非感染對照組與健康對照組比較，感染組患兒血清IL-6、IL-8及中性粒細(xì)胞表面CD64和CD11b分子表達(dá)水平均明顯升高，比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而非感染對照組與健康對照組4項檢測指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。說明在感染早期，血清IL-6、IL-8及中性粒細(xì)胞表面CD64、CD11b都十分敏感，可通過檢測四者的水平診斷新生兒感染性疾病。并且，本研究設(shè)置2個對照組，可同時表明患兒在非感染情況下，血清IL-6、IL-8水平和中性粒細(xì)胞表面CD64、CD11b分子表達(dá)水平與健康時比較無明顯變化，據(jù)此可以排除非感染性疾病對診斷結(jié)果的影響。

IL-6是一種介導(dǎo)天然免疫的細(xì)胞因子，是機(jī)體受炎癥刺激后由T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞等分泌的多功能糖蛋白[5]。它們與各自的特異性受體結(jié)合后，既可在局部發(fā)揮效應(yīng)，也可以在全身發(fā)揮作用。IL-6在機(jī)體發(fā)生防御、急性期反應(yīng)、免疫反應(yīng)和造血反應(yīng)等活動時具有十分重要的作用，它能誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生急性期蛋白，如C反應(yīng)蛋白(CRP)，在感染性疾病中它比CRP更早地出現(xiàn)在血液循環(huán)中[6]。大量研究表明，血清IL-6水平的變化可以非常靈敏地反映革蘭陰性菌或革蘭陽性菌引起的新生兒膿毒癥的情況[7]。絕大部分的健康新生兒血液IL-6水平極低，一旦發(fā)生細(xì)菌感染，細(xì)菌脂多糖和感染產(chǎn)生的中介物質(zhì)強(qiáng)烈刺激機(jī)體的單核巨噬系統(tǒng)和多種免疫細(xì)胞，使之產(chǎn)生IL-6，導(dǎo)致血液中的IL-6水平快速地升高[8]。IL-6不僅是機(jī)體早期對炎性反應(yīng)的主要介質(zhì)，在機(jī)體發(fā)生重癥感染時其在血清中的水平升高十分明顯，因此根據(jù)IL-6水平可以推斷患者的感染嚴(yán)重程度。馮小三等[9]研究表明，敗血癥患兒和一般感染患兒的血清IL-6水平明顯升高，與各自的恢復(fù)期相比差異明顯；并且敗血癥患兒的血清IL-6水平明顯高于一般感染患兒。因此，新生兒血清高水平IL-6不僅可作為診斷新生兒感染性疾病的靈敏指標(biāo)，還可以幫助判斷治療效果。本研究顯示，通過IL-6診斷新生兒感染的敏感度為82.0%，特異度為75.0%，說明IL-6的誤診率較低，但是漏診率較高。

IL-8為細(xì)胞趨化因子家庭成員之一，其主要功能是趨化中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞向炎癥部位聚集[10]。在正常情況下，IL-8水平很低，但當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎性病變時，會刺激單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞大量分泌IL-8[11]。本研究中，感染組患兒血清IL-8水平明顯高于非感染對照組和健康對照組。IL-8在感染早期即參與炎性反應(yīng)，本研究顯示通過IL-8診斷新生兒感染的敏感度為68.0%，特異度達(dá)91.2%，說明誤診率較低，但漏診率較高。本研究中感染組患兒經(jīng)治療病情好轉(zhuǎn)的同時，IL-6及IL-8水平隨之下降，接近健康對照組水平(數(shù)據(jù)未顯示)。表明新生兒感染時IL-6、IL-8不但參與炎性病變過程，而且其水平高低在一定程度上可反映疾病的嚴(yán)重程度。因此，聯(lián)合檢測IL-6、IL-8對早期診斷新生兒感染，及時觀察抗菌藥物的應(yīng)用效果，以及指導(dǎo)抗菌藥物的合理應(yīng)用具有重要價值。

研究顯示，通過IL-6和IL-8診斷新生兒感染性疾病都有一定程度的漏診率，為了避免漏診情況的出現(xiàn)，CD64和CD11b的檢測很有必要。近年來，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測外周血中性粒細(xì)胞表面CD64、CD11b分子的表達(dá)，在診斷新生兒感染性疾病中的作用愈加引人注目[12]。CD64是IgG的Fc段Ⅰ型受體(FcγRⅠ)，屬免疫球蛋白超家族成員。正常情況下，只有很少一部分中性粒細(xì)胞表達(dá)CD64，當(dāng)受到細(xì)菌細(xì)胞壁脂多糖和粒細(xì)胞集落刺激因子等刺激時，數(shù)小時內(nèi)可使中性粒細(xì)胞表面大量表達(dá)CD64[13]。CD11b是中性粒細(xì)胞表面含量最多的β整合素黏附分子，正常情況下表達(dá)量很低，但當(dāng)接觸到細(xì)菌或其產(chǎn)物后，其在中性粒細(xì)胞表面的表達(dá)水平便可迅速地增加，因此CD11b被看作細(xì)菌感染的早期預(yù)警指標(biāo)之一[14]。本研究通過流式細(xì)胞儀測定3組新生兒外周血中性粒細(xì)胞表面CD64、CD11b分子的表達(dá)情況，結(jié)果顯示感染組患兒兩項指標(biāo)的表達(dá)水平均高于非感染對照組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而非感染對照組與健康對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示中性粒細(xì)胞表面CD64、CD11b可作為診斷早期新生兒感染性疾病的重要指標(biāo)。由于IL-6、IL-8具有較高的漏診率，作者認(rèn)為在檢測血清IL-6、IL-8的基礎(chǔ)上，再檢測中性粒細(xì)胞表面CD64、CD11b的表達(dá)水平，能有效地避免漏診。本研究沒有計算CD64、CD11b的臨床診斷臨界值，主要是考慮到因計量單位、熒光抗體種類、流式細(xì)胞儀型號和生產(chǎn)廠家不同，各實驗室報道的臨床診斷臨界值往往沒有可比性。此外，本研究的樣本量較小也無法給臨床診斷提供較為明確的參考。因此，將在后續(xù)的研究中收集足夠的樣本量，計算出明確的診斷臨界值。

綜上所述，血清IL-6、IL-8，以及中性粒細(xì)胞表面CD64和CD11b對新生兒早期感染性疾病的診斷有重要意義。綜合分析這4項檢測指標(biāo)可以提高檢出率、降低誤診率，縮短確診時間，幫助醫(yī)生盡早對患兒進(jìn)行有效、合理的治療，為取得良好的預(yù)后奠定基礎(chǔ)。

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Diagnostic value of IL-6,IL-8,CD64 and CD11b detection in neonatal infectious diseases*

ZHENGJing，LILi，LINLi-hui△

(DepartmentofClinicalLaboratory,ShanghaiMunicipalFirstPeople′sHospital,Shanghai200080,China)

Objective To explore the value of the interleukin-6(IL-6),IL-8,CD64 and CD11b detection in early diagnosis of neonatal infection.Methods The neonates in the pediatric and obstetric departments of our hospital from Mar.2013 to Mar.2014 were selected and divided into the infection group (n=50),non-infection control group (n=30) and healthy control group (n=50).The IL-6 and IL-8 levels were detected by the enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA),the expression of peripheral blood neutrophil CD64 and CD11b was detected by the whole blood cytometry trichromatic fluorescent marker method.The levels and positive rate of IL-6,IL-8,CD64 and CD11b were compared among the three groups.Results The serum levels of IL-6 and IL-8 were (187.3±25.1)ng/L and (1.05±0.32)pg/mL in the infection group,(60.9±5.2) ng/L and (0.35±0.12)pg/mL in the non-infected control group and (53.2±9.3)ng/L and (0.30±0.05)pg/mL in the healthy control group,the infection group was higher than the non-infection group and the control group respectively,the differences were statistically significant(P<0.05).The expression levels of peripheral blood neutrophil CD64 and CD11b in the infection group were higher than those in the non-infected group and the healthy control group with statistically significant differences(P<0.05).Conclusion Determining the serum IL-6,IL-8 levels and the expression levels of peripheral blood neutrophil CD64 and CD11b in neonates might diagnose the early infectious disease more timely,accurately and sensitively.

interleukin-6； interleukin-8； CD64； CD11b； neonatal infection

上海市衛(wèi)生局項目(20124184)。

鄭婧，女，本科，檢驗技師，主要從事急診化驗研究。△

，E-mail：56682144@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.006

A

1672-9455(2015)05-0591-03

2014-10-15

2014-12-20)