胃癌患者外周血Th17細(xì)胞相關(guān)因子檢測及其臨床意義*

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(1.重慶市沙坪壩區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科 400030；2.重慶市腫瘤醫(yī)院 400030)

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·臨床探討·

胃癌患者外周血Th17細(xì)胞相關(guān)因子檢測及其臨床意義*

張?zhí)煊?，王紅羚2

(1.重慶市沙坪壩區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科 400030；2.重慶市腫瘤醫(yī)院 400030)

目的 探討胃癌患者外周血Th17細(xì)胞相關(guān)因子的臨床價(jià)值。方法 收集該院2012年6月至2013年6月間30例胃癌患者的外周血，同時(shí)檢測30例健康者外周血作為健康對照者，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血漿Th17細(xì)胞相關(guān)因子白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6 (IL-6)、白細(xì)胞介素-23 (IL-23)、白細(xì)胞介素-17 (IL-17)水平。結(jié)果 胃癌患者IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17水平均顯著高于健康對照者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；且晚期胃癌患者IL-6、IL-23、IL-17水平顯著高于早期胃癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 Th17細(xì)胞相關(guān)因子與胃癌密切相關(guān)，檢測其水平有助于疾病的判斷。

胃癌； Th17細(xì)胞相關(guān)因子； 進(jìn)展

CD4+T細(xì)胞即輔助性T細(xì)胞(Th)，其在機(jī)體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答和免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用。根據(jù)細(xì)胞因子表達(dá)譜和轉(zhuǎn)錄調(diào)控子的不同，Th 細(xì)胞可分為Th1、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞[1]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是免疫抑制性細(xì)胞，在多個(gè)腫瘤(如結(jié)直腸癌、肝癌和胃癌等患者)的外周血中顯著增加并抑制效應(yīng)性T細(xì)胞功能，進(jìn)而介導(dǎo)腫瘤的免疫逃逸[2]。Th17細(xì)胞是新近發(fā)現(xiàn)的、以分泌白細(xì)胞介素-17(IL-17)為主要特征的輔助性T細(xì)胞，在細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-23(IL-23)的共同作用下，初始CD4+T細(xì)胞可特異性地上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子STAT3和RORγt表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的分化成熟[3]。早期研究顯示Th17細(xì)胞可防御胞外菌感染、促進(jìn)自身免疫性疾病的發(fā)展并介導(dǎo)免疫移植排斥反應(yīng)[4]。后期研究發(fā)現(xiàn)，Th17細(xì)胞與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及患者的預(yù)后密切相關(guān)[5]。胃癌患者的Th17細(xì)胞不僅在外周血中的比例顯著高于健康者，還與胃癌患者生存時(shí)間呈顯著負(fù)相關(guān)，提示Th17細(xì)胞可評價(jià)胃癌患者的預(yù)后[6]。為了進(jìn)一步明確Th17細(xì)胞效應(yīng)分子及其分化調(diào)控相關(guān)因子在胃癌外周血的變化情況，現(xiàn)收集胃癌患者外周血，檢測其Th17細(xì)胞相關(guān)因子的水平，同時(shí)評價(jià)該類因子與不同分期胃癌患者的相關(guān)性，為研究胃癌免疫治療提供臨床指導(dǎo)。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集重慶市腫瘤醫(yī)院2012年6月至2013年6月進(jìn)行胃癌切除手術(shù)的30例患者外周血(患者組)，其中男14例，女16例，年齡34～65歲?；颊吲R床分期根據(jù)最新國際TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ期患者6例，Ⅱ期患者8例，Ⅲ期患者11例，Ⅳ期患者5例。同時(shí)收集重慶市腫瘤醫(yī)院30例體檢健康者的外周血作為健康對照者(健康對照組)，其中男15例，女15例，年齡25～72歲。

1.2 方法 采集患者組術(shù)前和健康對照組當(dāng)日外周血2 mL，置于肝素抗凝管，常規(guī)離心，收集上層血漿，所有研究對象的外周血均一次性獲取，-80 ℃保存，備檢。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-23、IL-17水平檢測。ELISA 試劑盒購于北京嘉美諾斯生物科技有限公司，專人檢測，酶標(biāo)儀應(yīng)用瑞士TECAN ferrdom Evolyzer 全自動酶免工作站。

2 結(jié) 果

2.1 2組研究對象Th17細(xì)胞相關(guān)因子的檢測結(jié)果比較 患者組IL-17水平(86.4±14.5 pg/mL)顯著高于健康對照組(32.3±8.6 pg/mL)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；同時(shí)檢測Th17細(xì)胞分化相關(guān)細(xì)胞因子水平結(jié)果顯示，患者組IL-1β(66.8±6.2 pg/mL)、IL-6(189.7±19.4 pg/mL)、IL-23(234.6±18.8 pg/mL)均顯著高于健康對照組(31.5±6.7、42.5±11.6、90.8±8.5 pg/mL)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖1。

2.2 患者組不同分期胃癌患者外周血Th17細(xì)胞相關(guān)因子水平的檢測結(jié)果比較 根據(jù)國際最新腫瘤TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，將患者組分為早期(Ⅰ+Ⅱ期)和晚期(Ⅲ+Ⅳ期)2組。晚期胃癌患者IL-6、IL-23、IL-17水平(分別為254.9±16.4、287.3±14.2、106.4±9.9 pg/mL)均顯著高于早期患者(分別為135.3±18.2、176.2±10.4、59.3±7.5 pg/mL)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。雖然早、晚期患者IL-1β水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但與早期比較(56.7±5.6 pg/mL)，晚期患者(78.8±6.4 pg/mL)呈增加趨勢。見圖2。

圖1 2組研究對象外周血IL-17、IL-1β、IL-6、IL-23水平結(jié)果圖

3 討 論

腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中，機(jī)體會產(chǎn)生一系列復(fù)雜的抗腫瘤免疫應(yīng)答，以抵抗腫瘤生長，但腫瘤的不斷進(jìn)展則表明效應(yīng)性T細(xì)胞并不能有效清除腫瘤細(xì)胞；不僅如此，腫瘤微環(huán)境可誘導(dǎo)T細(xì)胞轉(zhuǎn)變成具有促腫瘤活性的免疫抑制性T細(xì)胞，進(jìn)一步導(dǎo)致腫瘤的惡性進(jìn)程。有研究報(bào)道，腫瘤來源的轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)可通過誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞而產(chǎn)生抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的免疫應(yīng)答，經(jīng)腫瘤活化的單核細(xì)胞則通過分泌細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-23從而誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化導(dǎo)致腫瘤新生血管的形成[7]。

目前，關(guān)于胃癌與Th17細(xì)胞的研究多集中在Th17細(xì)胞水平改變及其與臨床的關(guān)系。胃癌患者外周血和腫瘤組織中均能檢測到Th17細(xì)胞水平的顯著增加，且晚期胃癌患者Th17水平顯著高于早期胃癌患者；同時(shí)，高水平Th17細(xì)胞的胃癌患者生存時(shí)間要小于低水平Th17細(xì)胞的胃癌患者[6]。此外，免疫組織化學(xué)染色檢測提示腫瘤IL-17的表達(dá)可獨(dú)立預(yù)測胃癌患者的總體生存率，表明Th17細(xì)胞及其效應(yīng)分子IL-17在胃癌中發(fā)揮免疫抑制作用[8]。

本研究結(jié)果顯示，Th17細(xì)胞來源的效應(yīng)分子IL-17除了在腫瘤組織中表達(dá)增加，其在胃癌患者外周血中的水平也顯著增加，同時(shí)經(jīng)臨床分析統(tǒng)計(jì)表明，晚期胃癌患者外周血IL-17的水平顯著高于早期胃癌患者，進(jìn)一步證實(shí)Th17細(xì)胞及其效應(yīng)分子IL-17在胃癌中的作用。IL-1β、IL-6、IL-23是協(xié)同誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化成熟的細(xì)胞因子，本組檢測胃癌患者外周血中這3個(gè)細(xì)胞因子的水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與健康對照組比較，IL-1β、IL-6、IL-23在患者組外周血中顯著增加，且晚期胃癌患者外周血IL-6和IL-23水平明顯高于早期胃癌患者，提示其不僅能誘導(dǎo)Th17細(xì)胞產(chǎn)生，而且可能與Th17細(xì)胞效應(yīng)分子IL-17共同介導(dǎo)胃癌進(jìn)展。然而，IL-17促進(jìn)胃癌發(fā)生、發(fā)展的具體機(jī)制仍不明確。盡管有關(guān)研究報(bào)道IL-17經(jīng)其受體促進(jìn)胃癌細(xì)胞系的增殖和損傷修復(fù)，但是腫瘤微環(huán)境由多種不同類型細(xì)胞參與、組成，且單核-巨噬細(xì)胞也高表達(dá)IL-17受體[9-10]。IL-17是否通過巨噬細(xì)胞抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答仍不清楚。

綜上所述，Th17細(xì)胞相關(guān)因子在胃癌患者外周血中發(fā)生顯著變化并與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)，進(jìn)一步明確胃癌Th17細(xì)胞促腫瘤調(diào)控機(jī)制，將為其臨床免疫治療提供新的實(shí)驗(yàn)室證據(jù)。

[1]Zhou L,Chong MM,Littman DR.Plasticity of CD4+T cell lineage differentiation[J].Immunity,2009,30(5):646-655.

[2]Zou W.Regulatory T cells,tumour immunity and immunotherapy[J].Nat Rev Immunol,2006,6(4):295-307.

[3]McGeachy MJ,Cua DJ.Th17 cell differentiation:the long and winding road[J].Immunity,2008,28(4):445-453.

[4]莊園,鄒全明.Th17:新興的輔助T細(xì)胞[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2008,24(9):935-937.

[5]Zou W,Restifo NP.T(H)17 cells in tumour immunity and immunotherapy[J].Nat Rev Immunol,2010,10(4):248-256.

[6]Liu T,Peng L,Yu P,et al.Increased circulating Th22 and Th17 cells are associated with tumor progression and patient survival in human gastric cancer[J].J Clin Immunol,2012,32(6):1332-1339.

[7]Kuang DM,Peng C,Zhao Q,et al.Activated monocytes in peritumoral stroma of hepatocellular carcinoma promote expansion of memory T helper 17 cells[J].Hepatology,2010,51(1):154-164.

[8]Chen JG,Xia JC,Liang XT,et al.Intratumoral expression of IL-17 and its prognostic role in gastric adenocarcinoma patients[J].Int J Biol Sci,2011,7(1):53-60.

[9]Wu X,Zeng Z,Xu L,et al.Increased expression of IL-17A in human gastric cancer and its potential roles in gastric carcinogenesis[J].Tumour Biol,2014,35(6):5347-5356.

[10]Zhang JY,Zhang Z,Lin F,et al.Interleukin-17-producing CD4(+) T cells increase with severity of liver damage in patients with chronic hepatitis B[J].Hepatology,2010,51(1):81-91.

2012年重慶市科委一般課題資助項(xiàng)目(cstc2012jja10046)。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.17.058

A

1672-9455(2015)17-2626-03

2015-06-15

2015-06-20)