莆田黑鴨不同組織黑色素含量的測(cè)定研究

辛清武 黃勤樓 李 麗 朱志明 繆中緯 鄭嫩珠 張丹青

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,福建福州 350013）

莆田黑鴨不同組織黑色素含量的測(cè)定研究

辛清武 黃勤樓 李 麗 朱志明 繆中緯 鄭嫩珠*張丹青

（福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,福建福州 350013）

本研究選用莆田黑鴨為研究對(duì)象，采用分光光度計(jì)法提取莆田黑鴨不同組織的黑色素，明確莆田黑鴨各組織的黑色素含量。結(jié)果表明：（1）莆田黑鴨（♂、♀）肺臟的黑色素含量最高，分別為0.0832、0.0859，均極顯著（P＜0.01）高于其他各組織。（2）莆田黑鴨（♂）胸肌的黑色素含量最低為0.0308，略低于睪丸（0.0323）；莆田黑鴨（♀）腿肌的黑色素含量最低為0.0299。（3）莆田黑鴨（♂、♀）各組織的黑色素含量分別為：肺臟＞肝臟＞腎臟＞肌胃＞脾臟＞腿?。拘呐K＞十二指腸＞氣管＞皮膚＞睪丸＞胸?。环闻K＞肝臟＞卵巢＞腎臟＞肌胃＞脾臟＞心臟＞十二指腸＞輸卵管＞皮膚＞胸?。練夤埽就燃?。（4）莆田黑鴨（♂、♀）各組織黑色素含量的規(guī)律基本相同，以肺臟中最高，肌肉中最低；內(nèi)臟中黑色素含量的規(guī)律相同，均為肺臟＞肝臟＞腎臟＞肌胃＞脾臟＞心臟。

莆田黑鴨 組織 分光光度計(jì)法 黑色素含量

莆田黑鴨是中國(guó)珍貴稀有的水禽資源，被列入國(guó)家畜禽品種資源重點(diǎn)保護(hù)名錄。莆田黑鴨是我國(guó)唯一的黑羽蛋鴨地方品種，并有一定的概率產(chǎn)黑殼蛋，該鴨除羽色為全黑色外，也具有“烏嘴、青腳”性狀。

動(dòng)物黑色素具有重要的生物學(xué)功能，在商業(yè)運(yùn)作中有著重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，已經(jīng)成為近年來生物學(xué)領(lǐng)域新興的研究熱點(diǎn)[1-4]，越來越受重視。同時(shí)，由于烏骨雞皮膚和肌肉及組織中含有大量的黑色素，使得對(duì)黑色素有了更加深入的研究[5]。藥物本草中曾記載[6]，烏骨雞作為藥用雞，其入藥效果與皮膚、肌肉等組織中的黑色素相關(guān)。因此，本實(shí)驗(yàn)選用莆田黑鴨為研究對(duì)象，采用分光光度計(jì)法提取莆田黑鴨各組織的黑色素，明確莆田黑鴨各組織的黑色素含量，為莆田黑鴨相關(guān)藥用價(jià)值方面的研究提供一定的參考。

1 材料與方法

本試驗(yàn)于2014年5月～2015年2月在福建省畜禽分子遺傳育種實(shí)驗(yàn)室和石獅市國(guó)家水禽品種資源基因庫(kù)進(jìn)行。

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和組織采集

從石獅市國(guó)家水禽品種資源基因庫(kù)鴨場(chǎng)中挑選統(tǒng)一飼養(yǎng)、均勻度一致的160日齡莆田黑鴨8只，公母各半，頸靜脈放血后，取其皮膚、胸肌、腿肌、肝臟、腎臟、肌胃、心臟、脾臟、肺、氣管、卵巢、輸卵管、睪丸、十二指腸等組織，立即投入液氮中，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 黑色素含量的測(cè)定

莆田黑鴨各組織黑色素含量的測(cè)定參照Ozeki等和黎觀紅等[7-8]介紹的分光光度計(jì)法并稍作調(diào)整。具體方法：將采集的各組織取出，用冰冷的生理鹽水漂洗去除血液，用濾紙拭干稱重，然后準(zhǔn)確稱取 10 mg 組織樣品加入到 1 mL 的soluene-350：water=9：1（V/ V）溶液中，100℃水浴加熱45min～1h，待組織完全溶解后，立即置于Nanodrop 2000分光光度計(jì)中測(cè)定 500 nm條件下的吸光度值（A500），利用A500吸光值表示各組織樣品中的黑色素含量。每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定6次。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

將所獲得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。莆田黑鴨各組織黑色素含量之間的顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析（ANOVA）和LSD法多重比較。

2 結(jié)果

由圖1可知，黑色素在莆田黑鴨各組織的含量存在明顯不同，其中公莆田黑鴨肺臟的黑色素含量最高，極顯著高于其他各組織（P＜0.01），胸肌的黑色素含量最低，各組織黑色素含量總體表現(xiàn)為：肺臟〉肝臟〉腎臟〉肌胃〉脾臟〉腿肌〉心臟〉十二指腸〉氣管〉皮膚〉睪丸〉胸肌。母莆田黑鴨肺臟的黑色素含量極顯著高于其他各組織（P＜0.01），腿肌的黑色素含量最低，各組織黑色素含量總體表現(xiàn)為：肺臟〉肝臟〉卵巢〉腎臟〉肌胃〉脾臟〉心臟〉十二指腸〉輸卵管〉皮膚〉胸肌〉氣管〉腿肌。公母莆田黑鴨各組織黑色素含量的規(guī)律基本相同，以肺臟中最高，肌肉中最低。莆田黑鴨（♂、♀）內(nèi)臟中黑色素含量的規(guī)律相同，均為肺臟〉肝臟〉腎臟〉肌胃〉脾臟〉心臟。

圖1 普天黑鴨（公）各組織黑色素含量測(cè)定

圖2 普天黑鴨（母）各組織黑色素含量測(cè)定

3 討論

胡泗才等[9]、陳國(guó)宏等[10]和耿拓宇[11]等對(duì)泰和烏骨雞中黑色素在各部位的分布及相關(guān)研究中表明烏骨雞各組織的黑色素的沉積差異極顯著，其胸肌的黑度明顯淺于腿肌，且黑度隨周齡增加而變淺。本研究中莆田黑鴨（♂、♀）各組織的黑色素含量也存在著明顯不同，特別是肺臟均極顯著高于其他各組織；肌肉中的黑色素含量均偏低。Muroya[12]研究表明烏骨雞各組織中黑色素的沉積差異顯著，依次為：骨膜〉性腺（卵巢或睪丸）=氣管≥心臟、肝臟、腺胃、盲腸、肌肉（大胸肌和鳥喙骨）和皮膚。而本研究中莆田黑鴨（♂、♀）的黑色素含量分別表現(xiàn)為：肺臟〉肝臟〉腎臟〉肌胃〉脾臟〉腿肌〉心臟〉十二指腸〉氣管〉皮膚〉睪丸〉胸?。环闻K〉肝臟〉卵巢〉腎臟〉肌胃〉脾臟〉心臟〉十二指腸〉輸卵管〉皮膚〉胸肌〉氣管〉腿?。黄翁锖邙啠ā?、♀）內(nèi)臟中黑色素含量的規(guī)律相同，均為肺臟〉肝臟〉腎臟〉肌胃〉脾臟〉心臟。莆田黑鴨各組織的黑色素含量分布情況與烏骨雞各組織的黑色素含量分布不同可能是由品種、取樣方法及黑色素的提取方法不同而造成的。本研究明確了莆田黑鴨各組織的黑色素含量，為莆田黑鴨相關(guān)黑色素方面的研究提供一定的參考。

[1] Lin J Y，F(xiàn)isher D E.Melanocyte biology and skin pigmentation[J]. Nature，2007，445（7130）：843-850.

[2] Dorazio J A，Nobuhisa T，Cui R，et al.Topical drug rescue strategy and skin protection based on the role of Mc1r in UV induced tanning[J]. Nature，2006，443（7109）：340-344.

[3] Wickelgren I.Skin biology.Why I have red hair，need to avoid the sun，and shouldn’t commit a crime[J].Science，2007，315（5816）：1215.

[4] 曹繡娟，孫守榮，王鑫玉.SLC24A5基因影響脊椎動(dòng)物色素沉積的研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2008，35（5）：52-56.

[5] 李華，邱祥聘，龍繼蓉.烏骨雞黑色素的研究進(jìn)展[J].畜牧與獸醫(yī)，2002，34（8）：33-35.

[6] 鄭金生.藥物本草[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1990：237-239.

[7] Ozeki H，Ito S，Wakamatsu K，Thody A J.Spectrophotometric characterization of eumelanin and pheomelanin in hair[J].Pigment Cell Research，1996，（9）：265-270.

[8] 黎觀紅，徐海燕，許蘭姣，等.日糧硒添加水平對(duì)泰和烏骨雞生產(chǎn)性能及組織黑色素含量的影響[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，44（13）：2777-2786.

[9] 胡泗才，李明慧，郭琴，等.泰和烏骨雞體內(nèi)黑色素的分布[J].中藥材，1995，（12）：626-627.

[10] 劉向萍，陳寬維.泰和烏骨雞組織器官中黑色素沉積研究[J].動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)，1999，（4）：12-14.

[11] 耿拓宇，張學(xué)余，陳寬維，等.泰和烏雞出雛后黑色素的分布與沉積[J].中國(guó)家禽，2000，22（7）：10-12.

[12] Muroya S，Tanabe R，Nakajima I，Chikuni K.Molecular characteristics and site specific distribution of the pigment of the silky fowl[J].Vet Med Sci，2000，62（4）：391-395.

福建省農(nóng)科院創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（CXTD-2-1314）、福建省農(nóng)科院院青年基金（2014QB-27）和福建省農(nóng)科院所青年基金（MYQJ2014-2）資助

辛清武（1985-），男，漢，山東濰坊，碩士，助理研究員。

鄭嫩珠（1972-），女，漢，福建寧德，在讀博士，副研究員。