北五味子抗?jié)兊难芯?/h1>
2015-03-10 01:05:13楊連榮李曉梅楊爽爽宗可昕范卓文
楊連榮，李曉梅，崔 闊，楊爽爽，宗可昕，范卓文
(1. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱 150040；2. 通河縣人民醫(yī)院，哈爾濱 150900；3. 北京秦脈醫(yī)藥咨詢有限責(zé)任公司，北京 100082)
北五味子抗?jié)兊难芯?/p>
楊連榮1，李曉梅2，崔 闊3，楊爽爽1，宗可昕1，范卓文1
(1. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱 150040；2. 通河縣人民醫(yī)院，哈爾濱 150900；3. 北京秦脈醫(yī)藥咨詢有限責(zé)任公司，北京 100082)
研究傳統(tǒng)中藥五味子是否具有抗?jié)兊淖饔?，為其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供一定的依據(jù).采用冰醋酸法大鼠胃潰瘍模型進(jìn)行實驗，觀察五味子提取物對大鼠胃潰瘍的治愈情況.五味子提取物對冰醋酸法制備的大鼠胃潰瘍具有明顯的治愈效果.該方法簡單易行，可以作為北五味子抗?jié)兊难芯糠椒?
五味子；抗?jié)儯凰幮W(xué)；大鼠
胃潰瘍是消化性潰瘍中的一種常見疾病，它的發(fā)病區(qū)主要位于賁門和幽門之間.目前在臨床上治療胃潰瘍的中藥及西藥很多，這些藥物雖然見效很快，但是復(fù)發(fā)率很高[1].近年來，中醫(yī)中藥治療胃潰瘍[2-4]越來越受到多數(shù)人的認(rèn)可，其原因是療效顯著，毒副作用小.五味子作為傳統(tǒng)中藥[5]，是木蘭科植物五味子的干燥成熟果實，具有斂肺滋腎、止瀉澀精、寧心安神等功效，常用于治療夢遺滑精、久咳虛喘、津傷口渴、遺尿尿頻、心悸失眠等癥狀[6].本實驗研究通過建立大鼠的胃潰瘍模型，以大鼠的病理切片及體重變化來研究五味子提取物對胃潰瘍的治療情況，為五味子提取物臨床治療胃潰瘍提供初步的實驗支持.
1 實驗材料
1.1 藥品和試劑
高錳酸鉀、甲醇、二甲苯、無水乙醇、硫酸鋁鉀、氨水(分析純 天津市天力化學(xué)試劑有限公司)；磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉(分析純 天津市密歐化學(xué)試劑有限公司)；鹽酸(分析純 天津市富宇精細(xì)化工有限公司)；樹膠(加拿大進(jìn)口分裝 上?；瘜W(xué)試劑分裝廠)；水溶伊紅、蘇木色素(天津市百世化工有限公司)；石蠟(LEICA 德國萊卡公司)；生理鹽水(醫(yī)用)(沈陽志鷹制藥廠)；鹽酸雷尼替丁膠囊(杭州賽諾菲圣德拉堡民生制藥有限公司)；冰醋酸、乙醚為市售純品；實驗用中性福爾馬林溶液、鹽酸酒精溶液及五味子提取物等自制.
1.2 實驗儀器
組織脫水機、包埋機、切片機、攤片機、烘片機、封片機、染色機，以上均由德國萊卡公司制造；顯微鏡(Nikon ECLIPSE E600 尼康公司)、電恒溫培養(yǎng)箱(DH4000B 天津泰斯特儀器有限公司).
1.3 實驗動物
SD大鼠(雌雄各半)，體重為180～220 g，購自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心，合格證號：SYXK黑2008001.
2 實驗方法
2.1 實驗動物分組
將實驗動物隨機分為空白組，模型組，陽性給藥組，給藥治療組，每組10只，雌雄各半.
2.2 給藥劑量
給藥劑量按照人和大鼠的體型系數(shù)的換算公式求得.給藥劑量計算公式：D2=D1×K2/K1×(W1/W2)1/3.公式中，D1、K1、W1為人所要求的用藥劑量、體型指數(shù)、體重，D2、K2、W2為已知動物的用藥劑量、體型指數(shù)、體重.經(jīng)計算各組給藥劑量如表1所示.
表1 各組給藥劑量表
2.3 冰醋酸法大鼠胃潰瘍模型的制備
造模組是將大鼠在乙醚麻醉狀態(tài)下剖開腹部，暴露胃部，用30%醋酸溶液0.02 mL注射至腺胃部前壁的漿膜下，再將腹壁縫合[7].造模術(shù)后從第2天開始，對大鼠進(jìn)行給藥，空白組和模型組分別給以與陽性藥組和給藥治療組相同體積的蒸餾水，陽性藥組和給藥治療組按大鼠體重給藥，每天上午給藥灌胃1次，共計14 d.
2.4 指標(biāo)觀察
2.4.1體重變化
在實驗期間，對大鼠按實驗分組進(jìn)行體重稱量，記錄，實驗結(jié)束后，比較各組大鼠的體重變化.
2.4.2病理組織切片觀察
實驗大鼠末次給藥后，禁食不禁水24 h，取出全胃，浸入10%福爾馬林固定后，對各組胃組織進(jìn)行病理切片觀察，在電子顯微鏡下觀察各組大鼠胃組織的病理變化情況[8].
2.5 實驗動物的取材和保存
2.5.1取 材
將處死后的大鼠腹腔打開，結(jié)扎幽門和賁門后取出胃，向胃腔注入1%的甲醛溶液10 mL，然后將胃浸入10%中性福爾馬林固定一周.
2.5.2組織脫水
將固定好的臟器進(jìn)行修塊后，按甲醛(二次固定)—水洗—70%酒精—80%酒精—90%酒精—95%酒精—100%酒精I(xiàn)—100%酒精I(xiàn)I—二甲苯I—二甲苯II—石蠟I—石蠟II—石蠟III順序進(jìn)行臟器的脫水.
2.5.3組織切片
用全自動切片機進(jìn)行組織切片，放入恒溫箱保存.
2.5.4HE染色
將保存一夜的切片放入染色機中，進(jìn)行HE染色，染色順序為：二甲苯I—二甲苯II—無水乙醇I—無水乙醇II—95%乙醇—90%乙醇—80%乙醇—70%乙醇—蒸餾水—蘇木素—蒸餾水—鹽酸酒精—蒸餾水—伊紅—蒸餾水—70%乙醇—80%乙醇—90%乙醇—95%乙醇—無水乙醇I—無水乙醇II—二甲苯I—二甲苯II，用中性樹膠封片.
3 實驗結(jié)果
3.1 體重變化
實驗前后各組大鼠體重變化如表2所示.
表2實驗大鼠各組體重變化(x±S，n=10)
注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01
3.2 病理組織學(xué)圖片及觀察結(jié)果
見圖1.
圖1 病理圖片
由圖1可見，空白組內(nèi)實驗大鼠胃黏膜完整，黏膜上皮細(xì)胞未見壞死、脫落.有豐富的腺體，部分大鼠黏膜內(nèi)有少量的炎細(xì)胞浸潤，但是黏膜下層、肌層、漿膜層均無明顯炎細(xì)胞浸潤.模型組內(nèi)實驗大鼠胃部可見嚴(yán)重潰瘍面，肌層可見嚴(yán)重水腫，胃黏膜損傷嚴(yán)重，有大量炎細(xì)胞浸潤出現(xiàn)在表面.陽性給藥組相對于模型組病變程度大有好轉(zhuǎn)，潰瘍面幾乎不見，肌層僅有輕度水腫，黏膜表面無明顯炎細(xì)胞浸潤，血小管也沒有充血現(xiàn)象.給藥組相對于模型組癥狀明顯減輕，胃部無明顯潰瘍面，胃黏膜有少量脫落，無肌層水腫，僅有少量炎細(xì)胞浸潤，血小管無明顯充血現(xiàn)象.
4 結(jié) 語
通過對北五味子提取物對大鼠抗?jié)冏饔盟幮W(xué)的初步研究，可以得出以下結(jié)論：實驗前后大鼠體重變化結(jié)果顯示，體重變化大小為：空白組>陽性藥組≈給藥組>模型組，由此可以得出給藥組對大鼠的胃潰瘍有較好的療效；病理組織學(xué)切片圖顯示，給藥治療組的治療效果可以和陽性藥組的治療效果相比較，有很好的療效.這一結(jié)論為五味子的進(jìn)一步臨床研究提供了前期實驗支持.
[1] 陳 文, 何曉暉, 徐澤宇, 等.雙蒲散抗?jié)冏饔玫膶嶒炑芯縖J]. 中成藥, 2008, 30(5): 654-657.
[2] 通沙萬.健中愈瘍片治療胃潰瘍臨床療效觀察及其對胃黏膜修復(fù)作用機理探討[D]. 廣州: 廣州中醫(yī)藥大學(xué),2007
[3] 豆志偉.化濁解毒愈瘍煎治療胃潰瘍的實驗研究[D]. 石家莊: 河北醫(yī)科大學(xué), 2013.
[4] 王雅楠.中西醫(yī)結(jié)合治療胃潰瘍的臨床效果分析[J]. 中醫(yī)中藥, 2012, 2(8):61-62.
[5] 李 恒, 趙亞麗.北五味子的現(xiàn)代研究[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2008, 17(22): 3560-3562.
[6] 李宗霖.華中五味子果實HPLC指紋圖譜研究[D]. 西安: 陜西師范大學(xué), 2010.
[7] 張永貴.核桃楸幼果乙醇提取物對大鼠醋酸型實驗性胃潰瘍的作用[D]. 延邊: 延邊大學(xué), 2005.
[8] 姜丹丹，郎 朗，季宇彬.五味子中殘留農(nóng)藥對卵巢顆粒細(xì)胞的毒性研究[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2014，30(3)：271-274.
Study on anti-ulcer effect of schisandra chinensis
YANG Lian-rong1, LI Xiao-mei2, CUI Kuo3, YANG Shuang-shuang1, ZONG Ke-xin1, FAN Zhuo-wen1
(1. School of Pharmacy, Heilongjiang Chinese Medicine University, Harbin 150040, China; 2. Tonghe People’s Hospital,Harbin 150900, China; 3. Beijing Qin-mai Pharmaceutical Consulting LLC, Beijing 100082, China)
To research on the anti-ulcer effect of schisandra chinensis providing a certain basis for its further development and application. The experiment was performed by rat gastric ulcer model of glacial acetic acid method. The healing effect of schizandra chinensis extract on rat gastric ulcer was observed. Results indicated that the gastric ulcer effect of the schisandra chinensis was obvious. This method was simple and could be used as an approach to the study of ulcer of fructus schisandrae chinensis.
schisandra chinensis; anti-ulcer; pharmacodynamics; rat
2015-03-06.
楊連榮(1979-)，女，博士，副教授，研究方向：中藥及其復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ).
范卓文(1961-)，女，碩士，教授，研究方向：中藥藥物分析.
R285
A
1672-0946(2015)03-0271-03
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北五味子抗?jié)兊难芯?/p>
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(1. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，哈爾濱 150040；2. 通河縣人民醫(yī)院，哈爾濱 150900；3. 北京秦脈醫(yī)藥咨詢有限責(zé)任公司，北京 100082)
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五味子；抗?jié)儯凰幮W(xué)；大鼠
胃潰瘍是消化性潰瘍中的一種常見疾病，它的發(fā)病區(qū)主要位于賁門和幽門之間.目前在臨床上治療胃潰瘍的中藥及西藥很多，這些藥物雖然見效很快，但是復(fù)發(fā)率很高[1].近年來，中醫(yī)中藥治療胃潰瘍[2-4]越來越受到多數(shù)人的認(rèn)可，其原因是療效顯著，毒副作用小.五味子作為傳統(tǒng)中藥[5]，是木蘭科植物五味子的干燥成熟果實，具有斂肺滋腎、止瀉澀精、寧心安神等功效，常用于治療夢遺滑精、久咳虛喘、津傷口渴、遺尿尿頻、心悸失眠等癥狀[6].本實驗研究通過建立大鼠的胃潰瘍模型，以大鼠的病理切片及體重變化來研究五味子提取物對胃潰瘍的治療情況，為五味子提取物臨床治療胃潰瘍提供初步的實驗支持.
1 實驗材料
1.1 藥品和試劑
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1.2 實驗儀器
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1.3 實驗動物
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2 實驗方法
2.1 實驗動物分組
將實驗動物隨機分為空白組，模型組，陽性給藥組，給藥治療組，每組10只，雌雄各半.
2.2 給藥劑量
給藥劑量按照人和大鼠的體型系數(shù)的換算公式求得.給藥劑量計算公式：D2=D1×K2/K1×(W1/W2)1/3.公式中，D1、K1、W1為人所要求的用藥劑量、體型指數(shù)、體重，D2、K2、W2為已知動物的用藥劑量、體型指數(shù)、體重.經(jīng)計算各組給藥劑量如表1所示.
表1 各組給藥劑量表
2.3 冰醋酸法大鼠胃潰瘍模型的制備
造模組是將大鼠在乙醚麻醉狀態(tài)下剖開腹部，暴露胃部，用30%醋酸溶液0.02 mL注射至腺胃部前壁的漿膜下，再將腹壁縫合[7].造模術(shù)后從第2天開始，對大鼠進(jìn)行給藥，空白組和模型組分別給以與陽性藥組和給藥治療組相同體積的蒸餾水，陽性藥組和給藥治療組按大鼠體重給藥，每天上午給藥灌胃1次，共計14 d.
2.4 指標(biāo)觀察
2.4.1體重變化
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2.4.2病理組織切片觀察
實驗大鼠末次給藥后，禁食不禁水24 h，取出全胃，浸入10%福爾馬林固定后，對各組胃組織進(jìn)行病理切片觀察，在電子顯微鏡下觀察各組大鼠胃組織的病理變化情況[8].
2.5 實驗動物的取材和保存
2.5.1取 材
將處死后的大鼠腹腔打開，結(jié)扎幽門和賁門后取出胃，向胃腔注入1%的甲醛溶液10 mL，然后將胃浸入10%中性福爾馬林固定一周.
2.5.2組織脫水
將固定好的臟器進(jìn)行修塊后，按甲醛(二次固定)—水洗—70%酒精—80%酒精—90%酒精—95%酒精—100%酒精I(xiàn)—100%酒精I(xiàn)I—二甲苯I—二甲苯II—石蠟I—石蠟II—石蠟III順序進(jìn)行臟器的脫水.
2.5.3組織切片
用全自動切片機進(jìn)行組織切片，放入恒溫箱保存.
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3 實驗結(jié)果
3.1 體重變化
實驗前后各組大鼠體重變化如表2所示.
表2實驗大鼠各組體重變化(x±S，n=10)
注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01
3.2 病理組織學(xué)圖片及觀察結(jié)果
見圖1.
圖1 病理圖片
由圖1可見，空白組內(nèi)實驗大鼠胃黏膜完整，黏膜上皮細(xì)胞未見壞死、脫落.有豐富的腺體，部分大鼠黏膜內(nèi)有少量的炎細(xì)胞浸潤，但是黏膜下層、肌層、漿膜層均無明顯炎細(xì)胞浸潤.模型組內(nèi)實驗大鼠胃部可見嚴(yán)重潰瘍面，肌層可見嚴(yán)重水腫，胃黏膜損傷嚴(yán)重，有大量炎細(xì)胞浸潤出現(xiàn)在表面.陽性給藥組相對于模型組病變程度大有好轉(zhuǎn)，潰瘍面幾乎不見，肌層僅有輕度水腫，黏膜表面無明顯炎細(xì)胞浸潤，血小管也沒有充血現(xiàn)象.給藥組相對于模型組癥狀明顯減輕，胃部無明顯潰瘍面，胃黏膜有少量脫落，無肌層水腫，僅有少量炎細(xì)胞浸潤，血小管無明顯充血現(xiàn)象.
4 結(jié) 語
通過對北五味子提取物對大鼠抗?jié)冏饔盟幮W(xué)的初步研究，可以得出以下結(jié)論：實驗前后大鼠體重變化結(jié)果顯示，體重變化大小為：空白組>陽性藥組≈給藥組>模型組，由此可以得出給藥組對大鼠的胃潰瘍有較好的療效；病理組織學(xué)切片圖顯示，給藥治療組的治療效果可以和陽性藥組的治療效果相比較，有很好的療效.這一結(jié)論為五味子的進(jìn)一步臨床研究提供了前期實驗支持.
[1] 陳 文, 何曉暉, 徐澤宇, 等.雙蒲散抗?jié)冏饔玫膶嶒炑芯縖J]. 中成藥, 2008, 30(5): 654-657.
[2] 通沙萬.健中愈瘍片治療胃潰瘍臨床療效觀察及其對胃黏膜修復(fù)作用機理探討[D]. 廣州: 廣州中醫(yī)藥大學(xué),2007
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[4] 王雅楠.中西醫(yī)結(jié)合治療胃潰瘍的臨床效果分析[J]. 中醫(yī)中藥, 2012, 2(8):61-62.
[5] 李 恒, 趙亞麗.北五味子的現(xiàn)代研究[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2008, 17(22): 3560-3562.
[6] 李宗霖.華中五味子果實HPLC指紋圖譜研究[D]. 西安: 陜西師范大學(xué), 2010.
[7] 張永貴.核桃楸幼果乙醇提取物對大鼠醋酸型實驗性胃潰瘍的作用[D]. 延邊: 延邊大學(xué), 2005.
[8] 姜丹丹，郎 朗，季宇彬.五味子中殘留農(nóng)藥對卵巢顆粒細(xì)胞的毒性研究[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2014，30(3)：271-274.
Study on anti-ulcer effect of schisandra chinensis
YANG Lian-rong1, LI Xiao-mei2, CUI Kuo3, YANG Shuang-shuang1, ZONG Ke-xin1, FAN Zhuo-wen1
(1. School of Pharmacy, Heilongjiang Chinese Medicine University, Harbin 150040, China; 2. Tonghe People’s Hospital,Harbin 150900, China; 3. Beijing Qin-mai Pharmaceutical Consulting LLC, Beijing 100082, China)
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schisandra chinensis; anti-ulcer; pharmacodynamics; rat
2015-03-06.
楊連榮(1979-)，女，博士，副教授，研究方向：中藥及其復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ).
范卓文(1961-)，女，碩士，教授，研究方向：中藥藥物分析.
R285
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