全自動(dòng)固相萃取-高效液相色譜-熒光檢測(cè)法測(cè)定生活飲用水中苯酚

張玲玲 顧耀秦

（蘇州大學(xué)衛(wèi)生與環(huán)境技術(shù)研究所 江蘇蘇州 215000）

酚類化合物中苯酚的毒性最大，苯酚是重要的有機(jī)化工原料，在化工原料、合成纖維、塑料、合成橡膠、醫(yī)藥、農(nóng)藥、香料、涂料和煉油等工業(yè)中有著廣泛的用途。因此苯酚對(duì)水體有著很大的影響。是水污染的重要來(lái)源，其生活飲用水也深受其害。生活飲用水中苯酚含量較低，水樣在測(cè)定之前需要前期的預(yù)富集處理。常用的處理方法有液液萃取、固液萃取、濁點(diǎn)萃取。液液萃取等方法其操作繁瑣，消耗大量的有機(jī)試劑，對(duì)人體和環(huán)境造又成很大的危害和二次污染；濁點(diǎn)萃取作為一種新興的萃取方法具有安全、節(jié)約、操作簡(jiǎn)單、毒性小的優(yōu)點(diǎn)，目前被廣泛的應(yīng)用于金屬離子、生物大分子、有機(jī)污染物等物質(zhì)的提取中。但是表面活性劑的選擇濃度，添加劑、溶液的PH和離子強(qiáng)度、平衡時(shí)間溫度等對(duì)濁點(diǎn)萃取的萃取效率有著很大的影響。固相萃取法是目前替代液液萃取的最主要技術(shù)，如今固相萃取已經(jīng)被廣泛認(rèn)為是水樣中待測(cè)化合物提取凈化的首選方案。特別是全自動(dòng)固相萃取儀，不僅操作簡(jiǎn)便，減少手動(dòng)操作所產(chǎn)生的誤差，減少有機(jī)溶劑的用量，而且時(shí)間大大縮短，可以做到無(wú)人看守，大大提高了實(shí)驗(yàn)的工作效率。建立全自動(dòng)固相萃取-高效液相色譜-熒光檢測(cè)器測(cè)定飲用水中苯酚的分析方法，操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度、精密度高，適用于飲用水中苯酚的含量測(cè)定，結(jié)果令人滿意。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：AllianceE2695-2475熒光檢測(cè)器(美國(guó)Waters公司)。

全自動(dòng)固相萃取儀：LabTechSepLine-S4（北京萊伯泰科公司）

氮吹儀：AUTOSCIENCEMTN-2800W

苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液：1.0g/mL 色標(biāo)5mL（天津光復(fù)精細(xì)化工研究所）

四氫呋喃:色譜純4L 批號(hào)123829（美國(guó)賽默飛世爾科技）

甲醇：色譜純4L 批號(hào)124635（美國(guó)賽默飛世爾科技）

乙酸：分析純 500mL批號(hào)20140305（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑）

乙酸銨：分析純 500g 批號(hào)20141114（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑）

1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

將1.0g/mL的苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液用水分步稀釋成1000μg/mL、1.0μg/mL最后稀釋為100μg/L的苯酚標(biāo)準(zhǔn)使用液100mL。

準(zhǔn)確移取苯酚標(biāo)準(zhǔn)使用液：10μL、20μL、40μL、120μL、200μL、280μL、400μL于1.5mL液相色譜專用樣品瓶中定容到1mL。標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶度：1.0μg/L、2.0μg/L、4.0μg/L、12.0μg/L、20.0μg/L、28.0μg/L、40.0μg/L。

在后續(xù)發(fā)展中，相關(guān)養(yǎng)殖人員以及疾病防控單位應(yīng)進(jìn)一步將非洲豬瘟重視起來(lái)，針對(duì)具體的防控辦法及疫苗等進(jìn)行研究，盡量將這一疾病對(duì)我國(guó)豬養(yǎng)殖業(yè)的影響降低到最小，避免因?yàn)檫@一疾病導(dǎo)致養(yǎng)殖人員遭受經(jīng)濟(jì)損失，最終達(dá)到促進(jìn)我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)不斷發(fā)展的目的。

1.3 樣品處理

水樣-飲用水均為實(shí)驗(yàn)室自來(lái)水。

1.3.1 用固相萃取專用樣品瓶分別取2份50mL水樣。

1.3.2 將樣品瓶放置全自動(dòng)固相萃取儀的樣品板盤(pán)上，并放置收集瓶于全自動(dòng)固相萃取儀的收集盤(pán)上，收集洗脫液，注意樣品瓶、收集瓶的位置編號(hào)。

1.3.3 加載苯酚萃取方法（如圖1）并運(yùn)行儀器參數(shù)

Condition潤(rùn)洗——10mL純化水，流速10.0mL/min

SampleLoading上樣——50mL水樣，流速10.0mL/min

Flowpathrinsing淋洗——10mL純化水，流速10.0mL/min

Elution洗脫——5.0mL四氫呋喃，流速5.0mL/min

圖1 全自動(dòng)固相萃取苯酚萃取方法

1.3.4 等整個(gè)方法運(yùn)行結(jié)束后將收集瓶取下，將洗脫液氮吹濃縮至近干，然后用水重新定容至1mL，待測(cè)。

1.4 色譜條件

檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng):230nm 發(fā)射波長(zhǎng):320nm

色譜柱：WatersXBridger-C18（3.5um 4.6*150mm）

柱溫箱溫度：25℃

流動(dòng)相：甲醇+0.01mol/L乙酸-乙酸銨緩沖溶液（PH=4.0）=55+45

流速：1.0mL/min

進(jìn)樣量：20ul

2 結(jié)果與討論

2.1 苯酚標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（如圖2）

圖2 苯酚4.0ug/L 的標(biāo)準(zhǔn)品

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及方法檢出限

根據(jù)信噪比S/N=3計(jì)算檢出限，苯酚的檢出限為：1.0ug/L。

圖3 苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（y=3.624e+001+1.658e+002 R2=0.9995）

2.3 回收率與精密度

取5份49.7mL水樣分別加入100μg/L苯酚標(biāo)準(zhǔn)使用液300μL，即樣品加標(biāo)為6.0μg/L，取5份48.6mL水樣分別加入100μg/mL苯酚標(biāo)準(zhǔn)使用液1400μL，即樣品加標(biāo)為28μg/L。按照苯酚萃取方法（如圖1）進(jìn)行萃取，按照1.4色譜條件進(jìn)行檢測(cè)。

表1 回收率與精密度實(shí)驗(yàn)

3 結(jié)語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)表明全自動(dòng)固相萃取-高效液相色譜-熒光檢測(cè)器測(cè)定飲用水中苯酚的分析方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度精密度高，減少手動(dòng)萃取帶來(lái)的誤差，可以做到無(wú)人萃取，節(jié)省時(shí)間，提高了實(shí)驗(yàn)效率，便于大批量樣品的測(cè)定。

[1]江蘇省環(huán)境監(jiān)測(cè)中心,國(guó)家環(huán)境保護(hù)地表水環(huán)境有機(jī)污染物監(jiān)測(cè)分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室.地表水環(huán)境質(zhì)量80個(gè)特定項(xiàng)目監(jiān)測(cè)分析方法[M].北京：中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社,2009:90-97.

[2]宣棟梁,黎源倩.高效液相色譜法測(cè)定環(huán)境水中酚類化合物,中國(guó)公共衛(wèi)生2002（18）：9.

[3]胡秋芬,仰光宇,黃章杰,尹家元固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定水中酚類化合物[J],2002（30）.

[4]張學(xué)俊,吳仁安.高效液相色譜法分析礦泉水中酚類化合物[J],色譜1998（16）：6.

[5]楊通在，固相萃取技術(shù)的現(xiàn)狀與發(fā)展[J],環(huán)境檢測(cè)與研究2006,32（12）:107-108.