HPLC法測定溴甲東莨菪堿片的含量

李 莉（邯鄲市食品藥品檢驗中心，河北邯鄲 056004）

溴甲東莨菪堿片在臨床常用于治療胃及十二指腸潰瘍、胃炎、潰瘍性結(jié)腸炎、腸蠕動亢進等疾病。其檢驗標準收載于《國家藥品標準》化學藥品地方標準上升國家標準第15冊[1]。該標準采用容量法測定其含量。此方法操作煩瑣，終點不易判定，且操作過程中使用了有劇毒的有機物硝基苯。為此，筆者建立了采用高效液相色譜（HPLC）法測定溴甲東莨菪堿片含量的方法，以為其質(zhì)量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010型HPLC儀，包括紫外（UV）檢測器、LC-solution色譜工作站（日本島津公司）；AE240型電子天平（瑞士梅特勒-托利多有限公司）。

1.2 藥品與試劑

溴甲東莨菪堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100476-200301，純度：99.4%）；溴甲東莨菪堿片（廣州白云山光華制藥股份有限公司，批號：130701、130902、130303，規(guī)格：1 mg/片）；甲醇為色譜純，庚烷磺酸鈉、冰醋酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果[2]

2.1 色譜條件

色譜柱：Shim-pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）[3]；流速：1.0 ml/min；檢測波長：230 nm；柱溫：室溫；進樣量：20μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取本品100片（約10.673 g），研細，精密量取細粉適量（約相當于溴甲東莨菪堿0.025 g），置于50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。

2.2.2 對照品溶液 取溴甲東莨菪堿對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成1 ml中約含0.5 mg的溶液。

2.2.3 空白樣品溶液 取不含溴甲東莨菪堿的空白樣品，按“2.2.1”項下方法制備，即得空白樣品溶液。

2.3 空白干擾試驗

取“2.2”項下供試品溶液、對照品溶液、空白樣品溶液各20 μl，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，詳見圖1。由圖1可見，供試品溶液與對照品溶液色譜在相應位置處有相同的色譜峰，而空白樣品溶液色譜中無此峰，表明空白樣品溶液對測定無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取溴甲東莨菪堿對照品0.500 9 g，置于50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取上述對照品貯備液各1.0、2.0、5.0、10.0、15.0 ml，置于100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度（x，mg/ml）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得溴甲東莨菪堿的回歸方程為y＝2.136×103+3.478×105x（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，溴甲東莨菪堿質(zhì)量濃度在0.100 2～1.502 7 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

圖1 高效液相色譜圖A.對照品溶液；B.供試品溶液；C.空白樣品溶液；1.溴甲東莨菪堿Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference solution；B.test solution；C.blank sample solution；1.methscopolamine bromide

取“2.2.2”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣5次，記錄峰面積。結(jié)果，溴甲東莨菪堿峰面積的RSD為0.6%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液適量，分別于室溫下放置1、2、6、10、12 h時按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣5次，記錄峰面積。結(jié)果，溴甲東莨菪堿峰面積的RSD為0.9%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復性試驗

取樣品（批號：130701）適量，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果，溴甲東莨菪堿含量的RSD為0.7%，表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品（批號：130701）適量，共9份，精密加入一定量的溴甲東莨菪堿對照品，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，并按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.9 樣品含量測定

精密吸取“2.2”項下供試品溶液、對照品溶液各20μl，注入色譜儀，以外標法計算樣品中溴甲東莨菪堿的占標示量百分含量，并與筆者前期采用容量法測定的結(jié)果進行比較。結(jié)果，HPLC法測得的結(jié)果與容量法基本相同，詳見表2。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

根據(jù)溴甲東莨菪堿在水中易溶解、在甲醇中微溶的性質(zhì)[2]，筆者分別采用流動相及水作為溶劑進行試驗。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，溴甲東莨菪堿均可溶解，但用水作為溶劑時，溶解時間少、回收率高、成本低，故采用水作為本研究的溶劑。

3.2 檢測波長的選擇

本研究發(fā)現(xiàn)，溴甲東莨菪堿對照品溶液在230 nm波長處有最大吸收，空白樣品溶液在230 nm波長處幾乎沒有吸收，故選230 nm為本研究的檢測波長。

3.3 流動相的選擇[4-5]

筆者分別比較了以甲醇-水（40∶60，V/V）、0.04%戊烷磺酸鈉溶液-甲醇（60∶40，V/V）、甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）等為流動相時的分離度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）為流動相時的分離效果較好，故選擇其作為本研究的流動相。

3.4 溴甲東莨菪堿與東莨菪堿相比

東莨菪堿在臨床上以氫溴酸東莨菪堿常見。氫溴酸東莨菪堿含量測定收載于2010年版《中國藥典》[6]，以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.25%十二烷基硫酸鈉溶液（磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5）-乙腈為流動相，檢測波長為210 nm。但實際工作中發(fā)現(xiàn)，辛烷基硅烷鍵合硅膠應用較少，乙腈毒性較大，且210 nm波長處易出現(xiàn)（甲醇）末端吸收。故本研究采用較為常見的C18柱；采用以甲醇-0.5%庚烷磺酸鈉溶液（含0.5%冰醋酸）（35∶75，V/V）為流動相，配制簡單，不需調(diào)節(jié)pH；采用230 nm為檢測波長，避免了（甲醇）末端吸收。筆者采用本研究的色譜條件對氫溴酸東莨菪堿的含量進行測定，又采用氫溴酸東莨菪堿的色譜條件對溴甲東莨菪堿的含量進行測定，因二者所采用的色譜柱、檢測波長、流動相均不相同，測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者分離度及柱效均較低、峰形較差，故建議二者色譜條件不互換。

綜上所述，本方法準確度高、操作簡便，可用于溴甲東莨菪堿片的含量測定。

[1]國家藥典委員會編.WS-10001-（HD-1447）國家藥品標準：化學藥品地方標準上升國家標準：第15冊[S].2003：152.

[2]國家藥典委員會編.WS-10001-（HD-0579）國家藥品標準：化學藥品地方標準上升國家標準：第6冊[S].2002：245.

[3]劉文英.藥物分析[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：80-83.

[4]李莉，張鋼平，李曉敏，等.平喘鎮(zhèn)咳類中成藥中非法添加4種化學藥品的檢驗方法[J].中國藥房，2008，9（19）：676.

[5]李發(fā)美.分析化學[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：417-440.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：560.