皮膚角朊細(xì)胞的三維培養(yǎng)*

劉雪來 高 鵬 綜述 黃格元 審校

①(香港大學(xué)深圳醫(yī)院外科，深圳 518053)②(香港大學(xué)李嘉誠醫(yī)學(xué)院外科學(xué)系，香港 999077)③(哈爾濱市兒童醫(yī)院外科，哈爾濱 150010)

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·文獻(xiàn)綜述·

皮膚角朊細(xì)胞的三維培養(yǎng)*

劉雪來①②高 鵬③綜述 黃格元①②審校

①(香港大學(xué)深圳醫(yī)院外科，深圳 518053)②(香港大學(xué)李嘉誠醫(yī)學(xué)院外科學(xué)系，香港 999077)③(哈爾濱市兒童醫(yī)院外科，哈爾濱 150010)

表皮角朊細(xì)胞(keratinocyte，KC)是皮膚創(chuàng)傷后“再上皮化”過程中的主要功能細(xì)胞，其增殖和移行是創(chuàng)緣皮膚早期修復(fù)的重要生物學(xué)過程[1，2]。在體內(nèi)外環(huán)境下探索和檢測(cè)各種分子類藥物、納米顆粒材料等對(duì)KC增殖、移行和分化的功效以及創(chuàng)傷后組織結(jié)構(gòu)和功能的快速修復(fù)，是微創(chuàng)治療的熱點(diǎn)研究?jī)?nèi)容之一[3]。KC的培養(yǎng)作為開展相關(guān)研究工作的前提，因其在體外環(huán)境貼壁性差，細(xì)胞活力低，增殖緩慢，對(duì)培養(yǎng)要求相對(duì)嚴(yán)格，成為創(chuàng)傷修復(fù)研究的難點(diǎn)。

當(dāng)前人們主要采用體外二維培養(yǎng)擴(kuò)增KC，而近年來隨著三維(three-dimensional，3D)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的興起，國內(nèi)外學(xué)者亦嘗試對(duì)KC進(jìn)行3D培養(yǎng)并取得成功，為人工皮膚制備提供了技術(shù)支持。本文對(duì)此進(jìn)行綜述。

1 皮膚角朊細(xì)胞采用3D培養(yǎng)的原因

對(duì)于表皮KC的體外培養(yǎng)，研究者所關(guān)心的不僅是KC能否在體外環(huán)境下有效生長，還有分裂增殖和歷經(jīng)多次傳代后的KC能否依舊保持在體狀態(tài)的原有性狀[4]。在皮膚表皮內(nèi)具有增殖活力的KC主要位于棘層和基底層，其增殖和分化受到基因表達(dá)的調(diào)控，其在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控尤為重要，這些經(jīng)過調(diào)控的KC經(jīng)過一系列形態(tài)學(xué)和生化改變，最終進(jìn)入角質(zhì)層形成角質(zhì)細(xì)胞。表皮本身是KC生長的內(nèi)環(huán)境，對(duì)于基因調(diào)控KC的增殖和分化至關(guān)重要。此外，各種細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞因子等也對(duì)KC生長產(chǎn)生重要影響。這些提示：傳統(tǒng)二維培養(yǎng)與體內(nèi)環(huán)境之間存在著較大的生物學(xué)差異(表1)。

傳統(tǒng)二維培養(yǎng)技術(shù)使細(xì)胞僅可以在平面內(nèi)單層生長，無法更好地模擬體內(nèi)微環(huán)境，影響了基因精確表達(dá)調(diào)控，使KC在體外培養(yǎng)環(huán)境下生長過程中逐漸喪失原有性狀特征。以皮膚創(chuàng)傷修復(fù)研究為例，各種藥物分子、分子載體、靶基因(蛋白)的激活劑或阻斷劑，以及干細(xì)胞在局部應(yīng)用之后，研究者只能借助觀察傷口面積大小改變情況來判定外源因素對(duì)傷口愈合的影響，觀察結(jié)果只代表藥物的最終效果，無法呈現(xiàn)包括對(duì)“再上皮化過程”的影響或“再上皮化過程”對(duì)“真皮收縮”影響的“修復(fù)中間過程”。因此，人們認(rèn)識(shí)到在傳統(tǒng)的體外二維細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)研究之間，應(yīng)該存在一種新的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，這種技術(shù)：①不但能有效培養(yǎng)KC，使細(xì)胞在生長傳代的同時(shí)能保持自然形態(tài)和功能，以及良好的體內(nèi)生物學(xué)性狀特征，而且有助于人們觀察和了解KC的代謝、分化、增殖、發(fā)育和移行等過程，以及對(duì)全皮膚組織構(gòu)建的影響；②貼近體內(nèi)真實(shí)環(huán)境，為臨床研究提供科學(xué)依據(jù)；③保證細(xì)胞的活力和對(duì)外界因素的敏感性[5]；④有助于了解KC在培養(yǎng)體系(模擬皮膚組織)內(nèi)的相互作用和影響；⑤規(guī)避動(dòng)物皮膚燒傷、燙傷等模型制備過程中的倫理學(xué)問題。在這種情況下，3D培養(yǎng)KC技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，其對(duì)KC的培養(yǎng)較傳統(tǒng)二維培養(yǎng)優(yōu)勢(shì)明顯，并更貼近人體內(nèi)環(huán)境條件(表1)。通過應(yīng)用具有三維結(jié)構(gòu)的材料作為載體與KC在體外共同培養(yǎng)，使KC能夠在載體特有的立體結(jié)構(gòu)中增殖、遷移和生長，形成類似皮膚表皮結(jié)構(gòu)，即培養(yǎng)體系立體結(jié)構(gòu)與皮膚切面結(jié)構(gòu)相似。

2 皮膚角朊細(xì)胞3D培養(yǎng)的探索演化過程

對(duì)KC的3D培養(yǎng)經(jīng)歷了較長的探索過程。正常皮膚表皮含有8～10層KC，呈立體排列，因此人們力圖探索和培養(yǎng)出形態(tài)學(xué)上與成人表皮結(jié)構(gòu)相近的含有數(shù)層KC的組織。最初采用3T3細(xì)胞種植于膠原蛋白表面，其上種植KC[6]，即以3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層，KC在培養(yǎng)皿底呈單層平面性生長；此后又探索將3T3細(xì)胞混入膠原蛋白來模擬真皮組織，其上種植KC[7]。2種培養(yǎng)方法均可產(chǎn)生分別具有增殖和角化特性的數(shù)層KC，被視為3D培養(yǎng)KC和制備人工皮膚的早期雛形。

表1 傳統(tǒng)二維培養(yǎng)、三維培養(yǎng)和體內(nèi)環(huán)境對(duì)角朊細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

人體皮膚的真皮來源于中胚層，與外界隔離且有血管組織，細(xì)胞外液豐富；表皮來源于外胚層，暴露于干燥的外界環(huán)境且無血管組織，細(xì)胞連接緊密。為使KC的生長環(huán)境更接近人體正常生理狀態(tài)，人們進(jìn)一步探索出氣-液界面培養(yǎng)法，借助氣-液界面使3D培養(yǎng)KC最大程度地接近正常人體皮膚[8]。操作時(shí)在培養(yǎng)皿內(nèi)加上一層鋪墊，鋪墊可以是動(dòng)物皮膚真皮組織，生物水化劑膠體，生物纖維片，膠原蛋白膜，有機(jī)尼龍網(wǎng)，或膠原蛋白與有機(jī)尼龍網(wǎng)的貼合物。對(duì)鋪墊物先進(jìn)行浸泡性培養(yǎng)，然后再將皮膚KC接種其上，加入的培養(yǎng)液不超過鋪墊水平，細(xì)胞通過鋪墊吸收營養(yǎng)。KC在接種一定時(shí)間后，將鋪墊物升到氣-液面繼續(xù)培養(yǎng)，在這種環(huán)境下，鋪墊物始終暴露于類似細(xì)胞外液環(huán)境下，而表層KC暴露于氣-液界面之間，此環(huán)境有助于KC完成終末分化并形成多層細(xì)胞，從上層細(xì)胞到底層細(xì)胞含有分布不等的角蛋白[9，10]。氣-液界面培養(yǎng)法培養(yǎng)KC可生長出多層類似正常皮膚的表皮細(xì)胞層次。檢測(cè)某些生化指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，其與正常皮膚非常相近，如脂類物質(zhì)的合成，具有對(duì)水的屏障功能[11]。

隨著真皮組織替代物培養(yǎng)材料的不斷革新，近年來人們開始采用各類納米級(jí)高分子蛋白質(zhì)支架和降解材料來包被和模擬真皮組織成分，并且可以添加各種促進(jìn)KC增殖和分化的成分到納米支架內(nèi)，調(diào)控KC生長使其處于不同細(xì)胞周期和代謝狀態(tài)[12]。此外，人們也選用可降解性材料作為真皮組織替代物進(jìn)行KC的3D培養(yǎng)之前的包被，這些可降解生物材料可在有限的空間內(nèi)最大程度地培養(yǎng)KC并有助收集細(xì)胞過程中的純化和提取，且不影響細(xì)胞的活力和增殖特性[13]。

當(dāng)前，KC的3D培養(yǎng)變得更加便捷，一些商業(yè)化3D培養(yǎng)產(chǎn)品在生產(chǎn)和制備過程中已包被成各種基質(zhì)蛋白，及其他一些常用的細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)，包括Ⅰ型膠原、Ⅳ型膠原、層粘連蛋白、纖維粘連蛋白、多聚賴氨酸、Matrigel等[14]，并已實(shí)現(xiàn)了在3D培養(yǎng)產(chǎn)品內(nèi)對(duì)KC的培養(yǎng)和皮膚表皮層的構(gòu)建[15]。因此法便捷、安全，可靠，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)能更貼近體內(nèi)環(huán)境，當(dāng)前已成為3D培養(yǎng)KC的首選。

3 皮膚角朊細(xì)胞3D培養(yǎng)常用模式介紹

3D細(xì)胞培養(yǎng)是將細(xì)胞種植在細(xì)胞外基質(zhì)或細(xì)胞外基質(zhì)替代物所構(gòu)建的立體培養(yǎng)體系內(nèi)，培養(yǎng)體系內(nèi)網(wǎng)眼狀細(xì)胞外基質(zhì)成分為細(xì)胞生長構(gòu)建出三維結(jié)構(gòu)支架，使細(xì)胞能在該立體空間結(jié)構(gòu)內(nèi)增殖、遷移、分化[16，17]，即采用立體結(jié)構(gòu)來模擬細(xì)胞生長的體內(nèi)環(huán)境。皮膚組織KC的3D培養(yǎng)突出的優(yōu)勢(shì)在于細(xì)胞外基質(zhì)或細(xì)胞外基質(zhì)替代物本身為KC的貼壁提供了理想環(huán)境。無論是來自原代細(xì)胞還是細(xì)胞系，KC在體外環(huán)境貼壁性差，細(xì)胞活力低，增殖緩慢，傳統(tǒng)二維培養(yǎng)方法需要采用各種手段先促進(jìn)KC貼壁才能進(jìn)一步生長，例如在二維細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基內(nèi)添加各種生物成分，或采用射線照射滅活的3T3成纖維細(xì)胞為飼養(yǎng)層，以及鼠尾膠涂層技術(shù)，為KC提供貼壁環(huán)境[1,18]。而在3D細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)，其存在的細(xì)胞外基質(zhì)本身就是KC貼壁和生長的物質(zhì)基礎(chǔ)，KC能夠在更接近體內(nèi)真皮組織環(huán)境下快速貼壁。該技術(shù)是一種在形態(tài)上仿生人體皮膚結(jié)構(gòu)，并在立體層面構(gòu)建和培養(yǎng)擁有數(shù)層表皮KC的培養(yǎng)方法。

當(dāng)前，3D培養(yǎng)體系種類繁多。按培養(yǎng)體系的外觀結(jié)構(gòu)可以分為培養(yǎng)板和細(xì)胞小室兩類(圖1)。培養(yǎng)板上培養(yǎng)的細(xì)胞通常在細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)建的支架上方生長，細(xì)胞只接受來自培養(yǎng)體系上部的營養(yǎng)，適于短期培養(yǎng)細(xì)胞；細(xì)胞小室是目前最常用的3D培養(yǎng)體系，是在培養(yǎng)板基礎(chǔ)上加裝了小室(chamber)以方便懸掛培養(yǎng)，支架內(nèi)的細(xì)胞可在兩個(gè)方向接受營養(yǎng)，方便更換下部的培養(yǎng)板從而使實(shí)驗(yàn)用途增大，可用于細(xì)胞在氣-液交界面上進(jìn)行培養(yǎng)和共培養(yǎng)研究，適于長期細(xì)胞培養(yǎng)和研究。作為廣泛應(yīng)用的3D培養(yǎng)體系，細(xì)胞小室按體系內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)支架與培養(yǎng)基之間的毗鄰關(guān)系分為氣-液交界3D培養(yǎng)，常規(guī)3D培養(yǎng)和兩種培養(yǎng)基3D培養(yǎng)三種方式(圖2)。對(duì)于氣-液交界3D培養(yǎng)，細(xì)胞外基質(zhì)支架的底部與培養(yǎng)基接觸，基質(zhì)借助虹吸作用吸收培養(yǎng)基，營養(yǎng)其內(nèi)細(xì)胞并使細(xì)胞在氣-液之間生長。該培養(yǎng)方式主要用于各種上皮細(xì)胞(包括皮膚KC)的培養(yǎng)，由于處于氣-液之間，KC在增殖、移行和分化過程中上部KC可出現(xiàn)角化現(xiàn)象，并構(gòu)成了表皮組織的外表面，進(jìn)一步模擬和構(gòu)建出其下KC生長的體內(nèi)環(huán)境；對(duì)于常規(guī)3D培養(yǎng)，培養(yǎng)板和小室內(nèi)培養(yǎng)基相通，基質(zhì)支架和其內(nèi)生長的細(xì)胞浸沒于培養(yǎng)基內(nèi)。對(duì)于KC培養(yǎng)而言，該方法適用于長期大規(guī)模培養(yǎng)以快速擴(kuò)增細(xì)胞數(shù)量，而傳統(tǒng)二維細(xì)胞培養(yǎng)所從事的實(shí)驗(yàn)研究，該方法也可實(shí)現(xiàn)且兩者之間沒有差異；對(duì)于兩種培養(yǎng)基3D培養(yǎng)，培養(yǎng)板和小室內(nèi)的培養(yǎng)基不相通，基質(zhì)支架內(nèi)生長的細(xì)胞可以浸沒于兩種不同的培養(yǎng)基，該方式適于檢測(cè)不同條件下藥物分子或細(xì)胞因子通透分析和評(píng)定。

3D培養(yǎng)模式的多樣化為不同層面研究提供了條件。近年來，人們借助3D細(xì)胞培養(yǎng)模型，結(jié)合不同的3D培養(yǎng)方式以及所培養(yǎng)細(xì)胞的種類，開發(fā)出細(xì)胞共培養(yǎng)技術(shù)并將單純的3D細(xì)胞培養(yǎng)功能進(jìn)一步擴(kuò)展，實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞不同生物學(xué)過程和功能的分析和檢測(cè)。以KC為例，研究者可在細(xì)胞外基質(zhì)支架內(nèi)的不同層面培養(yǎng)不同類型的細(xì)胞，模擬多種細(xì)胞構(gòu)建和優(yōu)化表皮和皮膚符合組織結(jié)構(gòu)的可行性(圖3A和B)，檢測(cè)不同培養(yǎng)基、藥物分子，細(xì)胞因子和分泌化學(xué)因子對(duì)KC的作用，和對(duì)細(xì)胞信號(hào)通路的影響和干擾情況，以及蛋白質(zhì)組學(xué)研究，檢測(cè)不同類型的細(xì)胞對(duì)KC的影響和表型轉(zhuǎn)化情況(圖3C和D)，研究KC在不同細(xì)胞間穿透和遷移能力，以及在“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”中的單一生物學(xué)效果或作用(圖3E和F)。

圖1 3D培養(yǎng)板和細(xì)胞小室的剖面圖。培養(yǎng)板僅接受來自培養(yǎng)體系上部營養(yǎng)(箭頭)；細(xì)胞小室因懸掛培養(yǎng)可以在2個(gè)方向接受營養(yǎng)(箭頭) 圖2 細(xì)胞小室的不同培養(yǎng)方式剖面圖。藍(lán)色顯示小室內(nèi)與培養(yǎng)板內(nèi)不同類型的培養(yǎng)基 圖3 3D細(xì)胞共培養(yǎng)的模式和類別。共培養(yǎng)模式的多樣化使人們研究不同生物學(xué)過程和功能成為可能。粉色示培養(yǎng)基，紅色和藍(lán)色分別示不同類型的細(xì)胞

4 皮膚角朊細(xì)胞在3D培養(yǎng)中具備的優(yōu)勢(shì)

3D細(xì)胞培養(yǎng)是以細(xì)胞外基質(zhì)蛋白為生長支架，使細(xì)胞在保證活力和增殖能力的基礎(chǔ)上，迅速貼壁生長并能夠分化產(chǎn)生一定的三維組織特異性結(jié)構(gòu)[19，20]。該細(xì)胞外基質(zhì)支架所創(chuàng)建或營造的細(xì)胞生長環(huán)境，因可以最大程度地模擬體內(nèi)環(huán)境保證了KC體內(nèi)生長時(shí)所具備的形態(tài)和表型特征，相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和結(jié)果更能真實(shí)反應(yīng)出KC在體內(nèi)環(huán)境下某一生物學(xué)過程中的生物學(xué)效果或作用。

皮膚KC的3D培養(yǎng)有助于了解在正常和病理?xiàng)l件下組織修復(fù)時(shí)“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”過程中的單一生物學(xué)過程。早期的“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”在傷口愈合(特別是真皮收縮過程)中更是起到至關(guān)重要的作用。表皮層的KC及其前體細(xì)胞在創(chuàng)傷后因處于應(yīng)激狀態(tài)，在較短時(shí)間內(nèi)發(fā)生表皮-真皮之間的改變，KC向棘細(xì)胞層和真皮層移行并發(fā)生表型轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的KC在功能上具備真皮內(nèi)成纖維細(xì)胞的特點(diǎn)，形成“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”并分泌產(chǎn)生表皮層內(nèi)的膠原，該過程不僅介導(dǎo)了表皮祖細(xì)胞的增殖和分化，也激活了其后的組織重塑。借助3D細(xì)胞培養(yǎng)，可有效排除復(fù)雜體內(nèi)環(huán)境因素的干擾，借助不同類別的3D細(xì)胞共培養(yǎng)模式(圖3)，可直接演示“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”單一過程中的表型和分子學(xué)改變情況，以及單一條件或因素對(duì)該過程的影響，也有助于闡明正常和病理?xiàng)l件下KC的結(jié)構(gòu)和功能之間的改變情況和相互關(guān)系。

皮膚KC的3D培養(yǎng)有助于在體外環(huán)境下了解KC之間，KC與細(xì)胞外基質(zhì)和生長因子，KC表面受體和配體之間的關(guān)系。KC的3D培養(yǎng)不但促進(jìn)了細(xì)胞本身的貼壁性，其模擬的體內(nèi)細(xì)胞生長環(huán)境保證了細(xì)胞與培養(yǎng)環(huán)境之間的相互作用，因此，該培養(yǎng)體系有助于在體外環(huán)境下研究以KC為中心的相關(guān)細(xì)胞學(xué)過程、大分子蛋白與KC之間的相互作用。此外，對(duì)靶分子和下游蛋白功能的描述，可在體外環(huán)境下先進(jìn)行基因或蛋白質(zhì)修飾(借助分子雜交、小RNA干擾技術(shù)或轉(zhuǎn)基因手段)，進(jìn)而進(jìn)入3D培養(yǎng)體系內(nèi)，在不同培養(yǎng)階段清晰觀測(cè)細(xì)胞形態(tài)和功能改變情況，確認(rèn)生物學(xué)功能的變化，彌補(bǔ)在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究中無法實(shí)現(xiàn)的形態(tài)觀測(cè)研究。以皮膚KC的3D培養(yǎng)為例，上述對(duì)單一生物學(xué)過程中分子功能的研究，不但有助于探索不同修復(fù)過程的分子學(xué)變化，尋找創(chuàng)傷修復(fù)的分子學(xué)開關(guān)，也可進(jìn)一步上溯到表皮祖細(xì)胞的研究，有助于確認(rèn)表皮祖細(xì)胞不同亞型，不同發(fā)育階段分子標(biāo)志物的形成情況，也可有助于探索表皮祖細(xì)胞向短暫擴(kuò)增細(xì)胞、KC和終末角化細(xì)胞分化的分子學(xué)依據(jù)，以及用于組織工程學(xué)模擬理想皮膚結(jié)構(gòu)的相關(guān)研究。

5 皮膚角朊細(xì)胞在3D培養(yǎng)用于治療的微創(chuàng)前景和價(jià)值

如前所述，皮膚KC的3D培養(yǎng)，提供了一種有效培養(yǎng)KC的技術(shù)，并使其在生長傳代的同時(shí)能保持自然形態(tài)和功能，以及良好的體內(nèi)生物學(xué)性狀特征，這為皮膚嚴(yán)重?fù)p傷，包括大范圍撕脫傷、皮膚嚴(yán)重?zé)齻吞悄虿∑つw組織的缺損，提供了可在短期內(nèi)迅速擴(kuò)增、具有較高質(zhì)量的表皮細(xì)胞來源，而充足的KC和更加貼近表皮底層環(huán)境的KC是保證創(chuàng)傷修復(fù)過程中快速“再上皮化”的關(guān)鍵因素。

此外，過去人們多采用動(dòng)物皮膚組織來模擬和制備人工皮膚。由于表皮層內(nèi)無血管，其代謝主要依賴來自真皮的細(xì)胞外基質(zhì)，但是在其移植和生長過程中，宿主血管需要為快速增值和移行的KC提供大量的營養(yǎng)，尤其是處于“表皮舌”部位的KC，通常會(huì)與宿主真皮血管直接接觸，這加劇了移植物排斥反應(yīng)。采用皮膚KC的3D培養(yǎng)，能根據(jù)受損表皮和真皮的厚度，調(diào)控3D培養(yǎng)下的KC的厚度，是移植皮膚更貼近正常皮膚的形態(tài)特征；此外，可采用人體或患病個(gè)體的KC進(jìn)行3D培養(yǎng)，這在一定程度上較少了修復(fù)過程中的免疫排斥，使修復(fù)過程更加迅速，修復(fù)后的組織外觀更加美觀。同時(shí)，該方法也有助于規(guī)避動(dòng)物皮膚治療燒傷、燙傷過程中的倫理學(xué)問題。

不僅如此，利用3D細(xì)胞培養(yǎng)模式的可調(diào)控性，人們?cè)谶M(jìn)行皮膚KC的3D培養(yǎng)過程中可適時(shí)在培養(yǎng)體系內(nèi)添加細(xì)胞因子、分子藥物等，也可以通過與納米支架的聯(lián)合應(yīng)用來改變培養(yǎng)基的成分、質(zhì)地和組織結(jié)構(gòu)，從而最大程度地優(yōu)化皮膚組織修復(fù)中的“上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化”過程，使修復(fù)或再生的皮膚組織具有輕微的瘢痕組織結(jié)構(gòu)和良好的彈性、韌度，最大程度地實(shí)現(xiàn)“無瘢痕修復(fù)”治療的目的。

6 展望

3D細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)作為二維細(xì)胞培養(yǎng)與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)之間的橋梁，具有細(xì)胞培養(yǎng)的形態(tài)學(xué)直觀性及培養(yǎng)條件可控性的優(yōu)勢(shì)，該培養(yǎng)技術(shù)正越來越得到廣泛接受和使用。對(duì)于皮膚KC的3D培養(yǎng)技術(shù)，其無論是在研究表皮發(fā)育、模擬和優(yōu)化人工皮膚，還是在皮膚移植領(lǐng)域，均可呈現(xiàn)傳統(tǒng)二維細(xì)胞培養(yǎng)所不具備的優(yōu)勢(shì)。筆者認(rèn)為，該技術(shù)用于細(xì)胞培養(yǎng)僅僅是其部分功能，與其他綜合技術(shù)的廣泛結(jié)合和相互滲透(包括再生醫(yī)學(xué)、干細(xì)胞技術(shù)和材料科學(xué))并有效促進(jìn)3D培養(yǎng)體系最大程度接近和模擬人體組織和生化環(huán)境，才能進(jìn)一步拓寬該技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用，而該技術(shù)的不斷優(yōu)化和成熟，并最終與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的有效結(jié)合將更好地造福于病患。

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(修回日期：2014-10-30)

(責(zé)任編輯：王惠群)

哈爾濱市科技創(chuàng)新人才研究專項(xiàng)(青年后備人才)基金項(xiàng)目(2014RFQGJ158)

R329.2+8

A

1009-6604(2015)02-0185-05

10.3969/j.issn.1009-6604.2015.02.028

2014-07-23)

**通訊作者，E-mail：kkywong@hku.hk