共軛亞油酸對蛋黃脂肪酸組成及其抗氧化特性的影響

孫曉軍　李霞　劉雪蘭

摘要：將40周齡海蘭白蛋雞480只平均分為4組，分別飼喂添加0、0.5%、1.0%和2.0% CLA的日糧，研究日糧不同CLA水平對蛋黃脂肪酸組成及蛋黃抗氧化功能的影響。結果表明：隨著日糧CLA含量的增加，蛋黃中飽和脂肪酸含量顯著增加（P<0.05），單一不飽和脂肪酸含量顯著下降（P<0.05），蛋黃中的共軛亞油酸含量呈線性增加的趨勢（P<0.05）；蛋黃的各抗氧化指標發(fā)生顯著變化，隨著CLA添加量的增加，T-SOD酶含量線性增加， MDA的含量顯著低于對照組（P<0.05），谷胱甘肽過氧化物酶活性顯著高于對照組（P<0.05）。因此，以蛋黃中CLA含量和抗氧化性強弱為評價指標時，CLA的適宜添加量為2.0%。

關鍵詞：共軛亞油酸；蛋黃；脂肪酸；抗氧化性

中圖分類號：S816.71文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）12-0103-05

共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是一組亞油酸的異構體，國內外研究證實，它具有抗癌、預防心血管疾病等廣泛的生理功能，因而深受人們青睞。但是其在天然食品中含量極低，不能滿足人的生理需求，因此，動物營養(yǎng)學界開展起將CLA富集到畜禽產品中的研究，其中，將CLA富集到雞蛋中的研究居多，這些研究多集中在CLA在蛋黃中的富集規(guī)律及CLA對蛋雞生產性能和蛋品質的影響上[1～9]，對雞蛋中其它成分如卵磷脂的影響還鮮有報道。另外，由于CLA是一種強抗氧化劑，富集到雞蛋中對蛋黃的抗氧化功能研究尚未見報道。本試驗通過在蛋雞日糧中添加不同劑量的CLA，研究其對蛋黃中脂肪酸、膽固醇、卵磷脂、SOD、MDA、T-SOD活性、谷胱甘肽過氧化物酶和總抗氧化能力的影響，旨在為CLA的脂類代謝調節(jié)功能和抗氧化功能提供試驗依據，為CLA雞蛋的開發(fā)和食用提供科學依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

共軛亞油酸油，CLA含量為80.91%，順-9，反-11 39.59%，反-10，順-12 41.11%，購自蓬萊市海洋生物有限公司，批號為10005，物理性狀為淡黃色油狀液體。

1.2試驗動物

采用單因素完全隨機設計，按體重、周齡、健康狀況及遺傳特性一致原則將40周齡海蘭白蛋雞480只分為4組，每組3個重復，每個重復40只。試驗期8周。

1.3試驗管理及試驗日程

試驗在山東省農業(yè)科學院家禽研究所試驗雞舍進行。試驗時間為2013年3月1日～5月9日，其中2013年3月1～14日為預試期，各組試驗雞根據需要調整，使組間產蛋率差異不顯著。調整結束后進入正式試驗期，正式試驗期為2013年3月15日～5月9日，共56 d。以2層階梯式金屬籠飼養(yǎng)產蛋雞，每籠1只。按常規(guī)方法飼喂管理，乳頭式飲水器，自由采食和飲水。雞舍溫度15～28℃，室內縱向機械通風，自然光照，早晚輔以人工光照，恒定光照時間為16 h/d，光照強度14 lx。蛋雞日飼喂2次，分別在8∶00和17∶00。每日記錄雞舍溫度和氣溫。

1.4試驗設計與飼糧

試驗飼糧按照中華人民共和國農業(yè)行業(yè)標準（2004）進行配制。采用玉米-豆粕-棉粕型飼糧，設4個CLA油添加水平，分別為0（對照組）、0.5%、1.0%、2.0%。為使各組飼糧的能值相同，本試驗采用重量替代法，在不同的飼糧處理中，用同樣重量的豆油代替等量的CLA油，即在基礎飼糧的基礎上，對照組豆油含量2.0%，CLA油含量0。飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。飼糧每周配制1次，4℃貯藏。

1.5樣品采集

收集試驗最后一天的雞蛋，貼好標簽，4℃厭氧保存。

1.6測定指標與方法

1.6.1脂肪酸脂肪酸的測定方法采用高效液相色譜法，委托農業(yè)部飼料工業(yè)中心測定。

1.6.2T-SOD活性采用黃嘌呤氧化法，752可見光分光光度計測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.6.3谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力化學比色法，752可見光分光光度計測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.6.4丙二醛（MDA）采用硫代巴比妥酸（TBA） 法測定，752可見光分光光度計測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.7數據統計分析

試驗數據用SPSS13.0軟件包中的單因素試驗設計方差分析過程（ANOVA）進行，多重比較采用Duncan氏法進行，以P<0.05（差異顯著）作為差異顯著性判斷標準。

2結果與分析

2.1日糧CLA添加量對蛋黃脂肪酸組成的影響

蛋黃脂肪酸組成見表2。隨著日糧CLA濃度的增加，飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸的含量逐漸增加，單不飽和脂肪酸的含量逐漸降低，CLA的添加量為1.0%時這種變化既達到顯著水平。除了木質素酸（C24∶0）外，幾乎所有的飽和脂肪酸的含量都因日糧補充共軛亞油酸而發(fā)生了明顯改變，其中當蛋雞日糧添加2.0%的共軛亞油酸時，飽和脂肪酸中的月桂酸（C12∶0）、肉豆蔻酸（C14∶0）、棕櫚酸（C16∶0）、硬脂酸（C18∶0）、十七碳酸和花生酸（C20∶0）顯著增加，而山崳酸（C22∶0）含量顯著下降（P<0.05）。蛋黃中幾乎所有的多不飽和脂肪酸（二十碳五烯酸除外）均發(fā)生了一定的變化，但變化趨勢不同。隨著日糧CLA含量的增加，十八碳二烯酸和二十碳二烯酸的含量明顯增加，而亞麻酸（C18∶3）、花生四烯酸（C20∶4）、二十二碳四烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的含量顯著降低（P<0.05）。蛋黃中CLA含量顯著增加（P<0.05）。

如表2所示，蛋黃中的c-9，t-11和t-10，c-12異構體分別占66%～70%和29%～34%，說明CLA異構體是選擇性地沉積在蛋黃中的。Raes（2002）等[15]報道，c-9， t-11的沉積效率高于t-10， c-12異構體，與我們的研究結果一致，然而其原因尚不清楚。

2.2不同CLA添加水平對蛋黃抗氧化能力的影響

表3結果表明，隨著日糧CLA含量的增加，蛋黃中SOD酶活性線性增加，影響顯著（P<0.05）；MDA含量逐漸降低，當日糧添加2%的CLA時，MDA的含量顯著低于對照組（P<0.05）；隨著日糧CLA含量增加，蛋黃中谷胱甘肽過氧化物酶活性逐漸增加，當日糧中CLA添加量為2.0%時，其活性顯著高于對照組（P<0.05）。同類的研究尚未見資料報道，其機理可能是CLA具有1個共軛雙鍵，能淬滅單線態(tài)氧，消除氧自由基，是脂類過氧化物反應的斷鏈抗氧化劑。

3小結

3.1從表2可以看出，隨日糧共軛亞油酸含量的增加，蛋黃中飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸逐漸增加，而單不飽和脂肪酸下降。Ahn等（1999）[11]也得出了同樣的結論，這表明，共軛亞油酸確實有改變飽和脂肪酸和單不飽和脂肪酸比例的生理效應。這是由于CLA抑制了Δ9-去飽和酶活性，Δ9-去飽和酶是飽和脂肪酸轉化為相應的單不飽和脂肪酸的關鍵酶，從而導致飽和脂肪酸增加，不飽和脂肪酸減少[12]；蛋黃中多不飽和脂肪酸的增加則是由于CLA抑制了Δ-6共軛亞油酸脂肪酸脫氫酶的活性，Belury等[13]研究發(fā)現，CLA是Δ-6脂肪酸脫氫酶抑制劑，而Δ-6脂肪酸脫氫酶是亞麻酸轉化為C20∶5系列脂肪酸的關鍵酶，由于CLA抑制了Δ-6去飽和酶，使C18∶3脂肪酸轉換為C20∶5脂肪酸時受阻，導致多不飽和脂肪酸的含量增加。日糧CLA降低了蛋黃中的花生四烯酸，這與Cherian（2002）等[14]研究結果相一致，研究者普遍認為有兩種可能機制：一是Δ-6去飽和酶（亞油酸和亞麻酸轉化為花生四烯酸的限速酶）被共軛亞油酸、亞油酸和亞麻酸競爭性抑制；另一個是日糧中的亞油酸和亞麻酸的含量均較低，因為CLA油中亞油酸及亞麻酸含量比大豆油低很多，當共軛亞油酸油代替豆油，日糧的亞油酸和亞麻酸降低，而亞油酸和亞麻酸是花生四烯酸的合成前體，因此蛋黃中花生四烯酸的含量降低。

3.2關于蛋黃SOD的研究報道較少，王俊卿等（2002）[16]報道，光合細菌能使雞蛋中SOD酶活性大大提高。郝志明等（2005）[17]在蛋黃和蛋清中也都測到了SOD。目前，關于共軛亞油酸對SOD酶的影響還未見資料報道。在本研究中，日糧添加共軛亞油酸對蛋黃中SOD活性有影響，隨著添加量的增加，酶活性線性增加，其機理尚不清楚，可能是共軛油酸對SOD酶基因的表達有影響。

3.3CLA對蛋黃中MDA含量的影響尚未見報道，但CLA能降血清和肝臟中的MDA含量和具有抗氧化性的功能時有報道。張旭輝等（2007）[18]研究發(fā)現，鵝日糧中添加CLA后，其血清和肝臟中MDA含量比對照組有顯著性降低；Livisay等（2000）[19]也發(fā)現CLA可以增強大鼠肝臟微粒體和骨骼肌勻漿的氧化穩(wěn)定性，降低MDA的生成，以上研究與本試驗結論相同。目前，CLA對機體抗氧化防御系統的作用還不確切。大量研究是在體外條件下進行的，體內試驗報道還很缺乏，且體外試驗常常不能反映體內的條件和生理過程，往往與體內試驗差異很大。關于CLA是否通過作為抗氧化劑或氧化強化劑發(fā)揮作用，至今仍存在分歧。Kim等（2002）[20]報道CLA可以降低大鼠脂質過氧化物，增加氧化穩(wěn)定性。CLA有助于增強機體清除自由基的能力，至于其是否具有直接清除自由基作用，以及其提高抗氧化酶活力的量效關系、作用機理和有效活性成分等還有待于進一步研究。

3.4日糧中添加共軛亞油酸改變了蛋黃脂肪酸的組成，使得飽和脂肪酸含量增加，單一不飽和脂肪酸含量下降；隨著日糧共軛亞油酸添加量的增加，蛋黃中共軛亞油酸含量呈線性增加趨勢；日糧添加共軛亞油酸還可以提高蛋黃抗氧化性。因此食用共軛亞油酸雞蛋可以在不改變人們飲食習慣的情況下，既能補充共軛亞油酸，提高人體抗心血管疾病和腫瘤的能力，增強肌體免疫力，同時又能增強肌體的抗衰老能力，延緩身體各器官老化速度，對促進身體健康，提高國民身體素質具有深遠意義。

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