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    6—BA濃度對紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)的影響

    2015-03-10 11:14:43王豐華管遠(yuǎn)清徐榕雪于立芝
    山東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年12期
    關(guān)鍵詞:外植體生長量無菌

    王豐華 管遠(yuǎn)清 徐榕雪 于立芝

    摘要:以紅色大花月季不帶芽莖段為外植體,研究了不同濃度6-BA對紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明,適宜濃度的6-BA對愈傷組織的誘導(dǎo)率、生長量和產(chǎn)生速率都有明顯的促進(jìn)作用;6-BA濃度為1.5 mg/L時,愈傷組織的誘導(dǎo)率和生長量均達(dá)到最高,分別為94%和0.9706 g/瓶;紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA。

    關(guān)鍵詞:6-BA濃度;紅色大花月季;組織培養(yǎng);愈傷組織誘導(dǎo)

    中圖分類號:S685.12文獻(xiàn)標(biāo)識號:A文章編號:1001-4942(2014)12-0054-03

    月季是薔薇科多年生木本花卉,栽培品種很多,為世界四大切花之一,也是我國傳統(tǒng)名花[1]。紅色大花月季以色彩艷麗、花姿優(yōu)美廣泛應(yīng)用于園林綠化中。月季通常采用扦插的方法進(jìn)行繁殖,其繁殖速度受到一定限制[2~6]。植物組織培養(yǎng)技術(shù)具有周期短、繁殖率高、整體生產(chǎn)成本低等特點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于植物快繁和篩選優(yōu)良種質(zhì)[7~9]。愈傷組織誘導(dǎo)是植物組織培養(yǎng)技術(shù)的第一個環(huán)節(jié),本試驗(yàn)以紅色大花月季的莖段為外植體,研究6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)濃度對愈傷組織誘導(dǎo)的影響,以期為紅色大花月季組織培養(yǎng)中合理使用6-BA誘導(dǎo)愈傷組織提供科學(xué)依據(jù)。

    1材料與方法

    1.1試驗(yàn)材料

    外植體采用紅色大花月季生長健壯且無病蟲害的當(dāng)年生枝條,剝?nèi)ト~片及附在莖上的葉柄及皮刺,用小毛刷蘸中性洗衣液將其莖段刷洗干凈,并用自來水沖洗1 h待用。

    1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    誘導(dǎo)培養(yǎng)基均采用MS基本培養(yǎng)基,添加8 g/L瓊脂、30 g/L蔗糖,同時添加相同濃度的NAA及不同濃度的6-BA,pH值為5.8,高溫滅菌。試驗(yàn)共設(shè)6組處理(見表1),每組處理接種10瓶,每瓶接種5個外植體,共50個外植體[10]。

    1.3試驗(yàn)方法

    2013年10月1日,在超凈工作臺無菌環(huán)境中,將月季枝條中段飽滿且無腋芽的部分剪成1 cm長的小段。無菌水沖洗3次后,先用75%的酒精表面消毒30 s,再用1 g/L的升汞溶液消毒8~10min,無菌水沖洗5次,用無菌濾紙吸去表面水分,接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)箱光照強(qiáng)度為3 000 lx,光照時間10~12 h/d,培養(yǎng)箱干球溫度14.8℃,濕球溫度24.5℃。接種后持續(xù)觀察愈傷組織萌動情況。

    1.4數(shù)據(jù)記錄及處理

    2013年10月10日開始定期觀察并記錄愈傷組織的數(shù)量及生長狀態(tài)等。2013年11月26日,每組處理隨機(jī)挑選3瓶對愈傷組織的生長量進(jìn)行調(diào)查。

    愈傷組織的誘導(dǎo)率(%)=每組處理中誘導(dǎo)出的愈傷組織數(shù)量/每組處理中外植體總數(shù)×100[11]

    愈傷組織的生長量=每組處理中3瓶愈傷組織生長量總和/3采用Microsoft Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

    2結(jié)果與分析

    2.1不同濃度6-BA對紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

    由表2可以看出,不同處理對紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)率的影響不同。T4處理誘導(dǎo)率最高為94%;其次是T3、T5、T6處理,誘導(dǎo)率均為92%;T2處理的誘導(dǎo)率為88%;T1處理誘導(dǎo)率最低,僅為28%。

    紅色大花月季愈傷組織的誘導(dǎo)率與6-BA濃度的二次模擬函數(shù)為:

    式中,x表示6-BA濃度,y表示紅色大花月季愈傷組織的誘導(dǎo)率,其相關(guān)系數(shù)R=0.9159>0.9,相關(guān)性顯著。6-BA濃度與紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)率的模擬曲線見圖1。

    2.2不同濃度6-BA對紅色大花月季愈傷組織產(chǎn)生速率的影響

    紅色大花月季愈傷組織產(chǎn)生速率曲線見圖2,添加6-BA的所有處理(T2、T3、T4、T5、T6)愈傷組織的產(chǎn)生速率顯著高于未添加的處理(T1),但添加6-BA的各處理之間愈傷組織的產(chǎn)生速率則沒有明顯差異。

    2.3不同濃度6-BA對紅色大花月季愈傷組織生長量及生長狀態(tài)的影響

    由表3可知,T4處理的紅色大花月季愈傷組織生長量最高,為0.9706 g/瓶,;T1處理的愈傷組織生長量最低,為0.0015 g/瓶;各處理愈傷組織生長量由大到小的順序?yàn)門4>T5>T3>T6>T2>T1。

    式中,x表示6-BA濃度,y表示紅色大花月季愈傷組織的生長量,其中相關(guān)系數(shù)R=0.9832>0.9,相關(guān)性顯著。6-BA濃度與紅色大花月季愈傷組織生長量的模擬曲線見圖3。

    3結(jié)論

    本研究結(jié)果表明,6-BA在紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)方面發(fā)揮著重要作用,適宜濃度的6-BA對愈傷組織誘導(dǎo)率、生長量和產(chǎn)生速率都有明顯的促進(jìn)作用。

    對愈傷組織誘導(dǎo)率的影響表現(xiàn)為,紅色大花月季愈傷組織的誘導(dǎo)率隨6-BA濃度的增大呈現(xiàn)先增長后下降的趨勢,當(dāng)6-BA濃度為1.5 mg/L時,愈傷組織的誘導(dǎo)率最高為94%。對愈傷組織生長量的影響表現(xiàn)為,當(dāng)6-BA濃度為1.5 mg/L時愈傷組織的生長量最高為0.9706 g/瓶。

    對愈傷組織產(chǎn)生速率的影響的表現(xiàn)為,添加6-BA的所有處理中愈傷組織的產(chǎn)生速率無明顯的差異,但都顯著高于未添加6-BA的處理。

    綜上所述,紅色大花月季愈傷組織誘導(dǎo)過程中,MS+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA為最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基,NAA和 6-BA兩種生長素共同作用的效果明顯優(yōu)于單一生長素處理。

    參考文獻(xiàn):

    [1]李倩中,譚國華,陳尚平.影響月季嫁接成活因子研究初報(bào)[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2003(3):114-115.

    [2]趙松峰.不同培養(yǎng)基及糖濃度對豐花月季葉愈傷組織誘導(dǎo)的影響[J].北方園藝,2009(4):56-58.

    [3]鄭玉梅,馬袆,劉青林.月季遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J].中國生物工程雜志,2003,23(2):79-82.

    [4]李美茹,李洪清,孫梓健,等.月季的組織培養(yǎng)和基因轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J].廣西植物,2003,23(3):243-249.

    [5]王麗勉,張啟翔,高亦珂.月季抗黑斑病的基因工程研究[J].中南林學(xué)院學(xué)報(bào),2003,23(5):92-95.

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    [9]王二強(qiáng),王占營,王曉暉,等.國內(nèi)外牡丹組織培養(yǎng)技術(shù)研究現(xiàn)狀[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技,2008(6):75-77.

    [10]陳雪,張金柱,潘兵兵,等.月季愈傷組織的誘導(dǎo)及植株再生[J].植物學(xué)報(bào),2011,46(5):569-574.

    [11]林婭,鄭玉梅,劉青林.影響月季愈傷組織誘導(dǎo)和分化的因素[J].分子植物育種,2006,4(2):223-227.

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