T-SPOT.TB和TST在結(jié)核診斷中的臨床意義

楊建蓉,楊 紅

(甘孜藏族自治州人民醫(yī)院傳染科, 四川 甘孜 626000)

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T-SPOT.TB和TST在結(jié)核診斷中的臨床意義

楊建蓉※,楊 紅

(甘孜藏族自治州人民醫(yī)院傳染科, 四川 甘孜 626000)

目的 探討結(jié)核T細胞斑點檢測(T-SPOT.TB)和皮膚結(jié)核菌素試驗(TST)在結(jié)核診斷中的臨床意義。方法 選取甘孜藏族自治州人民醫(yī)院2012年4月至2014年1月收治的99例結(jié)核病疑似患者為研究對象，分別對患者采取T-SPOT.TB試驗和TST進行檢查，比較兩種檢測方法的診斷效能以探討其臨床意義。結(jié)果 T-SPOT.TB的特異度為17.2%，靈敏度為80.8%，陽性預測值為81.2%，陰性預測值為89.4%，準確度為84.2%。TST的特異度為79.3%，靈敏度為39.0%，陽性預測值為72.7%，陰性預測值為79.3%，準確度為67.4%。結(jié)論 結(jié)核病應用T-SPOT.TB診斷的準確度較TST試驗更高，對結(jié)核病的診斷具有重要意義。

結(jié)核；結(jié)核T細胞斑點檢測；結(jié)核菌素皮膚試驗

我國是世界上結(jié)核病發(fā)病率較高的國家之一，疫情極為復雜[1]。目前對于結(jié)核病的診斷主要有皮膚結(jié)核菌素試驗(tuberculin skin test，TST)、結(jié)核菌培養(yǎng)、結(jié)核抗體檢測以及結(jié)核T細胞斑點檢測(tuberculosis T cell spot detection，T-SPOT.TB)。結(jié)核菌培養(yǎng)是診斷結(jié)核病的金標準，但是其細菌培養(yǎng)速度慢，不能很好地滿足及時診斷的要求。結(jié)核抗體檢測的準確度雖然較其他方法高，但其因費用高、技術(shù)要求高等缺點不能廣泛推廣[2]。而T-SPOT.TB試驗診斷是以抗原特異性T細胞反應為理論基礎，價格經(jīng)濟，得到迅速推廣。為探討T-SPOT.TB和TST在結(jié)核診斷中的臨床意義，本研究選取結(jié)核病疑似患者進行研究，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年4月至2014年1月甘孜藏族自治州人民醫(yī)院傳染科收治的結(jié)核病疑似患者99例，男54例、女45例，年齡4～73 歲，平均(42±13)歲。最終共41例患者經(jīng)痰培養(yǎng)確診為結(jié)核病，其中包括肺結(jié)核22例，腎結(jié)核6例，結(jié)核性腹膜炎8例以及結(jié)核性腦膜炎5例，所有患者排除嚴重肝、腎功能疾病。

1.2 研究方法 99例患者均采取T-SPOT.TB試驗和TST進行檢查，并以細菌培養(yǎng)作為金標準。

1.2.1 TST試驗 抽取0.1 mL結(jié)核菌純蛋白衍生物注射液(成都生物制品研究所生產(chǎn)，批號：20120503)，于左側(cè)前臂內(nèi)側(cè)按孟都法[3]注射，使注射部位形成皮丘。72 h后觀察是否產(chǎn)生硬結(jié)以及測量硬結(jié)直徑。

1.2.2 T-SPOT.TB試驗 采用T-SPOT.TB試劑盒(上海復星科技有限公司生產(chǎn)，批號：20120708)進行檢測，操作按說明書進行：首先用肝素鈉抗凝管采集5 mL外周血常規(guī)分離，按密度梯度離心制備單個核細胞(離心半徑1 cm，7000 r/min離心10 min)，洗滌后去除內(nèi)源性γ干擾素。將所得樣品加入抗γ干擾素抗體平板中，每孔100 μL。同時在陽性對照孔中加入5 mg/L的植物血凝素5 μL，而陰性對照孔不加刺激素。實驗孔加蛋白培養(yǎng)濾液10和早期分泌靶性抗原6，并使其最終濃度達5 mg/L。取細胞懸液制備成1∶5細胞稀釋液并計數(shù)，加樣孵育16～20 h，培養(yǎng)完畢后立即洗板，分別加入檢測抗體和親和素各孵育1 h，顯色后再次洗板，晾干后在顯微鏡下進行斑點計數(shù)，記錄數(shù)據(jù)。

1.3 診斷標準

1.3.1 TST試驗診斷標準 ①直徑<5 mm者判定為陰性(-)；②直徑5～9 mm判定為弱陽性(+)；③直徑10～19 mm 判定為陽性(++)；④直徑>20 mm為強陽性(+++)。

1.3.2 T-SPOT.TB試驗診斷標準 陽性：①陰性對照斑點數(shù)0～5，且A或B孔斑點數(shù)-陰性斑點數(shù)≥6；②陰性對照斑點數(shù)≥6，A或B孔斑點數(shù)≥2倍陰性對照斑點數(shù)；陰性：A、B孔斑點數(shù)不符合陽性標準，但陽性對照反應良好。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。采用受試者工作特征曲線 (receiver operating characteristic curve，ROC曲線)對數(shù)據(jù)進行處理，比較兩種方法的診斷效能。

2 結(jié) 果

99例結(jié)核疑似患者中41例確診為結(jié)核病。T-SPOT.TB檢測的靈敏度遠高于TST，兩種檢測方法特異度相似，見表1、圖1。

表1 T-SPOT.TB和TST在結(jié)核診斷中診斷效能比較 (%)

T-SPOT.TB：結(jié)核T細胞斑點檢測;TST：結(jié)核菌素試驗

圖1 T-SPOT.TB、TST的受試者工作特征曲線圖 T-SPOT.TB：結(jié)核T細胞斑點檢測；TST：結(jié)核菌素試驗

3 討 論

自20世紀80年代以來，傳染病大多得到有效的控制，但結(jié)核病仍在不斷侵襲著人類的健康。據(jù)報道[3]，近年來結(jié)核病發(fā)病率不斷攀升，對人類的身體健康造成嚴重威脅。我國作為人口大國，同時也是結(jié)核病高發(fā)國家，每年死于結(jié)核病的患者高達13萬[3]。結(jié)核病的預防主要是早期發(fā)現(xiàn)、早期治療，使患者病死率降低。早期、有效地診斷結(jié)核病能有效控制疾病傳播，避免疾病擴散和發(fā)展。而結(jié)核病的誤診不僅可能延誤病情，也可能因激素類藥物的誤用導致病情進一步加重。

TST、抗酸染色、結(jié)核菌培養(yǎng)、結(jié)核抗體檢測以及T-SPOT.TB都是目前診斷結(jié)核病的主要途徑[4]。結(jié)核菌培養(yǎng)陽性是結(jié)核病確診的金標準，特異度較其他檢測方法高，但其靈敏度則遠不及結(jié)核抗體檢測等方法。同時結(jié)核菌培養(yǎng)一般需要2～5周，不能給臨床診斷提供及時、有效的細菌學證據(jù)?？顾崛旧菣z測結(jié)核病的一種重要方法，其通過檢測患者痰標本中的結(jié)核菌數(shù)來提示結(jié)核病，特異度較高，但該法需要患者痰液中的結(jié)核菌數(shù)達到一定數(shù)量才能顯示陽性，所以靈敏度較低。據(jù)曾春艷等[5]的研究指出，對91例結(jié)核患者痰液進行抗酸染色結(jié)核菌檢測，發(fā)現(xiàn)僅有18例顯示陽性，陽性率僅為19.78%。趙靜等[6]的研究也指出，抗酸染色對肺外結(jié)核尤其不敏感，陽性率僅為33.62%。近年來分子生物學診斷也逐漸應用到結(jié)核病的臨床診斷中，其主要通過聚合酶鏈反應試驗檢測結(jié)核菌核酸來提示是否感染結(jié)核菌，特異度和靈敏度都較為理想。但該試驗對技術(shù)和試驗條件要求較高，普通醫(yī)院難以滿足。同時其檢測費用較其他檢測手段高，可能增加患者經(jīng)濟負擔，這些都是導致其沒有得到廣泛應用的原因。

T-SPOT.TB是近年來才應用到臨床中的一種新的診斷手段。它是應用酶聯(lián)免疫法刺激T細胞分泌細胞因子γ干擾素顯色，通過計數(shù)致敏T淋巴細胞來檢驗是否感染結(jié)核菌。目前的報道都肯定了T-SPOT.TB檢驗的特異度和靈敏度[7]。對31例伴人類免疫缺陷病毒感染的結(jié)核病患者進行研究，發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)皮膚結(jié)核菌素試驗18例陽性，而T-SPOT.TB試驗27例陽性，陽性率相差29.3%，并且指出T-SPOT.TB不被患者機體免疫情況影響。劉國威等[9]的研究也發(fā)現(xiàn)，T-SPOT.TB的靈敏度和特異度分別為91.2%和87.5%，均遠高于其他檢驗方法。本研究結(jié)果顯示，T-SPOT.TB檢測的準確度高于TST，這與文獻[9]報道結(jié)果較為一致。本研究中，兩種檢測方法特異度與文獻報道并不一致，在高茜和杜黎明[10]的研究中，T-SPOT.TB的特異度較TST高14.9%，本研究認為這可能與本次研究樣本較小有關。

綜上所述，盡管目前T-SPOT.TB檢測法還不能有效鑒別潛伏感染和活動性結(jié)核病，部分存在斑點數(shù)重疊現(xiàn)象，但其在結(jié)核病診斷中的靈敏度和準確度較TST試驗更高，對結(jié)核病的診斷仍具有重要意義。

[1] 鄭春華,王立,金燕,等.結(jié)核感染T細胞斑點試驗診斷結(jié)核性胸腔積液的臨床分析[J].中華醫(yī)院感染學雜志, 2013, 23(16):4078-4080.

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[3] 儲新民, 孔建新.酶聯(lián)免疫斑點試驗診斷結(jié)核的敏感性和特異性研究[J].安徽醫(yī)科大學學報,2012,47(5):613-615.

[4] 謝希,陳進偉,高潔生,等.結(jié)核感染T細胞斑點試驗在結(jié)核診斷中的應用[J].臨床內(nèi)科雜志,2010，27(6):396-399.

[5] 曾春艷,張松旺,于長國.結(jié)核感染T細胞斑點試驗在腎結(jié)核診斷中的應用研究[J].中國人獸共患病學報, 2013,29(5):1199-1202.

[6] 趙靜,孟祥愛,孫方利,等.T-SPOT.TB試驗對某大學大學生結(jié)核桿菌潛伏感染隨訪研究[J].中華檢驗醫(yī)學雜志, 2012,35(8):750-752.

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[8] 杜巖青,馮爽,馮冉冉,等.T細胞斑點試驗技術(shù)在結(jié)核性胸膜炎診斷中的價值[J].檢驗醫(yī)學,2012,27(12):1070-1073.

[9] 劉國威,梅早仙,杜鐘珍.T-SPOT.TB 在結(jié)核病診斷中的應用價值[J].天津醫(yī)藥,2012,40(9):926-928.

[10] 高茜,杜黎明.T淋巴細胞斑點試驗在結(jié)核病診斷中的臨床應用[J].臨床肺科雜志,2012,17(12):2205-2207.

Clinical Value between T-SPOT.TB and TST in Diagnosis of Tuberculosis

YANGJian-rong,YANGHong.

(DepartmentofInfectiousDiseases,GanziPeople′sHospital,Ganzi626000,China)

Objective To investigate the clinical value between tuberculosis T cell spot detection (T-SPOT.TB) and tuberculin skin test(TST) in diagnosis of tuberculosis.Methods A total of 99 patients with suspected tuberculosis admitted in Ganzi People′s Hospital from Apr.2012 to Feb.2014 were chosen as the experimental objects.All the patients received T-SPOT.TB test and TST test,the sensitivity,specificity,and diagnostic capacity of the two methods were compared,and their clinical significance was explored.Results Thespecificity of T-SPOT.TB was 17.2%,the sensitivity was 80.8%,the positive predictive value was 81.2%,the negative predictive value was 89.4%,and the accuracy was 84.2%.While the specificity of TST was 79.3%,the sensitivity was 39.0%,the positive predictive value was 72.7%,the negative predictive value was 79.3%,the accuracy was 67.4%.Conclusion The diagnostic accuracy of T-SPOT.TB is higher than that of TST in the diagnosis of tuberculosis,therefore,T-SPOT.TB has greater significance the diagnosis of tuberculosis.

Tuberculosis; Tuberculosis T cell spot detection; Tuberculin skin test

R521.1

A

1006-2084(2015)12-2279-03

10.3969/j.issn.1006-2084.2015.12.065

2014-04-27

2014-11-26 編輯：相丹峰