網(wǎng)織紅細(xì)胞分析技術(shù)與臨床應(yīng)用

徐玉嬋(綜述)，林發(fā)全(審校)

(1.柳州市柳鐵中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 柳州 545007； 2.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，南寧 530021)

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網(wǎng)織紅細(xì)胞分析技術(shù)與臨床應(yīng)用

徐玉嬋1△(綜述)，林發(fā)全2※(審校)

(1.柳州市柳鐵中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西 柳州 545007； 2.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，南寧 530021)

網(wǎng)織紅細(xì)胞是介于晚幼紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞之間的尚未完全成熟的紅細(xì)胞，是紅細(xì)胞成熟過(guò)程中的一個(gè)重要階段，對(duì)血液疾病的診斷和治療有重要意義。自20世紀(jì)90年代中期以來(lái)，網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)有了很大進(jìn)展，可為臨床提供更精確更多的檢測(cè)參數(shù)。相信隨著網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程及循證醫(yī)學(xué)的發(fā)展，網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)在血液疾病的診斷中會(huì)發(fā)揮日益重要的作用。

網(wǎng)織紅細(xì)胞；網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)；臨床應(yīng)用

網(wǎng)織紅細(xì)胞是尚未成熟的紅細(xì)胞，其胞質(zhì)中尚殘存部分嗜堿性物質(zhì)(RNA)經(jīng)煌焦油藍(lán)染色呈深染的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，故名網(wǎng)織紅細(xì)胞。它反映骨髓造血功能，對(duì)一些疾病的診斷和治療有重要意義。傳統(tǒng)的網(wǎng)織紅細(xì)胞分析技術(shù)為人工染色鏡檢，操作繁瑣費(fèi)時(shí)，穩(wěn)定性和重復(fù)性不理想，自動(dòng)化儀器網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)確度高，檢測(cè)參數(shù)多，臨床應(yīng)用也更加廣泛?，F(xiàn)對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞分析技術(shù)與臨床應(yīng)用進(jìn)行綜述。

1 網(wǎng)織紅細(xì)胞分析技術(shù)

1865年，有學(xué)者在貧血患者的血涂片中發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞中的特殊顆粒，并將它描述為從有核狀態(tài)到成熟前的過(guò)渡期紅細(xì)胞[1]。之后Erhich用亞甲藍(lán)對(duì)血涂片進(jìn)行染色，發(fā)現(xiàn)這種紅細(xì)胞呈現(xiàn)出網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，因而將之命名為網(wǎng)織紅細(xì)胞，并且建立了傳統(tǒng)的網(wǎng)織紅細(xì)胞活體染色和顯微鏡檢測(cè)法[2]。后來(lái)雖然有米勒窺盤(pán)法等改良方法，但仍然無(wú)法避免人工方法受主觀因素影響較大、準(zhǔn)確性較差的局限。Tanke等[3]在1983年首先將流式細(xì)胞儀應(yīng)用到網(wǎng)織紅細(xì)胞分析上，開(kāi)始了網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)由人工計(jì)數(shù)到自動(dòng)化儀器分析時(shí)代的跨越。1988年，日本希森美康(Sysmex)公司推出世界首臺(tái)專門(mén)用于網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)的全自動(dòng)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)儀Sysmex R-1000[4]，該公司后來(lái)改進(jìn)推出的Sysmex R-3000 至今仍然是美國(guó)食品藥品管理局認(rèn)可的網(wǎng)織紅細(xì)胞分析準(zhǔn)確性的對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)。1993年美國(guó)拜爾公司(Bayer)推出Technicon H3型可同時(shí)進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的多功能自動(dòng)血液分析儀[2]。Brugnara等[5]將Technicon H3和Sysmex R-3000及流式細(xì)胞儀進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)這種多功能自動(dòng)血液分析儀在網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)上同樣具有良好的精密度和線性范圍，但是測(cè)試成本卻只有Sysmex R-3000的一半。這種快捷、低成本的優(yōu)勢(shì)使多功能自動(dòng)血液分析儀更能滿足市場(chǎng)的需求，從而更容易推廣應(yīng)用。但是，各廠家采用的檢測(cè)技術(shù)和熒光染料不同，所獲得的網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)也有所差異。主要的多功能自動(dòng)血液分析儀的型號(hào)，方法，染料，可檢測(cè)的網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)見(jiàn)表1[1]。

2 主要網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)的臨床應(yīng)用

2.1 未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞比率(immature reticulocyte fraction，IRF) 利用IRF結(jié)合網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比(reticulocyte count，Ret%)可以區(qū)分貧血的類型[6]。以骨髓紅細(xì)胞生成增加為特點(diǎn)的急性貧血如溶血性或失血性貧血，總網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和IRF增加；骨髓紅細(xì)胞生成減少的慢性腎病性貧血，兩個(gè)值均降低；骨髓增生異常綜合征和急性感染中，總網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)減少或正常，而IRF增加。

Yesmin等[7]研究表明，IRF是骨髓造血功能恢復(fù)的早期指標(biāo)。造血干細(xì)胞移植是治療惡性血液病患者的首選。對(duì)移植后造血功能恢復(fù)的監(jiān)測(cè)有利于病情觀察及制訂治療方案，是判定移植是否成功的依據(jù)。目前臨床上大多采用Ret%，中性粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)(absolute neutrophil count, ANC)和血小板計(jì)數(shù)(platelet count,PLT)監(jiān)測(cè)骨髓移植后造血反應(yīng)，但網(wǎng)織紅細(xì)胞從骨髓釋放入外周血過(guò)程中影響因素較多，且當(dāng)在臨床感染或受到移植排斥反應(yīng)等影響時(shí)，能引起ANC抑制。Goncalo等[8]發(fā)現(xiàn)，IRF和未成熟網(wǎng)織血小板比率在骨髓移植后造血功能恢復(fù)的天數(shù)(中位數(shù))均顯著早于ANC 和PLT，IRF為11 d，未成熟網(wǎng)織血小板比率為10 d而ANC為15 d，PLT為12 d。

表1 主要的多功能自動(dòng)血液分析儀一般信息及網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)

IRF還可用來(lái)預(yù)測(cè)外周血干細(xì)胞收集時(shí)間。造血干細(xì)胞移植成活所需的細(xì)胞數(shù)量要求CD34+細(xì)胞>2×106/kg。在人體穩(wěn)態(tài)情況下，外周血干細(xì)胞數(shù)量少，需要通過(guò)大劑量化療或應(yīng)用生長(zhǎng)因子進(jìn)行造血干細(xì)胞動(dòng)員來(lái)提高外周血干細(xì)胞數(shù)量。干細(xì)胞收集時(shí)間是決定采集質(zhì)量的關(guān)鍵。以傳統(tǒng)的WBC>1×109/ L作為采集時(shí)間，約有15%受試者采集到的CD34+細(xì)胞數(shù)量不符合要求。研究表明，單核細(xì)胞計(jì)數(shù)≥1.455×109/L為外周血干細(xì)胞采集的最佳時(shí)機(jī)，而IRF是一個(gè)有價(jià)值的負(fù)面預(yù)測(cè)指標(biāo)，當(dāng)IRF≤0.2可認(rèn)為不適合采集[9-10]。

2.2 網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)(reticulocyte production index,RPI) 網(wǎng)織紅細(xì)胞在外周血中的生存期一般為1 d，貧血患者分泌促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin，EPO)促進(jìn)Ⅳ型以前更幼稚的網(wǎng)織紅細(xì)胞提前釋放，使其生存期延長(zhǎng)到2～2.5 d，引起網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值(reticulocyte absolute count,Ret#)、Ret%假性升高。RPI又叫校正網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，代表網(wǎng)織紅細(xì)胞的生成相當(dāng)于正常人的多少倍，可以根據(jù)患者貧血程度糾正這種因網(wǎng)織紅細(xì)胞提前釋放引起的計(jì)算誤差[11]。正常人RPI=1.0，意義為正常人維持100%的有效制造紅細(xì)胞的能力。RPI可以根據(jù)骨髓紅系的造血能力對(duì)貧血的類型進(jìn)行鑒別診斷。重度再生障礙性貧血骨髓紅系無(wú)效造血，RPI極度降低；溶血性貧血患者骨髓紅系代償性增生，RPI顯著升高。重度再生障礙性貧血的診斷標(biāo)準(zhǔn)自1976年由Camitta提出以來(lái)就一直沿用至今(以下至少符合2項(xiàng))：ANC<0.5×109/L；PLT<20×109/ L；校正網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)<1%[12]。EPO的臨床應(yīng)用可以減少輸血，部分改善貧血癥狀，血清EPO水平與外周血Ret、RPI數(shù)值密切相關(guān)。Donato等[13]研究了50例用EPO治療的新生兒溶血疾病患兒，開(kāi)始用EPO治療時(shí)患兒血細(xì)胞比容(hematocrit，HCT)為(24.1±2.8)%，RPI為(0.34±0.25)，在治療后第7日和第14日 HCT和RPI顯著升高。

靜脈注射鐵化合物常用于治療鐵缺乏的透析患者。CHr和平均網(wǎng)織紅細(xì)胞體積(mean reticulocyte volume,MRV)可以監(jiān)測(cè)靜脈鐵治療后的早期反應(yīng)，48 h后這兩個(gè)指標(biāo)顯著升高，而在中斷治療后又突然減少[17]。1989年以來(lái)重組人紅細(xì)胞生成素一直用于治療慢性腎病和癌癥相關(guān)貧血患者[14]，由于紅細(xì)胞加速生成鐵儲(chǔ)存不足而導(dǎo)致功能性缺鐵，因而監(jiān)測(cè)使用重組人紅細(xì)胞生成素治療患者的鐵狀態(tài)是非常重要的。2004年的歐洲慢性腎病貧血患者管理指南建議用CHr、HYPO%、 轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度這3個(gè)指標(biāo)來(lái)監(jiān)測(cè)缺鐵性紅細(xì)胞生成[18]。

2.5 平均球形紅細(xì)胞體積(mean sphered corpuscular volume,MSCV) 新亞甲藍(lán)染色的紅細(xì)胞經(jīng)一種酸性、低滲的溶液處理后形成脫蛋白的球形紅細(xì)胞。容量、電導(dǎo)、光散射技術(shù)將球形紅細(xì)胞分成成熟紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞。所有紅細(xì)胞(包括成熟紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞)的平均體積為MSCV。正常人MSCV大于MCV。MSCV可用于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥(hereditary spherocytosis，HS)的輔助診斷和大細(xì)胞性貧血的鑒別診斷。傳統(tǒng)的HS篩查實(shí)驗(yàn)敏感性和特異性并不理想，再加上部分HS患者臨床癥狀不典型，診斷上極易漏診、誤診。1999年Chiron等[22]首先使用MSCV9.6 fl診斷HS的靈敏度為100%，特異度為90.57%。Liao等[24]對(duì)57例HS和109例地中海貧血患者進(jìn)行MCV和MSCV等參數(shù)的檢測(cè)，結(jié)果顯示HS患者組中56例為MVC>MSCV，只有1例HS合并β-珠蛋白生成障礙性貧血為MCV

3 結(jié) 語(yǔ)

多功能自動(dòng)血液分析儀的出現(xiàn)使網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)變得更加準(zhǔn)確、快捷和經(jīng)濟(jì)。利用電阻抗和熒光分析技術(shù)等對(duì)網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量、體積、成熟程度、血紅蛋白水平進(jìn)行檢測(cè)，可得到多種網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)，可應(yīng)用于貧血的診斷、療效觀察、早期識(shí)別骨髓造血功能的恢復(fù)以及預(yù)測(cè)外周血干細(xì)胞采集時(shí)間等。一些網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)如CHr、RSF對(duì)于缺鐵性貧血，MSCV對(duì)于HS的診斷具有較好的敏感性和特異性，與傳統(tǒng)的侵入性骨髓細(xì)胞學(xué)檢查相比具有一定的優(yōu)勢(shì)。

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Study on Reticulocyte Analysis Techniques and Its Clinical Application

XUYu-chan1，LINFa-quan2.

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,LiuzhouMunicipalLiutieCentralHospital,Liuzhou545007,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory，theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Reticulocytes refer to the red blood cells not fully mature between metarubricyte and mature red blood cells.It is an important stage in the mature process of red blood cells.Reticulocyte plays an important role in the diagnosis and treatment of blood diseases.Since the mid 1990s,the rapid development of reticulocyte detection technology in clinical provides more precise reticulocyte count and more valuable reticulocyte parameters.Here is to make a review of the advances in reticulocyte analysis technology and the clinical application of main reticulocyte parameters.It is believed that with standardization of reticulocyte detection and verification of evidence-based medicine,reticulocyte analysis technology is expected to play an increasingly important role in the diagnosis of some blood diseases.

Reticulocyte; Reticulocyte parameters; Clinical application

R446.11

A

1006-2084(2015)12-2231-03

10.3969/j.issn.1006-2084.2015.12.044

2014-06-09

2014-10-16 編輯：相丹峰