Bcl-2、E-cadherin在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義

玉　海，李　偉，韋海明

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科，南寧 530021)

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Bcl-2、E-cadherin在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義

玉海，李偉，韋海明※

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科，南寧 530021)

摘要：目的檢測凋亡抑制基因Bcl-2、上皮鈣黏素(E-cadherin)在腎透明細(xì)胞癌及癌旁組織中的表達(dá)，探討B(tài)cl-2、E-cadherin在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。方法采用Elivision免疫組織化學(xué)法對2008年6月至2010年7月廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科68例行根治性手術(shù)切除腎透明細(xì)胞癌組織的人腎透明細(xì)胞癌患者的癌組織及癌組織外緣1.0 cm處組織以及正常腎組織中Bcl-2和E-cadherin基因的表達(dá)進(jìn)行檢測，觀察Bcl-2、E-cadherin蛋白表達(dá)與病理分級間的關(guān)系。結(jié)果腎透明細(xì)胞癌及其癌組織外緣1.0 cm處組織Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率分別為80.8%和44.1%,顯著高于正常腎組織(32.5%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；E-cadherin蛋白在腎透明細(xì)胞癌和癌組織外緣1.0 cm處癌旁組織表達(dá)陽性率分別為13.2%和91.7%,顯著低于正常腎組織(100.0%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Bcl-2在腎透明細(xì)胞癌高分化中的陽性表達(dá)率最低，E-cadherin在腎透明細(xì)胞癌高分化中陽性表達(dá)率最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論Bcl-2、E-cadherin參與了腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展，Bcl-2、E-cadherin可能成為腎透明細(xì)胞癌潛在的基因治療靶點(diǎn)和病情進(jìn)展的預(yù)測指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：腎透明細(xì)胞癌；凋亡抑制基因；上皮鈣黏素；癌旁組織

腎癌是泌尿生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率約占全身惡性腫瘤的3%，其中85%為透明細(xì)胞癌，近年來全世界的發(fā)病率呈明顯增高的趨勢[1]。為探討凋亡抑制基因Bcl-2和上皮鈣黏素(E-cadherin)在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，本研究采用免疫組織化學(xué)染色法對腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本和腎癌旁組織的Bcl-2和E-cadherin基因進(jìn)行聯(lián)合檢測，旨在探討B(tài)cl-2和E-cadherin基因在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義。

1材料與方法

1.1標(biāo)本的選取選取2008年6月至2010年7月廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科行根治性手術(shù)切除腎透明細(xì)胞癌組織的人腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本68例,腫瘤最大直徑均≤8 cm,其中男36例,女32例,年齡35～80歲，平均(56.2±2.4)歲。沿腎門冠狀面切開,測量腫瘤最大直徑,其中腫瘤直徑≤3 cm者31例,>3 cm者37例,分別取腫瘤組織癌組織外緣1.0 cm處組織以及正常腎皮質(zhì)組織,所有標(biāo)本均經(jīng)4%中性甲醛固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋、切片。

1.2試劑及方法采用Elivision免疫組織化學(xué)法，操作按試劑盒說明書進(jìn)行。滴加一抗(E-cadherin、Bcl-2購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)4 ℃冰箱過夜后,滴加二抗、3,3-四鹽酸二氨基聯(lián)苯胺化學(xué)顯色法,最后蘇木精復(fù)染,脫水,封片。用已知陽性的切片做陽性對照,磷酸鹽緩沖液代替一抗為陰性對照。

1.3結(jié)果評定采用二級計(jì)分法,觀察陽性細(xì)胞著色范圍和強(qiáng)度判斷陽性率。分布范圍評分標(biāo)準(zhǔn)[2]:陽性細(xì)胞數(shù)<10.0%為0分,10.0%～25.0%為1分,26.0%～50.0%為2分,51.0%～75.0%為3分,>75.0%為4分；染色強(qiáng)度:陰性為0分,染色弱但強(qiáng)于陰性對照為1分,染色清晰為2分,染色強(qiáng)為3分。上述兩種評分相加0～1分為-,2～3分為+,4～5分為++,6～7分為+++,其中陰性表達(dá)為-,弱陽性表達(dá)為+,陽性表達(dá)為++,強(qiáng)陽性表達(dá)為+++。陽性率=(陽性例數(shù)+強(qiáng)陽性例數(shù))/總例數(shù)×100%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 13.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,等級資料采用秩和檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Bcl-2、E-cadherin蛋白在組織中的表達(dá)情況Bcl-2、E-cadherin蛋白陽性表達(dá)為棕黃色或棕褐色顆粒,Bcl-2的陽性表達(dá)位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，E-cadheri的陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜，表現(xiàn)為細(xì)胞膜出現(xiàn)粗細(xì)一致的棕黃色線性顆粒(圖1，見封三)，正常腎組織中Bcl-2亦有表達(dá)，E-cadherin的陽性表達(dá)位于腎小管上皮細(xì)胞膜，呈強(qiáng)陽性表達(dá)。

2.2Bcl-2、E-cadherin蛋白在腎透明細(xì)胞癌和癌旁各組織中的表達(dá)Bcl-2蛋白在癌組織中陽性表達(dá)率為80.8%,顯著高于癌組織外緣1.0 cm組織(58.8%)和正常腎組織(32.5%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=3.281,P<0.01)。E-cadherin蛋白在癌組織中陽性表達(dá)率為13.2%，顯著低于癌組織外緣1.0 cm處組織(91.7%)和正常腎組織(100.0%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=3.081,P<0.01)。見表1, 表2。

表1　Bcl-2在腎透明細(xì)胞癌和癌旁各組織中的表達(dá)　(例)

表2　E-cadherin在腎透明細(xì)胞癌和癌旁各組織中的表達(dá)　(例)

E-cadherin：上皮鈣黏素

2.3腎透明細(xì)胞癌中Bcl-2、E-cadherin的表達(dá)與臨床分期的關(guān)系本組腎透明細(xì)胞癌中，高分化28例,中分化30例,低分化10例，Bcl-2在腎透明細(xì)胞癌高分化、中分化、低分化中陽性表達(dá)率分別為53.5%、73.3%、100.0%，Bcl-2在腎透明細(xì)胞癌高分化中的陽性表達(dá)率最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=3.935，P<0.05)，E-cadherin在高分化、中分化、低分化中陽性表達(dá)率分別為21.4%、3.3%、0.0%，E-cadherin在腎透明細(xì)胞癌高分化中陽性表達(dá)率最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=3.682，P<0.5)。見表3。

表3　腎透明細(xì)胞癌中Bcl-2、E-cadherin的表達(dá)

E-cadherin：上皮鈣黏素

3討論

腎癌是我國泌尿系統(tǒng)中僅次于膀胱癌的惡性腫瘤，也是成人腎臟最常見的一種實(shí)性惡性腫瘤[3]。腎透明細(xì)胞癌是腎細(xì)胞癌中最常見的一種病理類型,其主要來源于腎小管上皮,發(fā)生在腎的實(shí)質(zhì)內(nèi)。其早期癥狀常不典型,然而約50%的患者首次就診時(shí)往往已為中晚期,約40%的患者術(shù)后發(fā)生轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā),轉(zhuǎn)移性腎癌預(yù)后差,平均存活時(shí)間<1年,3年存活率<5%[4]。因此，尋找一種有效的、特異性的腎癌診斷和預(yù)后評估方法是臨床中一項(xiàng)迫切的任務(wù)。

細(xì)胞的凋亡與腫瘤間的關(guān)系目前依然是生物學(xué)研究的熱點(diǎn)。腫瘤細(xì)胞凋亡的發(fā)生與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Bcl-2是一種抑制凋亡的線粒體內(nèi)膜蛋白，與t14以及t18染色體易位有關(guān)，在程序性細(xì)胞凋亡中具有非常重要的抑制作用[4]。該基因能夠起到延長細(xì)胞壽命的作用，但對細(xì)胞的增殖沒有促進(jìn)作用[5]。研究表明，在Bcl-2表達(dá)陽性率高的細(xì)胞，該細(xì)胞的壽命長，細(xì)胞凋亡進(jìn)程緩慢，細(xì)胞堆積從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[6]。E-cadherin是鈣黏附蛋白超家族最重要的成員之一，同時(shí)也是近幾年備受關(guān)注的一類鈣黏附蛋白。E-cadherin是相鄰細(xì)胞間一種主要的正常細(xì)胞生長接觸抑制劑[7]，其在維持上皮結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性中發(fā)揮了重要的作用。細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化通常以細(xì)胞骨架重排、黏附的減少以及異常黏附引起的異常信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)為特征,細(xì)胞與細(xì)胞間正常黏附的喪失引起腫瘤細(xì)胞的遷移和增殖,導(dǎo)致浸潤和侵襲[8]。因此，E-cadherin表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。有研究證實(shí),在大腸癌、胃癌等多種消化道腫瘤中,E-cadherin的表達(dá)與分化級別和侵襲力有關(guān)[9]。亦有研究報(bào)道，Bcl-2、E-cadherin與腎癌的臨床分期、病理分級有相關(guān)性[10]。

本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)的方法，檢測了Bcl-2、E-cadherin在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示Bcl-2、E-cadherin在腎癌組織中的強(qiáng)陽性表達(dá)率分別為80.8%、13.2%,分別與癌旁1.0 cm和正常腎組織中陽性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01),Bcl-2、E-cadherin在腎細(xì)胞透明癌中的表達(dá)與癌組織外緣1.0 cm處組織和正常腎組織差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明Bcl-2、E-cadherin的表達(dá)異常與腎透明細(xì)胞癌發(fā)生有關(guān)。研究證實(shí)，E-cadherin表達(dá)的降低與腫瘤低分化程度相關(guān)[11]。本研究中,Bcl-2和E-cadherin的陽性表達(dá)率在腎透明細(xì)胞癌高分化、中分化以及低分化中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示Bcl-2和E-cadherin蛋白在腎透明細(xì)胞癌中的異常表達(dá)與臨床分期密切相關(guān)。腎透明細(xì)胞癌中E-cadherin表達(dá)減少的機(jī)制暫不明確，可能與上皮-鈣粘連素基因的基因突變、DNA的甲基化和轉(zhuǎn)錄抑制等有關(guān)。Bcl-2可能與其他癌基因聯(lián)合作用參與了腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，Bcl-2和E-cadherin與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),其表達(dá)分析可能作為判斷腎透明細(xì)胞癌患者病情進(jìn)展的重要參考指標(biāo)，有望為分子治療提供新的靶點(diǎn)。

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Study on the Expression of Bcl-2 and E-cadherin in Renal Clear Cell Carcinoma Tissues and Its Clinical Significance

YUHai,LIWei,WEIHai-ming.

(DepartmentofUrology,thePeople′sHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Nanning530021,China)

Abstract:ObjectiveTo detect the expression of inbibiting apoptose gene Bcl-2 and E-cadherin in renal clear cell carcinoma and pericarcinous tissue,and discuss their roles in the occurrence and development of tumor.MethodsA total of 68 patients with renal clear cell carcinoma underwent radical surgery in People′s Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region from Jun.2008 to Jul.2012 were selected.The expression levels of Bcl-2 and E-cadherin in those patients′ cancer tissues,and tissues 1.0 cm away from the outer edge of the tumor,and normal nephridial tissues were detected by immunohistochemical SP method,and their relationships with pathological grading were observed.ResultsThe positive expression rates of Bcl-2 in renal clear cell carcinoma and tissues 1.0 cm away from the outer edge of the tumor were 80.8% and 44.1%,respectively,significantly higher than 32.5% in normal nephridial tissues,the differences were statistically significant(P<0.05).The positive expression rates of E-cadherin in renal clear cell carcinoma and tissues 1.0 cm away from the outer edge of the tumor were 13.2% and 91.7%,significantly lower than 100.0% in normal nephridial tissue, the differences were statistically significant(P<0.05). The positive expression rate of Bcl-2 in renal clear cell carcinoma with the highest grade was the lowest,the positive expression rate of E-cadherin in renal clear cell carcinoma with the highest grade was the highest,the differences were statistically significant(P<0.05).ConclusionBcl-2 and E-cadherin play important roles in the development of renal clear cell carcinoma.They can be the possible targets of gene therapy for patients with renal clear cell carcinoma and predictive indexes for the development of the disease.

Key words:Renal clear cell carcinoma; Bcl-2; E-cadherin; Pericarcinous tissue

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.03.070

中圖分類號(hào)：R737.11

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)03-0558-03

收稿日期：2014-01-12修回日期：2014-07-15編輯：相丹峰