不同戊型肝炎病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒臨床對(duì)比分析

魯清月，李春艷，李曉霞，張學(xué)東

(鄭州安圖生物工程股份有限公司，鄭州 450016)

?

不同戊型肝炎病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒臨床對(duì)比分析

魯清月※，李春艷，李曉霞，張學(xué)東

(鄭州安圖生物工程股份有限公司，鄭州 450016)

摘要：目的比較磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑與酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定試劑檢測(cè)戊型肝炎病毒IgG抗體的結(jié)果差異。方法選取企業(yè)樣本庫(kù)2010年1月至2012年5月住院和門(mén)診患者935例，分別用A廠家酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定試劑和鄭州安圖生物磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑測(cè)定戊型肝炎病毒IgG抗體平行檢測(cè)，不符樣本用C廠家酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定試劑復(fù)測(cè)。結(jié)果鄭州安圖生物磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑和戊型肝炎病毒IgG抗體A廠家酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定試劑陽(yáng)性一致百分比為95.5%，陰性一致百分比為97.7%，總符合率為97.2%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論磁微?；瘜W(xué)發(fā)光戊型肝炎病毒IgG抗體試劑與酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定試劑臨床性能相似，適于臨床推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：戊型肝炎病毒；磁微?；瘜W(xué)發(fā)光；臨床考核

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，HEV)主要通過(guò)糞-口途徑傳播，HEV感染主要發(fā)生在一些衛(wèi)生條件較差的發(fā)展中國(guó)家，在發(fā)達(dá)國(guó)家大部分病例為輸入性的[1]。戊型肝炎不同的基因型被認(rèn)為只有一種血清型[2]。用原核細(xì)胞分別表達(dá)的HEV第二、三讀碼框架的3′端編碼多肽，證明具有抗原性，可用作組裝診斷試劑盒的抗原材料，將第二、三讀框的B細(xì)胞表位決定簇片段嵌合表達(dá)可得嵌合多肽，對(duì)第二、三讀框都有抗原反應(yīng)，并且抗原性較分別表達(dá)的肽段強(qiáng)，當(dāng)前國(guó)內(nèi)外檢測(cè)戊型肝炎均用ELISA[3]。

HEV-IgG抗體作為既往感染和流行病學(xué)調(diào)查的指標(biāo),目前檢測(cè)抗體所用的試劑品種繁多，各試劑盒所使用的抗原片段不同，導(dǎo)致各種試劑的最低檢測(cè)濃度不同，對(duì)恢復(fù)期血清中的IgG抗體陽(yáng)性檢出率有很大差異[4]?；诖?，研究不同區(qū)域抗原的抗原性篩選出檢出率高、特異性強(qiáng)、有互補(bǔ)或增強(qiáng)作用的抗原及其組合對(duì)制備HEV診斷試劑具有重要意義[4]。本研究以鄭州安圖生物工程股份有限公司研發(fā)的戊型肝炎病毒磁微?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒(HEV-IgG)為考核試劑盒，與市場(chǎng)占有率高，客戶(hù)易于接受的A廠家生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定試劑盒作為參比試劑盒，對(duì)比磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒與酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定試劑盒的陽(yáng)性一致百分比、陰性一致百分比和總符合率。

1資料與方法

1.1一般資料選取企業(yè)樣本庫(kù)2010年1月至2012年5月住院和門(mén)診患者935例，其中男492例、女443例，年齡10～75歲，平均(47±11)歲。

1.2儀器和試劑考核試劑：戊型肝炎病毒抗體IgG試劑盒(磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法)，鄭州安圖生物工程股份有限公司研發(fā)產(chǎn)品。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)儀(Lumo)、洗板機(jī)(iWO)和PHomo酶標(biāo)儀，由安圖實(shí)驗(yàn)儀器(鄭州)有限公司生產(chǎn)。參比試劑：A公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒抗體IgG試劑盒(酶聯(lián)免疫法)。第三方試劑：C公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒抗體IgG試劑盒(酶聯(lián)免疫法)。

1.3方法采靜脈血及時(shí)分離血清，置-20 ℃保存?zhèn)錅y(cè)。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作和判定結(jié)果。采用雙盲法，抽取935份血清樣本用安圖生物研發(fā)試劑盒與A試劑盒對(duì)比進(jìn)行平行測(cè)定。不符樣本用第三方C廠家試劑盒進(jìn)行確認(rèn)。以A試劑盒為權(quán)威參比試劑盒進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1陰陽(yáng)性結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析考核試劑與參比試劑的陽(yáng)性一致百分比為95.5%，陰性一致百分比為97.7%，總符合率為97.2%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.88，P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1　對(duì)照試劑和考核試劑對(duì)比分析　(例)

2.2ROC曲線分析 ROC曲線下面積在0.9以上時(shí)診斷價(jià)值較高，本研究評(píng)估ROC曲線下面積為0.994，標(biāo)準(zhǔn)誤為0.003，漸進(jìn)P為0.000，漸進(jìn)95%CI0.987～1.000,核試劑具有較高的診斷價(jià)值，見(jiàn)圖1。

圖1　受試者工作特征曲線評(píng)估考核試劑盒與參比試劑盒的

2.3不符樣本用第三家試劑檢測(cè)結(jié)果用第三方試劑C對(duì)不符樣本進(jìn)行復(fù)測(cè)，復(fù)測(cè)結(jié)果顯示，9份安圖試劑檢測(cè)結(jié)果為陰性，A試劑檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性樣本，C試劑檢測(cè)結(jié)果均為陰性，C試劑檢測(cè)結(jié)果全部與安圖試劑檢測(cè)結(jié)果一致；17份安圖試劑檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，A試劑檢測(cè)結(jié)果陰性樣本，C試劑檢出9份，C試劑檢測(cè)結(jié)果與安圖試劑檢測(cè)結(jié)果一致，其余8份C試劑檢測(cè)結(jié)果為陰性，與A試劑檢測(cè)結(jié)果一致。

3討論

由于HEV-IgG無(wú)確證檢測(cè)方法，一種新的體外診斷試劑盒可以通過(guò)與權(quán)威廠家試劑盒對(duì)比檢測(cè)臨床標(biāo)本，比較分析結(jié)果，鑒定該試劑盒的優(yōu)劣[5]。本研究表明，HEV-IgG安圖生物磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑與A廠家酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定試劑臨床結(jié)果用ROC曲線作圖比較，曲線下面積為0.994，符合率好。在本診斷試驗(yàn)的評(píng)價(jià)研究中，ROC曲線是以每一個(gè)檢測(cè)結(jié)果作為可能的診斷界值(cut-off point)，計(jì)算得到相應(yīng)的真陽(yáng)性和假陽(yáng)性，以假陽(yáng)性率(即1-特異度)為橫坐標(biāo)、以真陽(yáng)性率(即靈敏度)為縱坐標(biāo)繪制而成的曲線，ROC曲線可從直觀上表明診斷試驗(yàn)的準(zhǔn)確度[6]。因其考慮了所有可能的診斷界值的影響，因而能更客觀全面地評(píng)價(jià)診斷試驗(yàn)的準(zhǔn)確性[7]。

作為定性試劑盒安圖生物的HEV-IgG試劑盒，安圖臨床研究試劑盒和對(duì)比A試劑盒的陽(yáng)性一致百分比為95.5%，陰性一致百分比為97.7%，總符合率為97.2%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。根據(jù)第三方試劑C對(duì)26不符樣本的檢測(cè)結(jié)果可知考核試劑安圖試劑臨床性能優(yōu)越，與參比A試劑相比，有較高的臨床一致性。

目前，主要商品化的試劑盒所用活性材料分兩種：一種是以HEV的ORF2構(gòu)象免疫優(yōu)勢(shì)表位為基礎(chǔ)表達(dá)的重組抗原(E2-IgG)，另一種是ORF2片段為模板序列合成的多肽與 ORF3重組蛋白的混合抗原(Gene labs試劑盒) 和合成肽為抗原。ORF2編碼病毒主要結(jié)構(gòu)蛋白，組成病毒衣殼[8]，在HEV-Ⅳ和Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中存在差異[9]。根據(jù)臨床符合率和相關(guān)性，推斷參比酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定試劑盒A與安圖磁微粒化學(xué)發(fā)光試劑盒檢測(cè)HEV-IgG用的包被抗原結(jié)構(gòu)相似。

綜上所述，安圖HEV-IgG磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法考核試劑盒，通過(guò)與市場(chǎng)占有率高、客戶(hù)評(píng)價(jià)度高的A廠家酶聯(lián)免疫吸咐測(cè)定試劑盒進(jìn)行雙盲法臨床平行測(cè)定后，進(jìn)行方差檢驗(yàn)和ROC曲線分析，顯示出較高符合率，臨床性能的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。又因?yàn)榇盼⒘；瘜W(xué)發(fā)光法作為目前免疫學(xué)檢驗(yàn)發(fā)展的主流方法，具有靈敏度高、特異度強(qiáng)和適于全自動(dòng)操作等優(yōu)點(diǎn)，所以磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)HEV-IgG適宜作為臨床診斷的輔助手段推廣使用。

參考文獻(xiàn)

[1]武軍元,康強(qiáng).戊型肝炎病毒研究動(dòng)態(tài)[J].畜牧獸醫(yī)雜志,2010,29(6):50-52.

[2]Meng J,Dai X,Chang JC,etal.Identification and characterization of the neutralization epitope(s) of the hepatitis E virus[J].Virology,2001,288(2): 203-211.

[3]劉崇柏,徐道振.戊型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則GB 17011-1997[S].北京：中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所和北京地壇醫(yī)院，1997：1-3.

[4]馬紅霞,宋曉國(guó),黃維金，等.戊型肝炎病毒ORF2-N端和C端多肽的抗原性分析[J].中國(guó)生物制品學(xué)雜志, 2010,23(1):63-66.

[5]李宏峰,趙紅.戊型肝炎病毒檢測(cè)試劑盒臨床考核數(shù)據(jù)分析[J].世界華人消化雜志,2009,17(34):3550-3552.

[6]鄒清.基于AR模型的腦電信號(hào)特征提取與識(shí)別[D].長(zhǎng)沙：中南大學(xué),2008：38-39.

[7]宋花玲.ROC曲線的評(píng)價(jià)研究及應(yīng)用[D].上海：第二軍醫(yī)大學(xué),2006：12-18.

[8]Ma Y,Lin SQ,Gao Y,etal.Expression of ORF2 partialgene of hepatitis E virus in tomatoes and immunoactivity of expression products[J].World J G Astroenterol,2003,9(10):22112-22115.

[9]Takahashi M,Nishizawa T,Okamoto H. Identification of a genotype Ⅲ swine hepatitis E virus that was isolated from a Japanese pig born in 1990 and that is most closely related to Japanese isolates of human hepatitis E virus[J].J Clin Microbiol，2003,41(3):1342-

1343.

Comparative Analysis on the Performance of Different Detection Kits in Detecting Hepatitis E Virus IgG AntibodiesLUQing-yue,LIChun-yan,LIXiao-xia,ZHANGXue-dong.

(AutobioDiagnosticsCo.,Ltd,Zhengzhou450016,China)

Abstract:ObjectiveTo assess the difference between magnetic particles chemiluminescence reagents and enzyme immunoassay reagent in detecting hepatitis E virus IgG(HEV-IgG) antibodies.MethodsA total of 935 serum samples of inpatients and outpatients provided by 153 hospitals from Jan.2010 to May 2012 were selected,samples met the detection criteria were detected by HEV-IgG enzyme immunoassay kit produced by manufacturer A and magnetic particles chemical luminescence detection kit produced by Antobio in parallel,samples not met the detection criteria were detected by HEV-IgG enzyme immunoassay kit produced by manufacturer C.ResultsThe concordance of positive rates between magnetic particles chemical luminescence detection kit produced by Antobio and HEV-IgG enzyme immunoassay kit produced by manufacturer A was 95.5%, coincidence of negative rates was 97.7%,and total coincidence rate was 97.2%,there was no statistically significant difference between the two kits(P>0.05).ConclusionMagnetic particles chemical luminescence detection kit produced by Antobio has similar performance as common HEV-IgG enzyme immunoassay kit.Therefore,it is suitable to be promoted in clinical application.

Key words:Hepatitis E virus; Magnetic particles chemiluminescence; Clinical assessment

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.03.063

中圖分類(lèi)號(hào)：R373

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)03-0544-02

收稿日期：2013-10-23修回日期：2014-08-03編輯：相丹峰