不同因素對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP實(shí)驗(yàn)的影響

李曉丹，胡遠(yuǎn)艷，邴　暉，于樹潤，丁　青，羅素蘭，長孫東亭

(海南大學(xué)熱帶生物資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，?？谑泻Ｑ笏幬镏攸c(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?570228)

?

不同因素對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP實(shí)驗(yàn)的影響

李曉丹，胡遠(yuǎn)艷，邴暉，于樹潤，丁青，羅素蘭，長孫東亭

(海南大學(xué)熱帶生物資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，?？谑泻Ｑ笏幬镏攸c(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 海口 570228)

摘要：為了比較不同因素對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠條件性位置偏愛(CPP)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷挠绊?，以建立理想的CPP模型，本實(shí)驗(yàn)首先篩選出符合條件的小鼠來注射嗎啡(5 mg·kg-1)，分為皮下注射和腹腔注射2種不同給藥方式組，于不同給藥時(shí)間組連續(xù)皮下注射嗎啡3 d,5 d,7 d，并于不同測試時(shí)間(15 min或30 min)組，分別對(duì)小鼠進(jìn)行CPP訓(xùn)練，然后進(jìn)行測試，同時(shí)以小鼠在伴藥箱(白箱)的活動(dòng)時(shí)間為指標(biāo)進(jìn)行比較.結(jié)果表明：皮下注射和腹腔注射生理鹽水組與嗎啡組相比較，均存在極顯著性差異(P<0.001)；皮下注射嗎啡組與腹腔注射嗎啡組的差異性不顯著(P>0.05)，連續(xù)給藥3 d,5 d,7 d均能成功建立CPP模型(P<0.001)，CPP訓(xùn)練后，3 d嗎啡組與5 d、7 d嗎啡組相比較，均存在極顯著差異(P<0.001)，5 d與7 d嗎啡組相比較，則存在顯著性差異(P<0.05).在連續(xù)給藥5 d的基礎(chǔ)上，不同測試時(shí)間(15 min與30 min)嗎啡組與生理鹽水組相比較，小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間具有極顯著差異性(P<0.001).由此得出結(jié)論：皮下注射和腹腔注射2種給藥方式對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型的建立無影響；連續(xù)注射5 d所建立的CPP模型更穩(wěn)定，更經(jīng)濟(jì)，更理想；測試時(shí)間為 15 min時(shí)更省時(shí)，更具代表性.

關(guān)鍵詞：條件性位置偏愛(CPP)； 嗎啡； 小鼠； 影響因素

條件性位置偏愛(conditioned place preference, CPP)模型是根據(jù)巴甫洛夫的條件反射學(xué)說建立的，是研究藥物精神依賴性的重要模型之一[1]，它對(duì)深入研究藥物依賴的特征、開發(fā)治療成癮的藥物、探索形成藥物依賴的機(jī)制、以及指導(dǎo)臨床的脫毒治療等具有十分重要的意義.CPP模型訓(xùn)練周期短，操作簡單，無藥狀態(tài)的監(jiān)測能排除藥物對(duì)檢測結(jié)果的干擾.但是， 目前CPP模型的建立尚無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，各種實(shí)驗(yàn)因素，包括動(dòng)物種類、藥物劑量、給藥途徑、給藥時(shí)程、用藥時(shí)間等的不同, 都會(huì)在不同程度上影響實(shí)驗(yàn)研究的可靠性和準(zhǔn)確性.CPP實(shí)驗(yàn)裝置、藥物( 嗎啡、可卡因) 劑量等多方面對(duì)CPP模型建立的影響已有報(bào)道[2-4].國內(nèi)文獻(xiàn)所報(bào)道的多數(shù)是通過連續(xù)數(shù)天每天注射藥物或生理鹽水各1次，并且2次給藥的時(shí)間間隔為8 h的實(shí)驗(yàn)方案來建立嗎啡CPP模型[5-7].在此基礎(chǔ)上，本研究比較了不同給藥方式、給藥時(shí)程、測試時(shí)間等關(guān)鍵因素對(duì)嗎啡所誘導(dǎo)的小鼠CPP模型的影響，以期選擇最佳的實(shí)驗(yàn)條件來建立理想的嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型，從而為后續(xù)用于戒煙或戒毒芋螺毒素的海洋藥物的研發(fā)提供整體的動(dòng)物模型，同時(shí)也為其他來源的化合物提供藥效篩選的模型.

1材料與方法

1.1　材　料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠(20～25 g)，雄性，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(粵)2013-0002.在標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下隨機(jī)分籠飼養(yǎng)( 7:00—19:00，明暗交替條件下飼養(yǎng))，試驗(yàn)期間自由飲水和攝食.

1.1.2藥物鹽酸嗎啡注射液，青海制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：951030，用生理鹽水配制成所需的濃度.

1.1.3儀器條件性位置偏愛(CPP)試驗(yàn)裝置(上海吉量公司生產(chǎn)的視頻跟蹤-計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析系統(tǒng))，該裝置由一塊中間隔板(一端有開口，供動(dòng)物自由穿梭)將箱體分割成兩部分，分別為白箱和黑箱.試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)入裝置后，該裝置頂部的攝像系統(tǒng)將監(jiān)視其行為活動(dòng)，并由計(jì)算機(jī)記錄保存.

1.2　方　法

1.2.1嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型的建立按照通用方法建立嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型，分為預(yù)處理、訓(xùn)練和測試3個(gè)階段.具體如下.

預(yù)處理階段：實(shí)驗(yàn)開始第1天，小鼠被放置在兩箱中間，可任其自由穿梭，記錄小鼠一定時(shí)間內(nèi)在各箱活動(dòng)的時(shí)間.試驗(yàn)采取的是傾向性試驗(yàn)程序，淘汰在黑箱時(shí)間百分比低于50%的小鼠，以小鼠在非偏愛的白箱作為伴藥箱進(jìn)行試驗(yàn).

訓(xùn)練階段：將符合條件的小鼠隨機(jī)分為不同實(shí)驗(yàn)組，連續(xù)數(shù)天于早上8：00，對(duì)嗎啡模型組的小鼠注射嗎啡(5 mg·kg-1)，同時(shí)將對(duì)照組的小鼠注射同體積的生理鹽水后放入伴藥箱(白箱)，使其不可自由穿梭，持續(xù)時(shí)間為40 min；下午16：00，均注射等體積的生理鹽水后，放入黑箱，持續(xù)時(shí)間仍為40 min.

測試階段：即停止給藥24 h后，將小鼠放置在兩箱中間，可任其自由穿梭活動(dòng)，記錄小鼠一定時(shí)間內(nèi)在伴藥箱活動(dòng)的時(shí)間.

1.2.2不同因素對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型建立的影響在一般設(shè)計(jì)程序的基礎(chǔ)上，采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)的方式，對(duì)影響嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型建立的各個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化，包括給藥方式、給藥時(shí)程、測試時(shí)間，以確立最佳的因素組合，用于CPP模型的建立.各試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法見表1 ，具體步驟如下.

不同給藥方式：將符合條件的小鼠隨機(jī)分為皮下注射(subcutaneous，s.c.)生理鹽水對(duì)照組、嗎啡模型組以及腹腔注射( intraperitoneal，i.p.)生理鹽水對(duì)照組、嗎啡模型組，每組8只，連續(xù)訓(xùn)練5 d，測試時(shí)間為15 min.

不同給藥時(shí)程：將達(dá)到條件的小鼠隨機(jī)平均分為3 d組、5 d組和7 d組，每組8只, 并采用皮下注射的方式連續(xù)訓(xùn)練3 d、5 d、7 d，測試時(shí)間為15 min.

不同測試時(shí)間：將達(dá)到條件的小鼠隨機(jī)平均分為3 d組，15 min組、30 min組；5 d，15 min組、30 min組，每組8只，同時(shí)采用皮下注射的方式連續(xù)訓(xùn)練5 d，測試時(shí)間分別為15 min 或30 min.

表1　不同因素影響嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型建立的試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以Mean±SEM表示，用GraphPad Prism 5 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析與作圖；同時(shí)采用單因素方差分析，分析比較各組動(dòng)物在伴藥箱中的活動(dòng)時(shí)間；計(jì)算訓(xùn)練前后小鼠在伴藥箱活動(dòng)時(shí)間的增幅百分?jǐn)?shù)，計(jì)算公式為：[(訓(xùn)練后小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間-訓(xùn)練前小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間)/訓(xùn)練前小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間]× 100 %，P<0.05為顯著性差異，P<0.01為極顯著性差異.

2結(jié)果與分析

2.1不同給藥方式對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型建立的影響對(duì)于CPP訓(xùn)練前小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間，皮下注射和腹腔注射嗎啡組與相應(yīng)的生理鹽水組都在350~370 s 的范圍內(nèi)，在它們之間進(jìn)行比較，統(tǒng)計(jì)分析顯示無顯著性差異(P>0.05).而在CPP訓(xùn)練后，小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間卻顯示，無論是皮下注射，還是腹腔注射，嗎啡組小鼠的活動(dòng)時(shí)間范圍為 617~635 s，而生理鹽水組的小鼠，其活動(dòng)時(shí)間范圍為 364~374 s，嗎啡組小鼠的活動(dòng)時(shí)間明顯長于生理鹽水組，且它們之間的差異達(dá)到了極顯著水平(P< 0.001)，因而皮下注射和腹腔注射嗎啡這兩種給藥方式都能建立合格的小鼠CPP模型，它們的效果相等(見表2和圖1).因此，皮下注射和腹腔注射這兩種注射方式對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型的建立沒有影響.

2.2不同給藥時(shí)程對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型建立的影響CPP訓(xùn)練前后小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間，不同給藥時(shí)程(3 d、5 d、7 d)嗎啡組與生理鹽水組的比較結(jié)果見表3和圖2. 6組小鼠于CPP訓(xùn)練前在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間均在283～301 s的范圍內(nèi)，它們之間在訓(xùn)練前的偏愛性是沒有差異的(P>0.05).在CPP訓(xùn)練后，3 d、5 d和7 d嗎啡組的小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間顯著延長，對(duì)于3 d嗎啡組的小鼠，其活動(dòng)時(shí)間在424 s 左右，3 d生理鹽水組的小鼠，其活動(dòng)時(shí)間在284 s左右；5 d嗎啡組的小鼠，活動(dòng)時(shí)間在630 s左右，5 d生理鹽水組的小鼠，活動(dòng)時(shí)間在298 s左右；7 d嗎啡組的小鼠，活動(dòng)時(shí)間在566 s左右，7 d生理鹽水組的小鼠，活動(dòng)時(shí)間在289 s左右.將3個(gè)嗎啡組與其相應(yīng)的生理鹽水組的小鼠偏愛性進(jìn)行比較，結(jié)果都存在極顯著差異(P<0.001)，這說明采用3 d、5 d、7 d這3個(gè)不同給藥時(shí)程均能建立小鼠CPP模型.當(dāng)對(duì)這3個(gè)嗎啡組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，在3 d嗎啡組與5 d和7 d嗎啡組之間小鼠偏愛性存在極顯著性差異(P<0.001)，5 d和7 d嗎啡組的小鼠于CPP訓(xùn)練后，其在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間存在顯著性差異(P<0.05).結(jié)果顯示：連續(xù)給藥5 d所建立的嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型的偏愛性最高，而且最穩(wěn)定、最經(jīng)濟(jì)和最理想.

2.3不同測試時(shí)間對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型建立的影響在給藥3 d和5 d的兩種條件下，分別研究了15 min、30 min這兩種測試時(shí)間對(duì)小鼠CPP模型建立的影響.在給藥3d的條件下(見表4，圖3)，對(duì)于CPP訓(xùn)練前后小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間，不同測試時(shí)間(15 min、30 min)嗎啡組與生理鹽水組間均具有差異顯著性，這說明無論是測試15 min，還是30 min，都能體現(xiàn)出小鼠CPP模型的建立是成功的.測試時(shí)間為15 min的嗎啡組與生理鹽水組，于訓(xùn)練前小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間為 283～300 s，訓(xùn)練后嗎啡組的小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間提高到 424 s左右，而訓(xùn)練后生理鹽水組的小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間幾乎沒有變化，在286 s左右.測試時(shí)間為15 min的嗎啡組小鼠比生理鹽水組小鼠的活動(dòng)時(shí)間延長了約51%.對(duì)于測試時(shí)間為30 min的嗎啡組與生理鹽水組，于訓(xùn)練前小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間介于719～731 s之間，訓(xùn)練后嗎啡組的小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間提高到1 131 s左右，而訓(xùn)練后生理鹽水組的小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間同樣幾乎沒有變化，在726 s左右.測試時(shí)間為30 min的嗎啡組小鼠比生理鹽水組小鼠的活動(dòng)時(shí)間延長了約58%(見表4，圖3).在測試時(shí)間為15 min和30 min的嗎啡組之間，于訓(xùn)練前后其小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間的增幅沒有顯著性差異.

在給藥5 d的條件下(見表5，圖4)， 對(duì)于CPP訓(xùn)練前后小鼠在伴藥箱停留的時(shí)間，不同測試時(shí)間(15 min、30 min)嗎啡組與生理鹽水組相比較，都具有極顯著差異性(P<0.001)，說明無論是測試15 min，還是30 min，在給藥5 d的情況下，小鼠CPP模型的建立是最成功的.對(duì)于測試時(shí)間為15 min的嗎啡組與生理鹽水組，于訓(xùn)練前小鼠在伴藥箱停留的時(shí)間在290～296 s 之間，訓(xùn)練后嗎啡組的小鼠在伴藥箱停留的時(shí)間提高到 630 s左右，而訓(xùn)練后生理鹽水組的小鼠在伴藥箱停留的時(shí)間沒有太大變化，平均在298 s左右；測試時(shí)間為15 min的嗎啡組小鼠比生理鹽水組小鼠的停留時(shí)間延長了約119%.對(duì)于測試時(shí)間為30 min的嗎啡組與生理鹽水組，于訓(xùn)練前小鼠在伴藥箱停留的時(shí)間在747～803 s之間，訓(xùn)練后嗎啡組小鼠在伴藥箱停留的時(shí)間提高到 1342 s左右，而訓(xùn)練后生理鹽水組的小鼠在伴藥箱停留的時(shí)間同樣幾乎沒有變化，在763 s左右.測試時(shí)間為30 min的嗎啡組小鼠比生理鹽水組小鼠停留的時(shí)間延長了約67%(見表5，圖4).對(duì)于測試15 min和30 min的嗎啡組，于訓(xùn)練前后其小鼠在伴藥箱停留的時(shí)間增幅存在極顯著性差異，也就是說，測試15 min的嗎啡組小鼠比測試30 min的嗎啡組小鼠所表現(xiàn)出的偏愛性更高，更靈敏.

3討論與結(jié)論

對(duì)嗎啡類藥物的依賴是由于濫用該類藥物所形成的復(fù)雜而異常的行為性疾病，它是不同個(gè)體受遺傳因素和社會(huì)環(huán)境因素綜合作用的結(jié)果[8].迄今為止，嗎啡類藥物導(dǎo)致依賴性的機(jī)理還未被完全闡明，在臨床上亦缺乏有效的治療成癮的藥物.因而，建立動(dòng)物的嗎啡依賴性模型是研究嗎啡依賴發(fā)生機(jī)制、以及研發(fā)戒煙或戒毒新藥過程中很關(guān)鍵的一步.條件性位置偏愛(CPP) 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ褪且环N廣泛應(yīng)用于藥物獎(jiǎng)賞以及藥物渴求研究的動(dòng)物模型.但是，由于目前國內(nèi)外研究中所選擇的試驗(yàn)條件均不一致，模型的建立尚無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，各種試驗(yàn)因素的不同，如動(dòng)物種類、藥物劑量、給藥途徑、給藥時(shí)間、用藥時(shí)間、給藥次數(shù)、實(shí)驗(yàn)箱的選擇、條件線索的設(shè)立等不同，都會(huì)在不同程度上影響整個(gè)試驗(yàn)研究的可靠性和準(zhǔn)確性[9]，為此，不同實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該在參照以往實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，合理地設(shè)計(jì)，使條件性位置偏愛模型能更準(zhǔn)確地應(yīng)用到藥物成癮研究中.本實(shí)驗(yàn)研究了皮下注射和腹腔注射2種不同給藥方式，不同給藥時(shí)程(3 d、5 d、7 d)及不同測試時(shí)間(15 min和30 min)對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型建立的影響，并利用優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件，建立了重復(fù)性好、敏感度高、穩(wěn)定而經(jīng)濟(jì)的CPP動(dòng)物模型，它可為本實(shí)驗(yàn)室后續(xù)海洋藥物(如用于戒煙或戒毒芋螺毒素的藥物)的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑫r(shí)它也可為其他來源的化合物提供抗成癮藥物的篩選模型.

注射嗎啡后小鼠會(huì)出現(xiàn)豎尾反應(yīng)，這是鑒別藥物成癮的一種簡易方法[10]，因?yàn)樾∈蟮呢Q尾反應(yīng)與毒品成癮有一定的平行關(guān)系[11]，對(duì)于成癮性強(qiáng)的藥品，如鴉片、海洛因、嗎啡、冰毒等，小鼠的豎尾指數(shù)較大；而對(duì)于成癮性弱的藥品，如可待因、K粉等，小鼠的豎尾指數(shù)則較小.在本試驗(yàn)中，于注射完嗎啡15 min后，小鼠出現(xiàn)豎尾，非常興奮并且不停走動(dòng)，歷經(jīng)2 h左右才趨于正常，這與所文獻(xiàn)報(bào)道的相類似.由于小鼠批次不同，相同的處理組在訓(xùn)練前后小鼠在伴藥箱的活動(dòng)時(shí)間會(huì)有所差異，但由于本實(shí)驗(yàn)采用的是單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)的方式，所以該差異對(duì)本實(shí)驗(yàn)無影響.

根據(jù)文獻(xiàn)記載[2]，給藥方式對(duì)CPP模型的建立有影響，以皮下注射和腹腔注射較為常見.本實(shí)驗(yàn)通過皮下注射和腹腔注射兩種給藥方式建立了嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型，結(jié)果顯示，連續(xù)5 d皮下注射或者腹腔注射嗎啡(5 mg/kg) ，均可成功地誘導(dǎo)和訓(xùn)練小鼠建立CPP模型.然而，腹腔注射時(shí)，容易出現(xiàn)意外，例如：注射入膀胱、針頭扎傷內(nèi)臟等，這都會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，皮下注射則相對(duì)簡單且易操作；因此，對(duì)于不同給藥方式組和不同測試時(shí)間組，均可采用皮下注射法.所以，在根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件的基礎(chǔ)上，可以自由選擇皮下注射或者腹腔注射法，而本實(shí)驗(yàn)室多采用皮下注射法.

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[12]，一次注射定量的嗎啡不易成癮，而分次注射一段間后則容易成癮.國內(nèi)一般多選用連續(xù)給藥數(shù)天，如每天上午和下午分別注射嗎啡和生理鹽水(間隔8 h),因此，給藥時(shí)間與嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型的建立有相關(guān)性.本實(shí)驗(yàn)選擇了不同的給藥時(shí)間，并將其分為3組，即3 d組、5 d組和7 d組，觀察了其對(duì)嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型建立的影響，目的是為了選擇最佳的給藥時(shí)程.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：3 d組、5 d組和7 d組均可建立CPP模型，然而3 d與5 d比較，3 d所建立的CPP模型不夠穩(wěn)定，7 d與5 d比較，7 d所建立的CPP模型其效果不夠顯著，且耗時(shí)長，所需嗎啡較多，不夠經(jīng)濟(jì).所以，連續(xù)給藥5 d所建立的嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型最穩(wěn)定、最經(jīng)濟(jì)、最理想，因此，在比較不同測試時(shí)間時(shí)僅連續(xù)訓(xùn)練3 d 和5 d.

目前，在動(dòng)物CPP 實(shí)驗(yàn)環(huán)境中通常采用活動(dòng)時(shí)間和活動(dòng)距離兩種行為指標(biāo)來監(jiān)測CPP模型的建立效果[13].對(duì)于測試時(shí)間， 有文獻(xiàn)報(bào)道，過長的測試時(shí)間會(huì)引起CPP條件反應(yīng)的消退[14].為此，本實(shí)驗(yàn)通過不同的測試時(shí)間(15 min和30 min)來記錄嗎啡誘導(dǎo)的小鼠CPP模型建立的效果，結(jié)果顯示：測試時(shí)間為30 min與15 min時(shí)，均能顯示CPP模型的成功建立，在連續(xù)給藥3 d的基礎(chǔ)上，二者無明顯差異，在連續(xù)給藥5 d的基礎(chǔ)上，測試時(shí)間為15 min的嗎啡組小鼠，其偏愛性更靈敏，且它與測試時(shí)間為30 min的嗎啡組小鼠之間存在極顯著差異.因而，選用連續(xù)注射嗎啡5 d和測試時(shí)間為15 min來建立CPP模型，且以來建立的模型更省時(shí)、偏愛性更顯著、更具代表性.

參考文獻(xiàn)：

[1] Tzschentke T M. Review on CPP：Measuring reward with the conditioned place preference(CPP) paradigm：update of the last decade[J].Addiction Biology，2007，12(3-4)：227-462.

[2] Brabant C，Quertemont E，Tirelli E． Evidence that the relations between novelty-induced activity，locomotor stimulation and place preference induced by cocaine qualitatively depend upon the dose: a multiple regression analysis in inbred C57BL/6J mice[J]．Behav Brain Res，2005，158( 2) : 201-210.

[3] Parker L A． Place conditioning in a three-or four-choice apparatus: role of stimulus novelty in drug-induced place conditioning[J]. Behav Neurosci，1992，106( 2) : 294-306.

[4] Mueller D,Perdikaris D,Stewart J. Persistence and drug-induced reinstatement of a morphine-induced conditioned place preference[J]．Behav Brain Res，2002，136( 2) : 389-397.

[5] 康潔,張凌媛,沈建英,等.二陳湯對(duì)嗎啡依賴小鼠位置偏愛效應(yīng)的影響[J]. 中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新, 2013, 10(32): 4-6.

[6] 余守洋,楊培潤,羅素元,等.延胡索及L-THP 對(duì)嗎啡條件性位置偏愛大鼠獎(jiǎng)賞環(huán)路多巴胺系統(tǒng)的影響及比較[J]. 中國中藥雜志，2013,38(22) :3928-3932.

[7] 毛羽,楊上川,胡新天,等. 心得安對(duì)ICR 小鼠嗎啡誘導(dǎo)的條件化位置偏愛記憶獲得和提取的影響[J]. 動(dòng)物學(xué)研究, 2011, 32(6): 670?674.

[8] Palomo T, Archer T, Beninger R J, et al . Gene-environment interplay in neurogenesis and neurode generation: early life genetic, epigenetic and environmental factors shaping emotionality in rodents[ J]. Neurotox Res, 2004, 6: 415- 434.

[9] 劉杰,肖琳，李勇輝，等. 影響條件性位置偏愛實(shí)驗(yàn)各種因素的研究現(xiàn)狀[J]. 中國藥物依賴性雜志，2005, 14( 2):85- 88.

[10] 陳為民,張宗澤,趙林. 藥癮動(dòng)物模型的建立及藥癮治療的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2005, 26(5): 599-601.

[11] Pashley D, Sano H, Ciucchi B, et al. Adhesion testing of dentin bonding agents a review[J]. Dent Mater , 1995, 11: 117.

[12] Hyman S E，Malenka R C. Addiction and the brain: the neurobiology of compulsion and its persistence[J]. Nat Rev Neurosci，2001，2: 695.

[13] Brockwell N T, Ferguson D S, Beninger R J. A computerized system for the simultaneous monitoring of place conditioning and locomotor activity in rats[ J] . J Nerrosci Methods, 1996, 64: 227- 232.

[14] Bardo M T, Rowlett J K, Harris M J. Conditioned place preference using opiate and stimulant drugs: a meta-analysis[ J] . Neurosci Biobehav Rev, 1995, 19: 39- 51.

Effects of Different Factors on Morphine-induced Conditioned Place Preference of Mice

Li Xiaodan, Hu Yuanyan, Bing Hui, Yu Shurun, Ding Qing, Luo Sulan, Zhangsun Dongting

(Key Laboratory of Tropical Biological Resources, Ministry of Education; Key Lab for Marine Drug of Haikou, Hainan University, Haikou 570228,China)

Abstract：To compare the effects of the different experimental conditions on morphine-induced conditioned place preference of mice and establish satisfactory CPP model, in the report, the eligible mice injected with morphine (5mg/kg) were divided into different groups random for conditioned place preference (CPP) training according to intraperitoneal injection (i.p.) or subcutaneous injection (s.c.); 3 d, 5 d, and 7 d different continuous injection time; and 15 min or 30 min different testing time. Each group mice received an injection of morphine (5mg/kg) or saline, and then, the time spent in the drug-paired box was observed. The results indicated that it was obvious that morphine groups significantly induced CPP effect after training, but no CCP effects occurred in saline groups, whatever it was s.c. or i.p. injection (P<0.001). CPP model could be constructed through 3d, 5d, or 7d different continuous injection of morphine, the differences among these groups were significant. The time spent in drug-paired box was significant difference between 15 min and 30 min testing time based on 5 d continuous injection of morphine (P<0.01). These results suggested that the different injection s.c. or i.p. has no effects on morphine induced CPP model of mice; 5d continuous injection is the most stable, economical, and ideal condition for the construct of the morphine-induced CPP mice model; the test time of 15 min is the most time-saving and most representative.

Keywords：Conditioned place preference (CPP); Morphine; Mice; Experimental factors

中圖分類號(hào)：R 964

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOl：10.15886/j.cnki.hdxbzkb.2015.0026

文章編號(hào)：1004-1729(2015)02-0141-06

收稿日期：------------------------ 2015-12-08基金項(xiàng)目： 國家自然科學(xué)基金(41366002)；海南省社會(huì)發(fā)展科技專項(xiàng)(SF201328); ?？谑兄攸c(diǎn)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013-16)；長江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃(IRT1123)資助.

作者簡介：李曉丹(1990-)，女，漢，山西運(yùn)城，2013級(jí)碩士研究生，研究方向：海洋藥物，E-mail:lixiaodan816@163.com通信作者： 長孫東亭， 男，副研究員，研究方向：海洋藥物，E-mail: zhangsundt@163.com