樟子松苗圃土壤真菌的類群1)

武術(shù)杰 周秀華

(長春大學，長春，130022)

責任編輯:戴芳天。

棲息于土壤環(huán)境中的真菌種類繁多，土壤環(huán)境不同，真菌種類及數(shù)量有明顯差異。真菌在土壤生態(tài)系統(tǒng)中發(fā)揮著多種多樣的功能，如分解有機質(zhì)、為植物提供養(yǎng)分等，是生態(tài)系統(tǒng)健康的指示物［1］。土壤中的許多真菌是植物病害的重要病原菌，它們寄生于各種植物的根部或根頸部，使之發(fā)生病變，如:在苗圃中普遍發(fā)生的苗木立枯病就是由腐霉菌、鐮刀菌及絲核菌引起的。這3 類真菌均屬于土壤習居菌，可長期存活于土壤中的病殘體上，當條件適宜時侵染苗木［2］。在土壤中也同時存在著多種能夠抑制病原菌生長的真菌，此類真菌可以為控制植物病害提供一條有效途徑。

筆者對樟子松苗圃地的土壤真菌群落進行研究，旨在了解土壤中真菌的種類和數(shù)量，繼而分析該土壤環(huán)境中的優(yōu)勢種群，找出使苗木感病的病原真菌和對病原菌有抑制作用的拮抗真菌，以便更好地利用樟子松苗圃的土壤真菌資源，為提高土壤肥力、科學防治病害提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

土樣的采集:采樣地點為長春市第一苗圃，采集時間為2012年5月份。采用5 點采樣法進行土樣采集，采集兩個垂直深度的土壤，分別為:0 ＜h(土層深度)≤10 cm 和10 cm ＜h≤20 cm。每個采集點取樣量大體一致，去除植物根系、石礫和其它雜物，土樣均勻混合后取500 g 左右裝入無菌的封口聚乙烯袋內(nèi)，編號后將土樣帶回實驗室，于冰箱中4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

培養(yǎng)基:采用PDA 綜合培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、KH2PO43 g、MgSO41.5 g、蒸餾水1 000 mL，pH 值自然。

土樣含水量測定:分析天平稱取土樣10 g，裝入干燥鐵盒內(nèi)，置于干燥烘干箱，105 ℃烘干8 h。土樣烘干后置于干燥器內(nèi)，冷卻后取出用分析天平稱量，計算土樣含水量。

土樣含水量=((土樣鮮質(zhì)量-烘干后土樣質(zhì)量)/土樣鮮質(zhì)量)×100%。

土樣真菌分離:分別采用3 種方法進行土樣真菌分離［3-4］。

①稀釋平板法:稱取10 g 新鮮土樣，加入到盛有90 mL 無菌水的三角瓶中，置于搖床上，以120～200 r/min 震蕩10～20 min，使土樣均勻分散于稀釋液中，使之成為土壤懸浮液。用移液器吸取10 mL的土壤懸浮液，加入到盛有90 mL 無菌水的三角瓶中充分震蕩，使土樣稀釋至100 倍。移取1 mL 稀釋100 倍的土壤懸浮液滴于直徑9 cm 的滅菌培養(yǎng)皿中，然后倒入15 mL 即將凝固的PDA 綜合培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基與土壤懸浮液混合均勻，待凝固后置于25℃恒溫箱中培養(yǎng)，每種土樣設(shè)5 個重復。

②土壤稀釋平板法:稱取0.001 5～0.015 0 g 新鮮土樣置于培養(yǎng)皿中，分散、弄碎，用少量無菌水稀釋，然后倒入即將凝固的PDA 綜合培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基與土樣混合均勻，待凝固后置于25 ℃恒溫箱中培養(yǎng)，每種土樣設(shè)5 個重復。

③土壤平板法:稱取0.001 5～0.015 0 g 新鮮土樣均勻撒于已經(jīng)凝固的PDA 綜合培養(yǎng)基表面，置于25 ℃恒溫箱中培養(yǎng)，每種土樣設(shè)5 個重復。

真菌的鑒定:產(chǎn)生孢子的真菌依據(jù)資料進行形態(tài)學特征鑒定;將未產(chǎn)生孢子的真菌接入促孢培養(yǎng)基(配方:蔗糖1 g、瓊脂5 g、酵母浸膏0.1 g、KH2PO40.1 g、水1 000 mL，pH 值自然)中，待孢子形成后再進行鑒定［5］。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計:真菌出現(xiàn)頻率，即檢出率=(分離到該菌的菌落數(shù)量/出現(xiàn)菌落總數(shù)量)×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 土樣含水量

0 ＜h≤10 cm 土層的含水量為16.9%，10 cm ＜h≤20 cm 土層的含水量為18.3%，差異不大。

2.2 樟子松苗圃土壤真菌類群

2.2.1 分離出土壤真菌種類

采用3 種分離方法對樟子松苗圃土壤真菌區(qū)系進行分離，共獲得土壤真菌19 種(見表1)。在19種真菌中，接合菌1 種，子囊菌2 種，半知菌16 種。除Aspergillus niger 為寄生菌外，其余18 種真菌均為腐生或兼性寄生真菌，適宜長期在土壤中生存。

稀釋平板法分離得到真菌種類最多，為17 種;其次為土壤平板法，分離到真菌12 種;土壤稀釋平板法分離到真菌最少，為8 種。其中，F(xiàn)usarium oxysporum、Mucor sp.、Penicillium sp.、Rhizopus sp.等4種真菌以3 種方法均可分離到。稀釋平板法主要分離孢子態(tài)土壤真菌，土壤稀釋平板法主要分離菌絲態(tài)真菌，而土壤平板法主要分離土壤中天然態(tài)的可生長的菌絲或孢子態(tài)的真菌，3 種方法相結(jié)合能夠更全面地反映土壤中真菌的群落結(jié)構(gòu)。

2.2.2 各土層真菌種類及分離率

在樟子松苗圃0 ＜h≤10 cm 土層中分離出真菌19 種，10 cm ＜h≤20 cm 土層中分離出真菌13 種，整體出現(xiàn)頻率較不均勻。0 ＜h≤10 cm 土層中真菌的出現(xiàn)頻率明顯高于10 cm ＜h≤20 cm 土層(見表2)。0 ＜h≤10 cm 土層的透氣性較10 cm ＜h≤20 cm 土層高;就濕度而言，10 cm ＜h≤20 cm 土層略高，但兩個土層濕度相差不大，真菌大多好氣、喜濕。綜合兩個因素，0 ＜h≤10 cm 土層更適宜真菌生長，因此該土層真菌種類較豐富，且出現(xiàn)頻率較高。

0 ＜h≤10 cm 土層中優(yōu)勢種群為:Mucor sp.、Penicillium sp.、Rhizopus sp.、Fusarium oxysporum、Trichoderma citrinoviride、Verticillium sp.、Aspergillus niger、Cladosporium sp.、Trichoderma viride;10 cm ＜h≤20 cm 土層中優(yōu)勢種群為:Mucor sp.、Penicillium sp.、Trichoderma citrinoviride、Fusarium solani、Rhizoctonia solani。平均出現(xiàn)頻率較高的種群為:Mucor sp.、Penicillium sp.、Trichoderma citrinoviride、Rhizopus sp.、Fusarium oxysporum。

表1 樟子松苗圃土壤真菌分類地位及3 種分離方法對真菌種類的影響

表2 各土層真菌出現(xiàn)頻率

3 結(jié)論與討論

在樟子松苗圃土壤中共分離得到19 種真菌，群落種類較為豐富，但出現(xiàn)頻率不均勻。這些真菌多為腐生菌或兼性寄生菌，可長期生存于土壤環(huán)境中。群落組成上，Mucor sp.、Penicillium sp.、Trichoderma citrinoviride、Rhizopus sp.、Fusarium oxysporum 等5種真菌占明顯優(yōu)勢。

在所分離的土壤真菌中，F(xiàn)usarium oxysporum、Fusarium solani、Rhizoctonia solani 是典型的苗圃致病菌，能引起苗木立枯病，且在土壤中的分離率相對較高，環(huán)境條件適應的情況下此苗圃極易發(fā)生苗木立枯病。同時，樟子松苗圃土壤中也存在一些具有生物防治潛力的真菌，如:Trichoderma citrinoviride、Trichoderma viride，分離率也相對較高。在一些土傳病害的防治中，木霉發(fā)揮著重要的作用，如競爭作用、溶菌作用、重寄生作用、誘導抗性作用、抗生作用等［6-7］。本試驗分離得到的2 種木霉菌對苗木立枯病病原菌的作用關(guān)系有待進一步研究。

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