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    通天草水提物對阿爾茨海默病小鼠海馬白介素-1β水平的影響

    2015-03-06 07:13:02費洪新張英博仲麗麗王曉源韓玉生李寶龍丑小月周忠光
    黑龍江科學(xué) 2015年1期
    關(guān)鍵詞:通天拉西灌胃

    杜 徽,費洪新,張英博,仲麗麗,王曉源,劉 斌,韓玉生,李寶龍,孫 博,丑小月,周忠光

    (黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),哈爾濱 150040)

    阿爾茨海默病(Al z h e i m er's d i s ea s e,A D)是一種臨床上常見的老年性疾病,其炎癥介質(zhì)受到了廣泛的關(guān)注,許多炎癥介質(zhì)例如白介素-6(I L-1β)、腫瘤壞死因子-α(TN F-α)、白介素-8(I L-8)等參與了A D的發(fā)生發(fā)展過程[1]。本課題組前期研究表明通天草水提物(Aqueous Extract from Waternut Herb,AEWH)具有改善學(xué)習(xí)記憶功能[2]、降低 A D 大鼠血清 I L-1β 水平[3]。而A EW H對A D小鼠海馬I L-1β的研究國內(nèi)外未見文獻(xiàn)報道?;谶@些,本實驗采用A D小鼠模型為研究對象,觀察A EW H對A D小鼠海馬I L-1β水平的影響,以期為臨床治療A D提供理論依據(jù)。

    1 材料

    1.1 動物

    雄性、7月齡清潔級C57小鼠,體重(23±2)g,由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供,許可證號:SCXK(京2012-0001)。

    1.2 藥品

    AEW H由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)周忠光教授購買,田明教授制備成水煎劑、烘干后制備成干粉、-20℃保存于冰箱中備用。實驗使用時加熱,臨時配制成A EW H溶液。吡拉西坦由湖南迪諾制藥有限公司生產(chǎn),批號∶130325。

    1.3 儀器

    TGL-16G臺式離心機:上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn);PLZOZ-S型電子天平:梅特勒-托利多儀器有限公司生產(chǎn);6100型RT-雷杜酶標(biāo)儀:美國R T公司生產(chǎn)。

    1.4 試劑

    Aβ1-42:S i g m a公司生產(chǎn);I L-1β酶聯(lián)免疫試劑盒:南京建成生物工程研究所生產(chǎn),批號:20140401;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

    2 方法

    2.1 AEWH的提取

    實驗稱取300g通天草放高頸燒瓶中,加5 000m L蒸餾水,攪勻,浸泡2h,煎煮2h,含通天草的藥液用干凈紗布過濾、擰干,得到第一次濾液。第一次水提物殘渣再放入高頸燒瓶中,再加入5 000m L蒸餾水,重復(fù)上面的過程,會得到第二次的濾液。合并2次濾液,濃縮,制備成干膏、干粉,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    2.2 A D模型的復(fù)制

    C57小鼠水合氯醛麻醉后,小鼠雙側(cè)腦室一次性注入5μL凝聚態(tài)Aβ1-42(濃度為80p mol·μL-1)。同時對照組C57小鼠雙側(cè)腦室注射等量生理鹽水。

    2.3 分組

    復(fù)制A D模型小鼠共24只,隨機分為4組,其中模型組6只、吡拉西坦組6只、A EW H高劑量組6只、AEWH低劑量組6只。另設(shè)對照組C57小鼠6只。

    2.4 給藥

    選擇對照組、模型組給予生理鹽水灌胃;吡拉西坦組給予吡拉西坦 0.62g·kg-1·d--1灌胃;A EW H 高劑量組給予 A EW H 2.0g·kg-1·d-1灌胃;A EW H 低劑量組給予 A EW H 0.5g·kg-1·d-1灌胃,灌胃持續(xù)時間 18d。

    2.5 海馬I L-1β的檢測

    實驗結(jié)束后冰臺上操作,小鼠斷頭迅速取海馬,勻漿,靜置 1h,4℃離心機 3 000r o min-1離心 20m in,吸取上清液,分裝E P小管中,-20℃低溫保存于冰箱中備用。按酶聯(lián)免疫試劑盒說明書進(jìn)行操作,450n m波長處測定各孔吸光度(A),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出I L-1β的含量。

    3 結(jié)果

    根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出方程:Y=0.002 3 X+0.420 6,R 2=0.874 2,計算出小鼠海馬組織IL-1β含量(見圖1)。結(jié)果表明,與對照組比較,模型組小鼠海馬組織I L-1β含量明顯升高(P<0.05);與模型組比較,吡拉西坦組(0.62g·kg-1·d-1)、A EW H 高劑量組(2.0g·kg-1·d-1)小鼠海馬組織I L-1β含量明顯降低(P<0.05);與模型組比較,A EW H低劑量組 (0.5g·kg-1·d-1)小鼠海馬組織I L-1β的含量降低不明顯(P>0.05)(見表1)。

    圖1 小鼠海馬IL-1β的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Mice hippocampus beta IL-1 standard curve

    表1 AEWH對AD小鼠海馬IL-1β的影響(±s)Tab.1 AEWH impacton beta ADmice hippocampus IL-1(+s)

    4 討論

    采用酶聯(lián)免疫的方法檢測I L-1β的結(jié)果表明,與對照組比較,模型組小鼠海馬組織I L-1β含量明顯升高(P<0.05),提示模型組海馬組織I L-1β含量明顯升高,產(chǎn)生明顯的炎癥反應(yīng),引發(fā)A D疾??;與模型組比較,A EW H高劑量組 (2.0g·kg-1·d-1)小鼠海馬組織I L-1β含量明顯降低(P<0.05),說明高劑量的A EW H可通過影響I L-1β的水平改善A D臨床癥狀;而與模型組比較,A EW H 低劑量組(0.5g·kg-1·d-1)小鼠海馬組織I L-1β的含量降低不明顯 (P>0.05),說明低劑量A EW H不可通過影響I L-1β的水平改善A D臨床癥狀。以上綜合提示采用A EW H高劑量(2.0g·kg-1·d-1)治療A D效果較好,A EW H可以通過抑制I L-1β來達(dá)到治療A D的目的。

    [1] 孫博,費洪新,姜波,等.阿爾茨海默病發(fā)病機制初探[J].中醫(yī)藥信息,2014,31(3):26.

    [2] 魏鐵花,李寶龍,劉旭,等.通天草提取物對擬阿爾茨海默氏病模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及其海馬區(qū)組織相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J].吉林中醫(yī)藥,2013,33(2):179-181.

    [3] 邱文興,賈博宇,劉永武,等.通天草提取物對Aβ1-40所致AD大鼠血清與海馬組織中細(xì)胞因子含量的影響[J].中醫(yī)藥信息,2012,29(2):24-25.

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