苯環(huán)己哌啶對獼猴血液皮質(zhì)醇影響的研究

張玉芹，張　燦，施新宇

(三峽大學(xué)仁和醫(yī)院質(zhì)控科，湖北 宜昌 443001)

苯環(huán)己哌啶對獼猴血液皮質(zhì)醇影響的研究

張玉芹※，張燦，施新宇

(三峽大學(xué)仁和醫(yī)院質(zhì)控科，湖北 宜昌 443001)

苯環(huán)己哌啶(phencyclidine,PCP)既可誘導(dǎo)出精神分裂癥的陽性癥狀(幻覺、妄想、行為紊亂等)，也可誘導(dǎo)出精神分裂癥的陰性癥狀(情感淡漠、行為呆板、思維貧乏等)[1-2]。因此,PCP是建立精神分裂癥模型比較理想的藥物[3]。精神分裂癥患者的下丘腦-垂體-腎上腺素(hypothalamic-pituitary-adrenal,HPA)軸是亢進的，其分泌的促腎上腺激素釋放激素(corticotropin releasing hormone，CRH)、促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)及皮質(zhì)醇都會有不同程度的增加，從而從不同的方面影響患者的精神狀態(tài)。Dinan[4]在研究精神分裂癥患者為什么更易患糖尿病時發(fā)現(xiàn)，精神分裂癥患者的HPA軸亢進，其唾液中腎上腺素及皮質(zhì)醇水平高于正常人，這些激素導(dǎo)致患者更易發(fā)生糖尿病。而Duman等[5]的研究也證實精神分裂癥患者血液中皮質(zhì)醇水平增高，其可能是導(dǎo)致大腦神經(jīng)元萎縮及細胞凋亡的原因之一。本研究利用PCP建立獼猴精神分裂癥模型后，通過檢測獼猴血液中的皮質(zhì)醇水平來評價模型的穩(wěn)定性。

1材料與方法

1.1實驗材料云南健康成年雄性恒河獼猴4只，由中國科學(xué)院昆明動物研究所提供，年齡均為5歲，體質(zhì)量3~5 kg，合格證號：中科動管第053號，符合國家醫(yī)用動物使用標準。獼猴經(jīng)1個月常規(guī)飼養(yǎng)無異常表現(xiàn)，心、肝、腎等重要器官血液生化指標檢測正常,無神經(jīng)系統(tǒng)病史，肢體運動功能完整。4只獼猴編號為：1號猴、2號猴、3號猴、4號猴。

1.2實驗方法實驗所用藥物為PCP(OMIGA公司生產(chǎn)，批號：B2011122001)，稱取一定量的PCP后加相應(yīng)量的0.9%氨化鈉注射液配制成1.2 mg/mL的PCP注射液，冷藏保存。以肌內(nèi)注射的方式給藥，常規(guī)選擇的注射部位為股外側(cè)肌。按0.3 mg/kg的劑量連續(xù)注射14 d，每日注射2次，注射時間為10:00和16:00。每次注射的PCP溶液量由PCP濃度及給藥劑量算得，每次注射的毫升數(shù)為1號猴1.5 mL，2號猴1.5 mL，3號猴1.7 mL，4號猴1.3 mL。給藥期間注意無菌操作，注意觀察獼猴飲水、進食情況，同時觀察獼猴生命指征是否平穩(wěn)，若獼猴出現(xiàn)不適情況，立即停藥處理。

1.3血液皮質(zhì)醇的采集、處理及測定在PCP干預(yù)前和干預(yù)完成后第5日采集獼猴的血液測定皮質(zhì)醇。取血前獼猴必須為空腹狀態(tài)，需應(yīng)提前告知飼養(yǎng)員9:00～14:00禁食(包括糧食、水果)，采血時間一般選在14:00進行。用猴竿套住獼猴牽拉到操作間后反抓其手臂，保證獼猴束縛不得行動，處于應(yīng)激狀態(tài)，注意反抓其手臂時要考慮動物手臂不被固定疼痛或扭傷。采血部位為下肢的表淺靜脈，采血前剃毛，用酒精消毒，注意無菌操作。每只個體每次采血漿1~1.5 mL(3~4 kg個體)，共采集4次，分別在抓捕之后的0~5 min、15~20 min、25~30 min、35~40 min各采血1次，總量不超過6 mL；個體在7~8 kg者每次采集1.5~2 mL，總量不超過8 mL。血液在真空抗凝管中充分混合，常溫保存。全血采集后進行離心，以8000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min。將血漿部分轉(zhuǎn)移至0.5 mL的離心管中-20 ℃保存，用于皮質(zhì)醇濃度的測定。

1.4皮質(zhì)醇的測定采用CortisolRIADSL-2000試劑盒，該試劑盒測定低濃度樣品時的組間和組內(nèi)變異系數(shù)分別為7.9%和6.5%，而測定高濃度樣品時的組間和組內(nèi)變異系數(shù)分別為9.3%和8.3%。放射性免疫測試的具體實驗操作由昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院放免科的工作人員完成。

2結(jié)果

干預(yù)前與干預(yù)后的0~5 min、給藥前與給藥后的15~20 min以及給藥前與給藥后25~30 min血液中的皮質(zhì)醇水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但干預(yù)前與干預(yù)后的35~40 min比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

項目0~5min15~20min25~30min35~40min干預(yù)前869±98880±22782±87966±70干預(yù)后978±24985±62840±60956±58t10.2577.53612.5736.235P<0.05<0.05<0.05>0.05

3討論

HPA軸是一種應(yīng)激性的激素反應(yīng)鏈，其分泌可以分為兩種，一種是基礎(chǔ)分泌，而另一種是在應(yīng)激狀態(tài)下的增量分泌也稱為應(yīng)激分泌。此外，HPA軸還具有一定的晝夜節(jié)律性，因此在抽取血液樣本時，時間點必須固定。觀察HPA軸的分泌水平及其節(jié)律性是衡量其功能是否正常的一個重要指標，血液皮質(zhì)醇在HPA亢進及應(yīng)激狀態(tài)下會明顯升高。

本研究檢測了獼猴在PCP干預(yù)前后血液中皮質(zhì)醇的變化情況，結(jié)果顯示，在干預(yù)前與干預(yù)后的0~5 min、15~20 min以及25~30 min血液中的皮質(zhì)醇水平較干預(yù)前各時點有所升高(P<0.05)，但干預(yù)前與干預(yù)后35~40 min比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。從實驗結(jié)果可以看出，在0~5 min、15~20 min、25~30 min三個時間點所得到的皮質(zhì)醇監(jiān)測結(jié)果在給藥后是升高的，說明14 d的恒定量PCP干預(yù)能影響獼猴體內(nèi)血液皮質(zhì)醇的分泌，但是可能這種影響僅發(fā)生在應(yīng)激狀態(tài)的初期，當(dāng)獼猴應(yīng)激狀態(tài)趨于消失時，這種影響可能不太明顯，也就是說PCP對獼猴血液皮質(zhì)醇的基礎(chǔ)分泌影響不大而對其應(yīng)激分泌有較明顯影響。

但本實驗還不完善，還需從以下兩個方面進行改進：①在檢測血液皮質(zhì)醇時，在干預(yù)前及干預(yù)后，特別是給藥后只進行了一次血液皮質(zhì)醇檢測，而未進行多個時間點的連續(xù)檢測，血液皮質(zhì)醇可能只在給藥的某一段時間里上升，而在檢測的時間點時，獼猴可能已經(jīng)通過自身內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)恢復(fù)。因此在以后的研究中，需要對多個不同時間點血液中的皮質(zhì)醇進行檢測，以詳細了解整個給藥過程中獼猴血液皮質(zhì)醇的變化；②本實驗PCP的給藥時間為14 d，所建擬的精神分裂癥模型屬于亞急性模型，而臨床上患者精神分裂癥的發(fā)病多緩慢，體內(nèi)內(nèi)分泌系統(tǒng)的變化也需較長時間，考慮到獼猴體內(nèi)內(nèi)分泌系統(tǒng)的自身恢復(fù)調(diào)節(jié)，給藥時間也是值得繼續(xù)研究的地方。在今后的實驗中可增加給藥前后獼猴血液皮質(zhì)醇的檢測次數(shù)以及樣本量，以期獲得更多的數(shù)據(jù)。

參考文獻

[1]Kirkpatrick B,Miller B,García-Rizo C.Schizophrenia[J].Clin Schizophr Relat Psychoses,2013,21:1-23.

[2]Adell A,Jiménez-Sánchez L,López-Gil X,etal.Is the acute NMDA receptor hypofunction a valid model of schizophrenia?[J].Schizophr Bull,2012，38(1):9-14.

[3]Kilts CD.The changing Roles targets for animals of schizophrenia[J].Biol Psychiatry, 2001, 50(11): 845-855.

[4]Dinan TG. Stress and the genesis of diabetes mellitu sinschizophrenia[J].Br J Psychiatry Suppl, 2004,47:S72-75.

[5]Duman RS, Malberg J, Nakagawa S,etal.Neuronal plasticity and survival in mood disorders[J].Biol Psyciary,2000,48(8):732-739.

摘要：目的探討恒定量苯環(huán)己哌啶(PCP)干預(yù)后獼猴血液皮質(zhì)醇的變化情況。方法選取4只恒河獼猴為實驗對象，每日進行恒定量的PCP干預(yù)，干預(yù)過程持續(xù)2周，分別于干預(yù)前及干預(yù)后第5日采集獼猴血液，并進行皮質(zhì)醇檢測，觀察干預(yù)前、后獼猴血液中皮質(zhì)醇的變化。結(jié)果干預(yù)前與干預(yù)后的0~5 min、干預(yù)前與干預(yù)后的15~20 min以及干預(yù)前與干預(yù)后的 25~30 min血液中的皮質(zhì)醇水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但干預(yù)前與干預(yù)后的35~40 min 比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論恒定量的PCP干預(yù)能增加獼猴應(yīng)急狀態(tài)下的血液皮質(zhì)醇分泌。

關(guān)鍵詞：苯環(huán)己哌啶；獼猴；皮質(zhì)醇

Study of Phencyclidine Effects on Blood Cortisol in MacaquesZHANGYu-qin,ZHANGCan,SHIXin-yu.(DepartmentofQualityControl,ThreeGorgesUniversityRenheHospital,Yichang443001,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the blood cortisol changes after a constant amount of phencyclidine(PCP) intervention in macaques. MethodsFour Ganges macaques were chosen as experimental objects, a constant daily amount of PCP intervention was given,and the entire intervention lasted two weeks, respectively,on the fifth day before administration and after administration the blood was collected for cortisol testing, and the blood cortisol changes were observed.ResultsFor each of the pair comparison of blood cortisol before administration and 0-5 min after administration, 15-20 min after administration, 25-30 min after administration,the differences were statistically significant(P<0.05),while the pair comparison of blood cortisol before administration and 35-40 min after administration showed no statistically significant difference(P>0.05).ConclusionConstant amount of PCP intervention can increase blood cortisol secretion of the macaques in emergency state.

Key words:Phencyclidine; Macaques; Cortisol

收稿日期：2014-01-06修回日期：2014-10-22編輯：辛欣

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.06.050

中圖分類號：R335

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)06-1090-02