長壽區(qū)孕期人群珠蛋白生成障礙性貧血血液學(xué)篩查及基因檢測(cè)的研究＊

左凌燕，何澤真，車 顯，張 敏，文 皓

（重慶市長壽區(qū)婦幼保健院產(chǎn)科 401220）

珠蛋白生成障礙性貧血，又稱海洋性貧血、地中海貧血，是由于珠蛋白基因的缺陷使珠蛋白肽鏈合成減少或不能合成，導(dǎo)致紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白（Hb）的組成成分發(fā)生改變，引起的慢性溶血性貧血。珠蛋白生成障礙性貧血是全球最大的單基因遺傳病之一，被世界衛(wèi)生組織列為危害人類健康的6種常見病之一［1］。在中國，珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶率為1.00%～23.00%，廣泛分布于我國南方地區(qū)，主要型別為α-珠蛋白生成障礙性貧血和β-珠蛋白生成障礙性貧血［2］。廣東、廣西、海南、四川、重慶等地區(qū)為高發(fā)區(qū)域。重型α-珠蛋白生成障礙性貧血是致死性的出生缺陷，重型β-珠蛋白生成障礙性貧血出生1年內(nèi)發(fā)病，病情呈進(jìn)行性加重，僅能依靠輸血和去鐵治療維持生命，且花費(fèi)巨大。未經(jīng)治療者多于未成年之前夭折。目前臨床上仍然缺乏有效治療手段。因此，通過產(chǎn)前篩查，對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)的胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷，以期淘汰重型珠蛋白生成障礙性貧血患兒是目前國際上公認(rèn)的預(yù)防珠蛋白生成障礙性貧血的最有效的途徑。本研究通過Hb成分分析和基因檢測(cè)的方法篩查長壽區(qū)孕期人群珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者，以期對(duì)產(chǎn)前診斷和遺傳咨詢提供依據(jù)和指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集本院產(chǎn)科2013年1月至2014年10月就診的1 760名孕婦，進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血知識(shí)宣傳，對(duì)其進(jìn)行Hb成分分析，統(tǒng)計(jì)受檢者信息及檢驗(yàn)結(jié)果。對(duì)Hb成分分析結(jié)果陽性者，簽署知情同意書，進(jìn)一步做珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)，并對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的基因缺陷型別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。對(duì)珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)結(jié)果為陽性者，其配偶加做珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)。

1.2 方法

1.2.1 Hb成分分析檢查［3］（1）對(duì)樣本采用比色法進(jìn)行紅細(xì)胞孵育滲透脆性實(shí)驗(yàn)，比值小者，紅細(xì)胞抵抗力較小，脆性增加。反之抵抗力增大。正常參考范圍為：成人65%～100%，結(jié)果小于65%為陽性。（2）電阻抗法測(cè)定平均紅細(xì)胞體積（MCV）及紅細(xì)胞體積分布寬度（RDW），RDW 正常參考范圍為小于或等于15.0%，MVC 正常參考范圍為80～100fL，不在此范圍內(nèi)即為陽性。（3）比色法測(cè)定Hb，女性正常參考范圍為110～150g／L，＜110g／L為陽性。（4）采用瓊脂糖凝膠電泳法測(cè)定Hb（A＋F）、Hb（A2）含量，Hb（A＋F）正常參考范圍為成人96.50%～97.50%，Hb（A2）正常參考范圍為2.5%～3.5%，不在此范圍內(nèi)為陽性。若堿性電泳顯示Hb（A2）下降，主要見于α輕型珠蛋白生成障礙性貧血；若堿性電泳顯示Hb（A＋F）下降，則懷疑β輕型珠蛋白生成障礙性貧血，不排除復(fù)合α珠蛋白生成障礙性貧血。

1.2.2 珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)［4］珠蛋白生成障礙性貧血血液學(xué)篩查陽性者采用PCR 技術(shù)和基因測(cè)序技術(shù)進(jìn)行基因檢測(cè)分析。對(duì)基因檢測(cè)為攜帶者的孕婦再對(duì)其配偶進(jìn)行基因檢測(cè)。主要檢測(cè)我國常見的17種β珠蛋白生成障礙性貧血基因突變和3種常見的α珠蛋白生成障礙性貧血基因缺失及3個(gè)最常見α珠蛋白生成障礙性貧血基因突變位點(diǎn)。

1.3 觀察指標(biāo) （1）在告知孕婦并取得同意的情況下，觀察Hb成分分析檢查結(jié)果，與正常參考值進(jìn)行比較，統(tǒng)計(jì)初次篩查結(jié)果為陽性的孕婦信息。（2）基因檢測(cè)情況：通過PCR 技術(shù)與基因測(cè)序技術(shù)檢測(cè)我國常見的17種β珠蛋白生成障礙性貧血基因突變和3種常見的α珠蛋白生成障礙性貧血基因缺失及3個(gè)最常見α珠蛋白生成障礙性貧血基因突變位點(diǎn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，結(jié)果的描述主要使用絕對(duì)數(shù)和構(gòu)成比（%），為了方便對(duì)結(jié)果的分析和對(duì)比采用圖表統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié) 果

2.1 Hb成分分析結(jié)果 自2013年1月至2014年10月，對(duì)在本院就診的1 760例孕期人群進(jìn)行Hb成分分析，作為珠蛋白生成障礙性貧血初篩的方法。其中懷疑為α-珠蛋白生成障礙性貧血者27例，陽性率為1.53%，懷疑為β-珠蛋白生成障礙性貧血者25例，陽性率為1.42%，異常Hb帶為5例，陽性率0.28%，總計(jì)陽性率為3.24%。具體結(jié)果如下。

2.1.1 血常規(guī)及異常Hb帶檢查結(jié)果 1 760例受檢者中，紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)結(jié)果陽性為41例，且均為偏低；RDW實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性為384例；MCV 實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性為113例，其中大于100為59例，＜80為54例；Hb實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性為181例；5名檢測(cè)到異常Hb帶但均未檢測(cè)Hb H 包涵體，圖表統(tǒng)計(jì)見圖1。

2.1.2 Hb堿性電泳結(jié)果 1 760例受檢者中，Hb成分分析結(jié)果正常1 613例，占比91.65%；Hb（A2）堿性電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性為50例；Hb（A＋F）堿性電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性為51例。

圖1 血常規(guī)及異常Hb帶檢測(cè)情況

2.2 珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)結(jié)果 血液篩查為陽性的孕婦對(duì)其珠蛋白生成障礙性貧血基因檢查，檢測(cè)為攜帶者的婦女進(jìn)一步檢查其配偶基因，在2013年1月至2014年10月，共計(jì)有465名受檢者進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)，其中，男27名，女438名。438名女性中，76名診斷為α珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者，62名診斷為β珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者，女性人群陽性率為31.51%；27名男性中，4名α珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者，5名診斷為β珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者，男性人群陽性率為33.33%。見表1。珠蛋白生成障礙性貧血基因分型檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)見表2。本次研究共檢測(cè)出3對(duì)夫妻為同型珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者，均前往上級(jí)醫(yī)院行產(chǎn)前診斷，最終3例胎兒均明確為珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者。

表1 珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)情況

表2 珠蛋白生成障礙性貧血基因分型檢驗(yàn)缺陷位點(diǎn)情況

3 討 論

珠蛋白生成障礙性貧血是一種先天的血液疾病，和父母的遺傳有關(guān)?；颊叩募t細(xì)胞較脆弱且容易死亡，其帶氧能力不足，超過某種程度無法正常生活；是一種常染色體隱性基因遺傳，在四川、重慶、云南等省發(fā)病率較高［5-7］，基因攜帶率為6.00%左右，目前無較好的治療方法［8］。若夫妻為同型地中海型貧血的帶因者，每次懷孕，其子女有1／4的機(jī)會(huì)為正常，1／2的機(jī)會(huì)為攜帶者，另1／4的機(jī)會(huì)為重型地中海型貧血患者。在珠蛋白生成障礙性貧血的診斷方法中［9-12］，Hb成分分析作為孕期人群大面積篩查的方法［13］，是一種綜合性檢查方法，根據(jù)其檢查結(jié)果結(jié)合鏡檢血紅蛋白H 包涵體，給出綜合性的建議與解釋，是珠蛋白生成障礙性貧血初步篩查的首選方法。對(duì)初篩結(jié)果陽性、血常規(guī)異常者進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)［14-16］，是珠蛋白生成障礙性貧血檢查的金標(biāo)準(zhǔn)，可以直接確診，避免漏診、誤診，確定患者的基因型，作為遺傳咨詢依據(jù)，指導(dǎo)產(chǎn)前診斷，同時(shí)預(yù)測(cè)家族成員的珠蛋白生成障礙性貧血發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，指導(dǎo)婚育。本研究通過對(duì)長壽地區(qū)孕期人群珠蛋白生成障礙性貧血中流行病學(xué)研究，實(shí)施正規(guī)的珠蛋白生成障礙性貧血基因檢查，得出本地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血發(fā)病率。采用PCR 和反向斑點(diǎn)雜交、RDB 技術(shù)是針對(duì)中國人群特點(diǎn)進(jìn)行珠蛋白生成障礙性貧血確診的最佳方案。通過對(duì)長壽地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血臨床觀察與統(tǒng)計(jì)分析，建立一套針對(duì)孕婦的常規(guī)珠蛋白生成障礙性貧血篩查模式，預(yù)防珠蛋白生成障礙性貧血出生缺陷，填補(bǔ)此病在長壽區(qū)產(chǎn)前篩查領(lǐng)域研究的空白。

本研究對(duì)象1 760例，懷疑為α-珠蛋白生成障礙性貧血者27例，陽性率為1.53%，懷疑為β-珠蛋白生成障礙性貧血者25例，陽性率為1.42%，異常Hb帶為5例，陽性率0.28%，總計(jì)陽性率為3.42%。為得到1 760例孕婦珠蛋白生成障礙性貧血發(fā)病率的準(zhǔn)確信息，對(duì)檢驗(yàn)為陽性的孕婦進(jìn)行基因檢測(cè)，對(duì)確有攜帶致病基因的孕婦其配偶再進(jìn)行基因檢測(cè)，以指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育，珠蛋白生成障礙性貧血致病基因?yàn)槌Ｈ旧w隱性遺傳，若孕婦不攜帶致病基因，除基因突變外不可能生育患兒，若孕婦攜帶致病基因，則有必要對(duì)其配偶進(jìn)行基因檢測(cè)，進(jìn)一步評(píng)估生育珠蛋白生成障礙性貧血患兒的可能，若其配偶也為攜帶者，有1／4的可能生育出患兒，可提供產(chǎn)前診斷和遺傳咨詢依據(jù)，為孕期婦女是否繼續(xù)妊娠提供決策的依據(jù)［17］。

綜上所述，珠蛋白生成障礙性貧血在四川、重慶地區(qū)的發(fā)病率高，目前國內(nèi)外均無有效的根治性方法，群眾對(duì)此遺傳性疾病還未引起廣泛關(guān)注，應(yīng)大力開展珠蛋白生成障礙性貧血知識(shí)的普及與宣傳工作，在產(chǎn)前檢查中常規(guī)珠蛋白生成障礙性貧血的篩查，為基因診斷和遺傳咨詢提供基礎(chǔ)，防止重度新生兒珠蛋白生成障礙性貧血的出生，對(duì)優(yōu)生優(yōu)育和提高人口素質(zhì)具有重要意義。

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