• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    缺血后處理對大鼠腎缺血/再灌注損傷及p38MAPK活性的影響

    2015-03-04 03:35:39王雪巖姜秀良梁立升李愛芝馬宏仲馬加海
    醫(yī)學(xué)綜述 2015年11期
    關(guān)鍵詞:后處理肌酐活化

    李 濤,王雪巖,姜秀良,梁立升,李愛芝,馬宏仲,馬加?!?/p>

    (1.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬煙臺毓璜頂醫(yī)院麻醉科,山東 煙臺264000; 2.煙臺市疾病預(yù)防控制中心,山東 煙臺264000)

    ?

    缺血后處理對大鼠腎缺血/再灌注損傷及p38MAPK活性的影響

    李濤1△,王雪巖2,姜秀良1,梁立升1,李愛芝1,馬宏仲1,馬加海1※

    (1.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬煙臺毓璜頂醫(yī)院麻醉科,山東 煙臺264000; 2.煙臺市疾病預(yù)防控制中心,山東 煙臺264000)

    摘要:目的研究缺血后處理(IPO)對大鼠腎缺血/再灌注損傷(IRI)及p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)活性的影響。方法將24只SD大鼠依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為3組,各8只。對照(S)組:僅結(jié)扎右側(cè)腎蒂,左腎蒂游離;缺血/再灌注(IR)組:結(jié)扎右側(cè)腎蒂,夾閉左側(cè)腎蒂60 min后,開放灌注24 h;IPO組:腎臟缺血60 min后,進(jìn)行10 s灌注、10 s阻斷,共6個循環(huán)的IPO,然后開放灌注24 h,余同IR組。檢測血尿素氮(BUN)、肌酐,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測腎組織腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素1(IL-1)水平,Western blot法檢測腎組織磷酸化p38MAPK蛋白表達(dá),觀察腎組織的病理學(xué)變化。結(jié)果與S組比較,IR組和IPO組血BUN、肌酐,腎TNF-α、IL-1、p38MAPK蛋白表達(dá)量及組織病理評分顯著增加(P<0.05);IPO組各指標(biāo)較IR組顯著下降(P<0.05)。結(jié)論IPO能減輕腎IRI,其機(jī)制與抑制p38MAPK活化,進(jìn)而抑制炎性因子釋放有關(guān)。

    關(guān)鍵詞:缺血/再灌注損傷;腎臟;缺血后處理;p38絲裂原活化蛋白激酶

    腎臟缺血/再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury,IRI)是引起急性腎衰竭的重要原因之一,缺血后處理(ischemic postconditioning,IPO)是一種新的減輕器官IRI的方法,可操作性強(qiáng),對心、腦等器官IRI有確切的保護(hù)作用[1-2],但對腎臟IRI的研究結(jié)果不一,機(jī)制尚不明確。p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)是MAPK的一個亞類。研究發(fā)現(xiàn),腎臟IRI后p38MAPK活化,進(jìn)而調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白細(xì)胞介素1(interleukin 1,IL-1)等炎性細(xì)胞因子釋放增加,導(dǎo)致腎臟損傷[3]。本研究擬探討IPO對大鼠腎臟IRI及p38MAPK活性的影響。

    1材料與方法

    1.1材料選擇清潔級健康8~ 10周SD雄性大鼠(購自煙臺綠葉實(shí)驗(yàn)動物中心)24只,體質(zhì)量210~240 g,動物許可證號SYXY(魯)20030020。所有動物實(shí)驗(yàn)前12 h禁食,自由飲水。依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為3組:對照(S)組、缺血/再灌注(IR)組、IPO組,每組8只。

    1.2方法以戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔注射麻醉,將所有大鼠麻醉后固定于操作臺上。S組:尾靜脈輸注生理鹽水,腹部正中切口進(jìn)入腹腔,小心分離出雙側(cè)腎蒂,僅結(jié)扎右側(cè)腎蒂,左腎蒂游離。IR組:結(jié)扎右側(cè)腎蒂,用無損傷微動脈夾夾閉左側(cè)腎蒂60 min后,松開動脈夾后充分開放灌注24 h,腎臟由暗紅色恢復(fù)鮮紅色即可確認(rèn)血流恢復(fù)。IPO組:腎臟缺血60 min后,進(jìn)行開放灌注10 s、阻斷10 s 共6個循環(huán)的IPO,然后充分開放灌注24 h。

    1.3標(biāo)本留取再灌注24 h后,從下腔靜脈抽取靜脈血2~4 mL置于抗凝管內(nèi),靜置4 h后分離血清,-70 ℃保存待用。分離左側(cè)腎臟,濾紙吸干表面水分,將腎臟縱剖后取腎皮質(zhì)100~200 mg,精確稱重后用剪刀剪碎移入勻漿管內(nèi)按溶質(zhì)質(zhì)量/溶液體積=1/9的比例加入4 ℃生理鹽水,在冰浴中進(jìn)行勻漿,制備成100 mg/L的腎組織勻漿液,以4 ℃低溫離心機(jī)離心后取上清液于液氮速凍后置于-70 ℃冰箱中保存待用。同時(shí)摘取部分左腎組織置于4%多聚甲醛固定。

    1.4檢測指標(biāo)采用全自動生化分析儀(Siemens-ADVIA2400)常規(guī)生化分析法測定血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測腎組織勻漿(上清)TNF-α、IL-1水平。Western blot法檢測腎組織磷酸化p38MAPK蛋白表達(dá)。通過AlphaEase FC軟件分析蛋白相對表達(dá)量,以β肌動蛋白為內(nèi)參照,膠片掃描并照相,測定各條帶A值。以目的蛋白和β肌動蛋白條帶A值之比反映p38MAPK蛋白表達(dá)程度。左腎組織常規(guī)石蠟包埋,常規(guī)制片蘇木精-伊紅染色,光學(xué)顯微鏡觀察病理變化,按照J(rèn)ablonski等[4]描述的病理分級法將組織損傷程度分為0~4級。0級:正常;1級:單個細(xì)胞的壞死伴核分裂;2級:相鄰近曲小管所有細(xì)胞壞死,但周圍小管存活;3級:限定于近曲小管遠(yuǎn)端1/3細(xì)胞的壞死并擴(kuò)展到皮質(zhì)和髓質(zhì)交界處;4級:近曲小管整段壞死。

    2結(jié)果

    2.1各組大鼠血清BUN、肌酐和腎組織TNF-α、IL-1水平的變化與S組比較,IR組和IPO組血BUN和肌酐水平顯著增加(P<0.05);與IR組比較,IPO組血BUN和肌酐水平顯著下降(P<0.05)。 與S組比較,IR組和IPO組腎組織TNF-α、IL-1水平顯著升高(P<0.05);與IR組比較,IPO組TNF-α、IL-1水平顯著下降(P<0.05)。見表1。

    表1 各組大鼠血清BUN、肌酐和腎組織

    BUN:血尿素氮; TNF-α:腫瘤壞死因子α;IL-1:白細(xì)胞介素1;S組:對照組;IR組:缺血/再灌注組;IPO組:缺血后處理組;a與S組比較,P<0.05;b與IR組比較,P<0.05

    2.2腎組織磷酸化p38MAPK蛋白表達(dá)及病理分級IR組和IPO組p38MAPK蛋白相對表達(dá)量顯著高于S組(P<0.05),IPO組p38MAPK蛋白相對表達(dá)量顯著低于IR組(P<0.05)。與S組比較,IR組和IPO組腎組織病理分級升高(P<0.05);與IR組比較,IPO組病理分級下降(P<0.05)。見表2。

    表2 各組大鼠腎組織磷酸化p38MAPK

    p38MAPK:p38絲裂原活化蛋白激酶;S組:對照組;IR組:缺血/再灌注組;IPO組:缺血后處理組;a與S組比較,P<0.05;b與IR組比較,P<0.05

    2.3腎組織病理學(xué)改變光鏡下S組腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)正常(圖1A);IR組見明顯腎組織病理學(xué)損傷,主要表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞脫落、基膜斷裂和腎小管阻塞,間質(zhì)有水腫、充血及炎性細(xì)胞浸潤(圖1B);IPO組腎臟組織學(xué)改變輕微,僅見少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、部分管腔擴(kuò)張、淋巴細(xì)胞浸潤(圖1C)。

    圖1 各組SD大鼠腎臟缺血/再灌注后處理的光鏡下形態(tài)學(xué)改變(HE染色,×100) A:對照組;B:缺血/再灌注組;C:缺血后處理組

    3討論

    本研究采用先結(jié)扎右側(cè)腎蒂,夾閉左側(cè)腎蒂60 min再灌注24 h制備腎臟缺血再灌注損傷模型,避免對側(cè)腎的代償作用。BUN、肌酐能密切反映腎細(xì)胞的受損情況,本研究中IR組肌酐、BUN水平明顯升高,腎組織損傷嚴(yán)重,說明成功建立腎IRI模型。

    急性缺血是急性腎衰竭的最常見原因,再灌注加重腎損傷,如何有效地減輕腎臟IRI是目前研究的熱點(diǎn)。IPO能否發(fā)揮保護(hù)作用,最關(guān)鍵的影響因素有兩個:循環(huán)次數(shù)和短暫復(fù)灌/缺血的持續(xù)時(shí)間。有學(xué)者研究了不同IPO方案抗大鼠腎IRI的作用,認(rèn)為6個循環(huán)10 s灌注/10 s阻斷的方案最佳[5]。因此本研究采用了此方案。結(jié)果表明,IPO組血清BUN和肌酐水平較IR組顯著降低,組織損傷亦減輕,說明IPO保護(hù)了腎臟的組織結(jié)構(gòu)與功能。腎臟IRI機(jī)制十分復(fù)雜,近年來白細(xì)胞聚集及急性期反應(yīng)的一些細(xì)胞炎性因子的作用日益受到重視,已證實(shí)腎缺血時(shí),腎組織局部可產(chǎn)生多種炎性介質(zhì),其中包括TNF-α、IL-1、IL-6等[6]。本研究結(jié)果顯示,IRI后腎組織TNF-α、IL-1水平也明顯增加,提示IRI后炎性因子釋放可能是導(dǎo)致腎臟組織結(jié)構(gòu)與功能損傷的重要原因。

    研究認(rèn)為,IPO的作用機(jī)制主要包括:氧自由基的生成減少,腺苷、一氧化氮等內(nèi)源性活性物質(zhì)的釋放及ATP敏感性鉀通道等[7-8]。p38MAPK信號通路是近年來發(fā)現(xiàn)的廣泛存在于各種動物細(xì)胞中的一條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,p38MAPK產(chǎn)生于胞質(zhì),可被多種胞外刺激激活,激活后移位入核而發(fā)揮作用[9]。有研究證明,p38MAPK信號通路參與IRI等多種因素所致炎癥反應(yīng)調(diào)控,缺血/再灌注期間,p38MAPK活化,單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等被激活后釋放TNF-α、IL-1、IL-6等炎性細(xì)胞因子,后者通過多種途徑參與細(xì)胞的損傷,而阻斷p38 MAPK信號通路能減輕腎臟IRI[10]。本研究結(jié)果顯示,腎IRI后磷酸化p38MAPK蛋白的表達(dá)水平升高,而IPO組表達(dá)水平降低,提示IPO能抑制大鼠腎臟IRI后p38MAPK的活化,減少TNF-α、IL-1等炎性因子的釋放,降低炎癥反應(yīng)程度,從而保護(hù)腎臟的組織結(jié)構(gòu)與功能。

    綜上所述,IPO能減輕腎臟IRI,其機(jī)制與抑制腎臟IRI后p38MAPK活化,從而抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)。

    參考文獻(xiàn)

    [1]Wang W,Tang T,Zhang P,etal.Postconditioning attenuates renal ischemia-reperfusion injury by preventing DAF down-regulation[J].J Urol,2010,183(6):2424-2431.

    [2]Kin H,Zhao ZQ,Sun HY,etal.Postconditioning attenuates myocardial ischemia reperfusion injury by inhibiting events in the early minutes of reperfusion[J].Cardiovasc Res,2004,62(1):74-85.

    [3]Park KM,Chen A,Bonventre JV.Prevention of kidney ischemia/reperfusion-induced functional injury and JNK,p38,and MAPK kinase activation by remote ischemic pretreatment[J].J Biol Chem,2001,276(15):11870-11876.

    [4]Jablonski P,Howden BO,Rae DA,etal.An experimental model for assessment of renal recovery from warm ischemia[J].Transplantation,1983,35(3):198-204.

    [5]云宇,段為鋼,陳鵬,等.不同缺血后處理方案抗大鼠腎缺血-再灌注損傷的作用[J].昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2009,30(4):31-35.

    [6]Daemen MA,de Vries B,Buurman WA.Apoptosis and inflammation in renal reperfusion injury[J].Transplantation,2002,73(11):1693-1700.

    [7]Zhao ZQ,Corvera JS,Halkos ME,etal.Inhibition of myocardial injury by ischemic postconditioning during reperfusion:comparison with ischemic preconditioning[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol,2003,285(2):H579-588.

    [8]Selzner N,Boehnert M,Selzner M.Preconditioning, postconditioning,and remote conditioning in solid organ transplantation:basic mechanisms and translational applications[J].Transplant Rev, 2012,26(2):115-124.

    [9]Cuschieri J,Maier RV.Mitogen-activated protein kinase(MAPK)[J].Crit Care Med,2005,33(12):417-441.

    [10]Li R,Ding T,Liu X,etal.Influence of SB203580 on cell apoptosis and P38MAPK in renal ischemia/reperfusion injury[J].J Huazhong Univ Sci Technology Med Sci,2006,26(1):50-52.

    關(guān)于作者署名的相關(guān)事項(xiàng)

    1.署名的意義:①標(biāo)明論文的責(zé)任人,文責(zé)自負(fù)。②醫(yī)學(xué)論文是醫(yī)學(xué)科技成果的總結(jié)和記錄,是作者用智慧辛勤勞動的成果,是應(yīng)得的榮譽(yù),也是論文版權(quán)歸署作者的一個聲明。③便于編輯、讀者與作者的聯(lián)系、溝通,互相探討,共同提高。作者姓名在文題下按序排列,排序應(yīng)在投稿時(shí)確定,在編排過程中不應(yīng)再做更改;作者單位名稱要寫全稱(到科室)、所在城市及郵政編碼,位于作者署名下方;多位作者不同單位時(shí)要于姓名右上角標(biāo)明與單位排序相同的號碼。

    2.作者署名應(yīng)具備下列條件:①參與選題和設(shè)計(jì),或參與資料的分析和解釋者。②起草或修改論文中關(guān)鍵性理論或其他主要內(nèi)容者。③能對編輯部的修改意見進(jìn)行核修,在學(xué)術(shù)界進(jìn)行答辯,并最終同意該文發(fā)表者。僅參與獲得資金或收集資料者不宜列為作者,對該研究有貢獻(xiàn)者應(yīng)列入志謝部分。在每篇文章的作者中需要確定一位能對該論文全面負(fù)責(zé)的通訊作者,而且在投稿時(shí)確定,如在來稿中未特殊標(biāo)明,則視第一作者為通訊作者,并于姓名右上角標(biāo)注※。作者中如有外籍作者,應(yīng)附本人親筆簽名同意在本刊發(fā)表的函件。集體署名的論文于文題下列署名單位,于文末列出整理者姓名,并注明通訊作者姓名、單位及郵政編碼。

    Effects of Ischemic Postconditioning on Ischemia Reperfusion Injury and Expression of p38MAPK Protein in Rat KidneyLITao1,WANGXue-yan2,JIANGXiu-liang1,LIANGLi-sheng1,LIAi-zhi1,MAHong-zhong1,MAJia-hai1.(1.DepartmentofAnesthesiology,YantaiYuhuangdingHospital,QingdaoUniversityMedicalCollege,Yantai264000,China; 2.YantaiCenterforDiseaseControlandPrevention,Yantai264000,China)

    Abstract:ObjectiveTo investigate the effects of ischemic postconditioning on ischemia reperfusion injury(IRI)and expression of p38 mitogen-activated protein kinase(p38MAPK) protein in rat kidney.MethodsA total of 24 SD rats were allocated randomly into 3 groups(n=8 per group).Sham (S) group:rats received continuous intravenous infusion of normal saline and clamping the right renal pedicles.IR group(IR):renal IRI was induced by clamping both renal pedicles 60 minutes followed by 24 h reperfusion.Ischemic postconditioning(IPO) group:ischemic postconditioning was given six cycles of 10 s reperfusion/10 s occlusion followed by 24 h reperfusion.Serum blood urea nitrogen(BUN), creatinine(Cr) was detected.ELISA was used to detect the tumor necrosis factor α (TNF-α),interleukin 1 (IL-1) in kidney.Western blot was applied to detect the expression of p38MAPK protein.Renal histopathology lesions were also examined.ResultsCompared with group S,the serum BUN and Cr,renal TNF-α and IL-1,expression of p38MAPK protein increased significantly in group IR and group IPO(P<0.05).Compared with group IR,all indexes in group IPO decreased significantly(P<0.05).ConclusionIPO can attenuate renal IRI in rats.The mechanism is related to inhibition of p38MAPK expression and inflammatory factor release.

    Key words:Ischemia reperfusion injury; Kidney; Ischemic postconditioning; p38 mitogen-activated protein kinase

    收稿日期:2013-07-01修回日期:2014-10-23編輯:伊姍

    基金項(xiàng)目:煙臺市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2009155-12)

    doi:10.3969/j.issn.1006-2084.2015.11.048

    中圖分類號:R692.9

    文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

    文章編號:1006-2084(2015)11-2049-03

    猜你喜歡
    后處理肌酐活化
    無Sn-Pd活化法制備PANI/Cu導(dǎo)電織物
    果樹防凍措施及凍后處理
    小學(xué)生活化寫作教學(xué)思考
    乏燃料后處理的大廠夢
    能源(2018年10期)2018-12-08 08:02:48
    乏燃料后處理困局
    能源(2016年10期)2016-02-28 11:33:30
    血肌酐水平對慢性心力衰竭患者預(yù)后判斷的臨床意義
    肌酐-胱抑素C公式在糖尿病腎病超濾過檢出中的作用
    判斷腎功能的可靠旨標(biāo)血肌酐
    基于B-H鍵的活化對含B-C、B-Cl、B-P鍵的碳硼烷硼端衍生物的合成與表征
    血肌酐、胱抑素C、簡化MDRD和Le Bricon公式在評估腎移植術(shù)后腎功能中的作用
    直男gayav资源| 日本黄色片子视频| 午夜老司机福利剧场| av一本久久久久| www.色视频.com| 男女啪啪激烈高潮av片| 午夜日本视频在线| 中文欧美无线码| 亚洲精品,欧美精品| 男人和女人高潮做爰伦理| 又爽又黄a免费视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 国产毛片a区久久久久| 麻豆成人av视频| 97超碰精品成人国产| xxx大片免费视频| 男女国产视频网站| 国精品久久久久久国模美| 精品少妇久久久久久888优播| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产亚洲av嫩草精品影院| 少妇丰满av| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 91aial.com中文字幕在线观看| 91久久精品电影网| 99精国产麻豆久久婷婷| 日韩av不卡免费在线播放| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日韩欧美精品v在线| 精品国产三级普通话版| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 久久人人爽人人片av| 毛片女人毛片| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 在线观看一区二区三区激情| 国产亚洲一区二区精品| 免费电影在线观看免费观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 伊人久久精品亚洲午夜| .国产精品久久| 中文天堂在线官网| 2022亚洲国产成人精品| 神马国产精品三级电影在线观看| 日韩中字成人| 国内揄拍国产精品人妻在线| 在线观看三级黄色| 国产高清有码在线观看视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久精品久久久久久久性| 久久久久性生活片| 国产精品久久久久久久久免| 晚上一个人看的免费电影| 欧美极品一区二区三区四区| 国产日韩欧美在线精品| 尾随美女入室| 两个人的视频大全免费| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲第一区二区三区不卡| .国产精品久久| 国产高潮美女av| 三级国产精品欧美在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 又大又黄又爽视频免费| 国产一区亚洲一区在线观看| 综合色丁香网| 精品久久久精品久久久| 丝袜脚勾引网站| 免费观看的影片在线观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产大屁股一区二区在线视频| 人人妻人人看人人澡| 老司机影院毛片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久久久久九九精品二区国产| 国产黄频视频在线观看| 中国三级夫妇交换| 大片电影免费在线观看免费| 精品国产乱码久久久久久小说| 日韩一本色道免费dvd| 91久久精品电影网| 国产精品久久久久久精品电影| 青青草视频在线视频观看| 一级毛片我不卡| 亚洲成人久久爱视频| 国产成人免费无遮挡视频| 能在线免费看毛片的网站| 久久久久性生活片| 99热网站在线观看| 搡老乐熟女国产| 一级a做视频免费观看| 久久影院123| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 秋霞在线观看毛片| 特大巨黑吊av在线直播| av黄色大香蕉| 波多野结衣巨乳人妻| 免费少妇av软件| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 中文字幕av成人在线电影| 看非洲黑人一级黄片| 99久久中文字幕三级久久日本| 九色成人免费人妻av| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 99热网站在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲av免费高清在线观看| 色视频www国产| 欧美极品一区二区三区四区| 日韩成人伦理影院| 国产成人精品福利久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品国产三级专区第一集| 色吧在线观看| 国产av国产精品国产| 男插女下体视频免费在线播放| av国产久精品久网站免费入址| 三级国产精品片| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产男女超爽视频在线观看| 国产精品.久久久| 日韩欧美 国产精品| 一本色道久久久久久精品综合| 18禁在线播放成人免费| 一本一本综合久久| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国内精品美女久久久久久| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 午夜激情久久久久久久| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲成人一二三区av| 色5月婷婷丁香| 九九在线视频观看精品| 哪个播放器可以免费观看大片| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产在视频线精品| 伊人久久国产一区二区| 18+在线观看网站| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 九九爱精品视频在线观看| 国产综合懂色| 三级国产精品片| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久久久久国产a免费观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品久久久久久av不卡| 国产 精品1| 久久久久久久久久久丰满| 久久久久久久国产电影| 国产伦理片在线播放av一区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 日韩人妻高清精品专区| 在线观看av片永久免费下载| 26uuu在线亚洲综合色| 国产午夜精品一二区理论片| 在线 av 中文字幕| 韩国高清视频一区二区三区| 99久久人妻综合| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产探花在线观看一区二区| 青春草视频在线免费观看| 搞女人的毛片| 永久网站在线| 22中文网久久字幕| 青春草亚洲视频在线观看| av一本久久久久| 色播亚洲综合网| 国产精品久久久久久久久免| 成年人午夜在线观看视频| 少妇熟女欧美另类| 色婷婷久久久亚洲欧美| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美bdsm另类| 亚洲最大成人av| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品久久久噜噜| 亚洲在久久综合| 日本色播在线视频| 精品少妇久久久久久888优播| 一级av片app| 成年女人在线观看亚洲视频 | 亚洲国产日韩一区二区| av在线观看视频网站免费| 国产一区二区在线观看日韩| 观看美女的网站| 乱系列少妇在线播放| 国产91av在线免费观看| 成人欧美大片| 免费观看av网站的网址| 搡女人真爽免费视频火全软件| 91久久精品国产一区二区成人| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 联通29元200g的流量卡| 成人免费观看视频高清| 日韩中字成人| 毛片一级片免费看久久久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产探花在线观看一区二区| 女人久久www免费人成看片| 3wmmmm亚洲av在线观看| av国产精品久久久久影院| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲丝袜综合中文字幕| 99精国产麻豆久久婷婷| 精品久久久久久久久亚洲| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一区二区三区免费毛片| 国产 一区 欧美 日韩| 全区人妻精品视频| 亚洲国产欧美在线一区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| av线在线观看网站| 久久亚洲国产成人精品v| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲最大成人手机在线| 日韩电影二区| 插逼视频在线观看| 亚洲自拍偷在线| 我要看日韩黄色一级片| 免费在线观看成人毛片| 欧美激情国产日韩精品一区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 一本色道久久久久久精品综合| 在线观看美女被高潮喷水网站| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美成人精品欧美一级黄| 少妇的逼水好多| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 只有这里有精品99| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 欧美一级a爱片免费观看看| 全区人妻精品视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产视频首页在线观看| 性色av一级| 欧美日本视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品国产三级专区第一集| 观看美女的网站| 亚洲精品一区蜜桃| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产男女内射视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 高清毛片免费看| 老司机影院毛片| 亚洲综合色惰| 国内精品宾馆在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 在线看a的网站| 深爱激情五月婷婷| 国产人妻一区二区三区在| 久久久久久久久久成人| 99热国产这里只有精品6| 久久国内精品自在自线图片| a级一级毛片免费在线观看| 免费看a级黄色片| 午夜日本视频在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产精品久久久久久久电影| 麻豆国产97在线/欧美| 一级毛片我不卡| 亚洲人成网站高清观看| 免费av不卡在线播放| 国产精品无大码| 亚洲色图综合在线观看| av国产精品久久久久影院| 极品少妇高潮喷水抽搐| 大话2 男鬼变身卡| 视频中文字幕在线观看| 99热全是精品| 一个人看视频在线观看www免费| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 日本爱情动作片www.在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 丝袜美腿在线中文| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲欧美精品自产自拍| 2018国产大陆天天弄谢| 日本黄色片子视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 亚洲美女视频黄频| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久久久久国产电影| 日本黄大片高清| 综合色av麻豆| 亚洲精品一区蜜桃| 日韩欧美 国产精品| 青青草视频在线视频观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 少妇的逼水好多| 亚洲国产av新网站| 亚洲精品日本国产第一区| 国产免费又黄又爽又色| av在线蜜桃| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久鲁丝午夜福利片| 大话2 男鬼变身卡| 看免费成人av毛片| 国产极品天堂在线| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产 一区精品| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 美女cb高潮喷水在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 少妇 在线观看| 国产免费又黄又爽又色| 黄色一级大片看看| 久久久亚洲精品成人影院| av免费观看日本| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲av不卡在线观看| 麻豆成人av视频| 九九在线视频观看精品| 麻豆久久精品国产亚洲av| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久久国产一区二区| 国模一区二区三区四区视频| 中文字幕免费在线视频6| 内地一区二区视频在线| 18+在线观看网站| 女人久久www免费人成看片| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 大片电影免费在线观看免费| 99热这里只有是精品在线观看| 免费看光身美女| 搡女人真爽免费视频火全软件| 久久人人爽人人片av| 久久女婷五月综合色啪小说 | 少妇人妻精品综合一区二区| kizo精华| 视频区图区小说| 国产亚洲精品久久久com| 人妻 亚洲 视频| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品99久久久久久久久| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 免费看日本二区| 天堂中文最新版在线下载 | 国产精品一区www在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 日韩伦理黄色片| 亚洲精品成人av观看孕妇| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 精品一区二区免费观看| 三级国产精品片| 1000部很黄的大片| av一本久久久久| 观看免费一级毛片| 2022亚洲国产成人精品| 日韩免费高清中文字幕av| 可以在线观看毛片的网站| 日韩中字成人| 青春草国产在线视频| av天堂中文字幕网| 我要看日韩黄色一级片| 男女那种视频在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 最近手机中文字幕大全| 国产精品人妻久久久久久| 精品人妻视频免费看| 精品久久久精品久久久| 特级一级黄色大片| 少妇人妻久久综合中文| 三级国产精品片| 欧美xxⅹ黑人| 深爱激情五月婷婷| 免费少妇av软件| 国产极品天堂在线| 亚洲四区av| 亚洲经典国产精华液单| 日本午夜av视频| 午夜爱爱视频在线播放| 精品熟女少妇av免费看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 高清在线视频一区二区三区| 老司机影院毛片| 听说在线观看完整版免费高清| 99久国产av精品国产电影| 成年版毛片免费区| 国产精品三级大全| 日本一本二区三区精品| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久久久久网色| 国产精品一区二区在线观看99| 免费观看无遮挡的男女| 人妻 亚洲 视频| 少妇人妻 视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 日本熟妇午夜| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久99热这里只有精品18| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲自拍偷在线| 美女cb高潮喷水在线观看| 中文资源天堂在线| 亚洲av.av天堂| 国产精品久久久久久精品古装| 一个人看视频在线观看www免费| 欧美精品一区二区大全| 少妇人妻久久综合中文| 一区二区三区乱码不卡18| 狂野欧美激情性bbbbbb| 精品一区二区三卡| 国产av码专区亚洲av| 国产伦精品一区二区三区视频9| 一区二区三区四区激情视频| 久久久久久久国产电影| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲精品成人av观看孕妇| 午夜免费男女啪啪视频观看| 成人国产麻豆网| 五月天丁香电影| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美成人一区二区免费高清观看| 免费黄频网站在线观看国产| 国产av码专区亚洲av| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美一级a爱片免费观看看| 少妇被粗大猛烈的视频| 最近的中文字幕免费完整| 国产老妇女一区| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 成人一区二区视频在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品久久久久久久久亚洲| 久久久久久久大尺度免费视频| 男人舔奶头视频| 99久久精品国产国产毛片| 最近最新中文字幕大全电影3| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久99热6这里只有精品| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产亚洲一区二区精品| 日韩人妻高清精品专区| 乱系列少妇在线播放| 我的老师免费观看完整版| 婷婷色综合www| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 成人亚洲精品一区在线观看 | 欧美另类一区| 一级毛片aaaaaa免费看小| 啦啦啦在线观看免费高清www| av在线app专区| 久久精品国产自在天天线| 国产一级毛片在线| 亚洲熟女精品中文字幕| 黄色视频在线播放观看不卡| 身体一侧抽搐| 好男人在线观看高清免费视频| 1000部很黄的大片| 亚洲av免费高清在线观看| 身体一侧抽搐| 久久久久精品性色| 久久热精品热| 少妇人妻精品综合一区二区| 午夜日本视频在线| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲图色成人| 欧美日韩精品成人综合77777| 久久精品国产亚洲网站| 永久免费av网站大全| 六月丁香七月| 搞女人的毛片| 日韩强制内射视频| 黄色欧美视频在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 一级av片app| 只有这里有精品99| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 欧美xxⅹ黑人| 日韩欧美精品免费久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久久久久久午夜电影| 成人特级av手机在线观看| 高清在线视频一区二区三区| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲电影在线观看av| 亚洲色图综合在线观看| 日韩成人伦理影院| 欧美少妇被猛烈插入视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 又大又黄又爽视频免费| 久久精品久久久久久久性| 男女啪啪激烈高潮av片| 在线 av 中文字幕| 国产熟女欧美一区二区| 色播亚洲综合网| 午夜免费男女啪啪视频观看| 一级a做视频免费观看| 国产色婷婷99| 高清日韩中文字幕在线| 内地一区二区视频在线| 国产精品久久久久久精品电影| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 日韩中字成人| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 最近最新中文字幕免费大全7| 夜夜爽夜夜爽视频| xxx大片免费视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品爽爽va在线观看网站| 麻豆成人av视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲av二区三区四区| 嫩草影院入口| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 精品少妇久久久久久888优播| 白带黄色成豆腐渣| 在线观看免费高清a一片| 最近中文字幕2019免费版| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日本免费在线观看一区| 日韩亚洲欧美综合| 在线观看av片永久免费下载| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美bdsm另类| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 97超视频在线观看视频| 高清在线视频一区二区三区| 日日撸夜夜添| 日本三级黄在线观看| 成人国产av品久久久| xxx大片免费视频| 国产在线男女| av一本久久久久| 国产毛片在线视频| 国产高清有码在线观看视频| 大香蕉久久网| 亚洲综合精品二区| 亚洲av日韩在线播放| 麻豆乱淫一区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 涩涩av久久男人的天堂| 777米奇影视久久| 欧美潮喷喷水| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 欧美日韩视频精品一区| 欧美高清性xxxxhd video| 精品一区二区免费观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 美女主播在线视频| 久久久久网色| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲人与动物交配视频| av在线观看视频网站免费| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 少妇高潮的动态图| 精品久久久精品久久久| 国产成人精品福利久久| 日日撸夜夜添| 另类亚洲欧美激情| 久久6这里有精品| 99久久九九国产精品国产免费| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产成人精品一,二区| 嫩草影院精品99| 少妇高潮的动态图| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲av男天堂| 成人综合一区亚洲| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产一区有黄有色的免费视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 99re6热这里在线精品视频| 性色avwww在线观看| 国产极品天堂在线| 国内精品宾馆在线| 中文字幕av成人在线电影| 久久精品久久久久久久性| 国产一区二区在线观看日韩| 观看免费一级毛片| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲精品一二三| 午夜福利视频精品| 大话2 男鬼变身卡| 久久精品久久久久久久性|