產(chǎn)前應(yīng)激加劇慢性子代應(yīng)激誘導(dǎo)的子鼠學(xué)習(xí)記憶能力損傷

唐 偉，王正玉，程 娟，韓振敏，姚余有

產(chǎn)前應(yīng)激加劇慢性子代應(yīng)激誘導(dǎo)的子鼠學(xué)習(xí)記憶能力損傷

唐 偉，王正玉，程 娟，韓振敏，姚余有

摘要目的 探討產(chǎn)前應(yīng)激是否進一步加劇慢性應(yīng)激所致的6月齡雄性APPswe／PS1dE9子鼠學(xué)習(xí)記憶損傷及其可能機制。方法 以APPswe／PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠為研究對象，實驗分為產(chǎn)前慢性應(yīng)激－子代慢性應(yīng)激組（TT組）、產(chǎn)前慢性應(yīng)激－子代正常處理組（TC組）、產(chǎn)前正常處理－子代慢性應(yīng)激組（CT組）和產(chǎn)前正常處理－子代正常處理組（CC組）。應(yīng)用Morris水迷宮檢測子代小鼠的空間學(xué)習(xí)、記憶能力，通過HE染色觀察小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的病理組織形態(tài)，采用Congo red染色檢查小鼠腦組織的淀粉樣斑塊，采用Western blot法檢測小鼠海馬組織淀粉樣前體蛋白（APP）、淀粉樣前體蛋白β位點分裂酶1（BACE1）和β-淀粉樣蛋白1-42（Aβ42）的表達量，運用ELISA法檢測血清皮質(zhì)酮含量。結(jié)果 與CC組相比，CT 組小鼠的逃避潛伏期和游泳距離延長（P＜0.05），平臺象限游泳時間和穿越平臺次數(shù)減少（P＜0.05）；海馬CA3區(qū)損傷的神經(jīng)元數(shù)目明顯增加（P＜0.05），排列疏松紊亂，脫失現(xiàn)象明顯，核固縮、濃染；腦組織淀粉樣斑塊數(shù)目增多；海馬組織APP、BACE1 和Aβ42的表達量升高（P＜0.05）；血清皮質(zhì)酮濃度升高（P＜0.05）。與CT組相比，TT組小鼠的逃避潛伏期和游泳距離進一步延長（P＜0.05），平臺象限游泳時間和穿越平臺次數(shù)進一步減少（P＜0.05）；腦組織淀粉樣斑塊和海馬CA3區(qū)損傷的神經(jīng)元數(shù)目進一步增加（P＜0.05）；海馬組織APP、BACE1和Aβ42的表達量和血清皮質(zhì)酮濃度進一步升高（P＜0.05）。結(jié)論 產(chǎn)前應(yīng)激進一步加劇慢性應(yīng)激所致的子鼠學(xué)習(xí)記憶損傷，其機制可能與其升高小鼠血清皮質(zhì)酮水平，促進APP和BACE1表達，進而增加Aβ42的生成，最終引起海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷有關(guān)。

關(guān)鍵詞產(chǎn)前應(yīng)激；慢性應(yīng)激；皮質(zhì)酮；淀粉樣前體蛋白；學(xué)習(xí)記憶

2014－12－30接收

作者單位：安徽醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，合肥 230032

慢性應(yīng)激會導(dǎo)致下丘腦－垂體－腎上腺軸的過度激活和功能紊亂，損害大腦的認(rèn)知功能［1］。海馬

和前額葉是最易因應(yīng)激而損傷的腦區(qū)，與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)［2］。研究［3］表明，慢性應(yīng)激可導(dǎo)致實驗動物學(xué)習(xí)記憶能力明顯受損，出現(xiàn)老年癡呆樣病理改變［4－7］。此外，實驗［8－9］表明，產(chǎn)前慢性應(yīng)激可致子代行為學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)上的改變。然而，目前極少有學(xué)者研究產(chǎn)前慢性應(yīng)激聯(lián)合子代慢性應(yīng)激對子代學(xué)習(xí)記憶的影響。研究［10］顯示產(chǎn)前慢性應(yīng)激會顯著增加雌性子代小鼠的抑郁和焦慮行為，對雄性子代則以學(xué)習(xí)記憶損傷為主。APPswe／PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠是常用的老年癡呆小鼠模型，在6～7月齡時腦內(nèi)由淀粉樣前體蛋白（amyloid precursor protein，APP）經(jīng)淀粉樣前體蛋白β位點分裂酶1 （β-site amyloid precursor protein-cleaving enzyme 1，BACE1）降解產(chǎn)生的β-淀粉樣蛋白1-42（amyloid β-peptide protein，Aβ42）開始升高并逐漸出現(xiàn)淀粉樣斑塊。該研究擬用此雙轉(zhuǎn)基因小鼠，探討產(chǎn)前慢性應(yīng)激是否進一步惡化慢性應(yīng)激所致的雄性子代小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力損傷及其可能的機制。

1 材料與方法

1．1 主要試劑和儀器 BACE1、Aβ42單克隆抗體（美國Abcam公司）；β-actin單克隆抗體（德國Santa Cruz公司）；APP單克隆抗體、山羊抗鼠二抗、山羊抗兔二抗、動物基因組DNA抽提試劑盒（上海生物工程公司）；Western blot法化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒（美國Thermo Scientific公司）；電泳儀、凝膠成像分析系統(tǒng)（北京Tanon公司）；小鼠血清皮質(zhì)酮酶聯(lián)免疫試劑盒（武漢華美公司）；Morris水迷宮圖像采集及分析系統(tǒng)（北京醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所）。

1．2 實驗動物與分組 實驗的時間軸見圖1。SPF 級Tg（APPswe，PSEN1dE9）雙轉(zhuǎn)基因雄鼠10只及普通C57bl／6雌鼠60只，均為10周齡，30～40 g，購自南京大學(xué)模式動物研究中心。小鼠飼養(yǎng)遵循安徽醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)倫理委員會的要求。室溫（23 ±1）℃，相對濕度50%，自由攝食飲水；正常飼養(yǎng)7 d，使其適應(yīng)周圍環(huán)境。于晚20∶00點雌雄2∶1合籠，次日早上08∶00檢查陰栓，查到陰栓者取出單籠飼養(yǎng)，記為孕第1天（G1），并將孕鼠隨機分為產(chǎn)前慢性應(yīng)激組和產(chǎn)前正常處理組。產(chǎn)前慢性應(yīng)激組正常飼養(yǎng)至孕第7天（G7），開始施加不可預(yù)測的慢性復(fù)合應(yīng)激：夾尾（距尾尖2 cm處，5 min）、束縛（50 ml帶多個小孔的離心管，2 h）、冰水游泳（4～6℃，5 min）、溫水游泳（28～35℃，15 min）、夜相給亮（12 h）、禁水（24 h）、禁食（24 h）等7種應(yīng)激方式。每天隨機采用1種方法對小鼠進行應(yīng)激刺激，每天2次（最后3種應(yīng)激方式除外），持續(xù)至孕第20天（G20）。產(chǎn)前正常處理組小鼠不接受應(yīng)激，正常飼養(yǎng)。仔鼠于產(chǎn)后21 d（P21）斷奶。雄性仔鼠于產(chǎn)后25 d（P25）剪取尾尖（＜5 mm）組織，采用PCR法進行基因鑒定［8］。雄性APPswe／PS1dE9子代小鼠分籠（2只／籠）飼養(yǎng)。產(chǎn)后180 d （P180）將子代小鼠分為產(chǎn)前慢性應(yīng)激－子代慢性應(yīng)激組（TT組，n＝18）、產(chǎn)前慢性應(yīng)激－子代正常處理組（TC組，n＝18）、產(chǎn)前正常處理－子代慢性應(yīng)激組（CT組，n＝18）和產(chǎn)前正常處理－子代正常處理組（CC組，n＝19）。TT組和CT組小鼠接受4周如上所述的不可預(yù)測的慢性復(fù)合應(yīng)激。

1．3 學(xué)習(xí)記憶能力測試 采用Morris水迷宮［11］。每組隨機選取小鼠［TT組（n＝8）、TC組（n＝8）、CT組（n＝8）、CC組（n＝9）］做此實驗，歷時5 d。前4 d進行定位航行實驗，每天訓(xùn)練4次，每次依次從4個象限將小鼠面朝池壁上的入水點放入水中，觀察小鼠登上平臺所需時間（逃避潛伏期）。每次訓(xùn)練的間隔為15 min，記錄逃避潛伏期、游泳距離和游泳速度。第5天，撤去平臺，進行空間探索實驗。記錄小鼠90 s內(nèi)的平臺象限游泳時間和穿越平臺次數(shù)。

1．4 HE染色觀察病理改變 應(yīng)激結(jié)束后，頸椎脫臼法處死小鼠，冰上取腦。右側(cè)腦組織經(jīng)4%多聚甲醛固定、脫水、包埋后，于前囪后3 mm作冠狀切片（6 μm）。每個小鼠腦組織樣本取2張切片進行HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察海馬組織形態(tài)學(xué)變化并拍照，之后用Image-Pro Plus Image分析軟件計數(shù)海馬CA3區(qū)神經(jīng)元總數(shù)和異常神經(jīng)元數(shù)。每組觀察3只小鼠切片并取平均值。

1．5 Congo red染色法檢測淀粉樣斑塊 切片脫臘至水后，直接浸入Congo red染色液25 min，水洗，0.2%堿性乙醇溶液分化數(shù)秒，充分水洗；蘇木精液染色1 min，水洗，1%鹽酸乙醇溶液分化數(shù)秒，

經(jīng)充分水洗并用0.25%氨水溶液返藍后，梯度乙醇溶液脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，光鏡下觀察淀粉樣斑塊并拍照。

1．6 Western blot法檢測海馬組織APP、BACE1 和Aβ42的表達量 常規(guī)提取海馬組織蛋白［11］，經(jīng)Lowery法測定蛋白濃度后定量，98℃變性5 min。灌制12%的SDS-聚丙烯酰胺凝膠（Aβ42的檢測配制10～20%的梯度Tricine-聚丙烯酰胺凝膠）；每孔上樣30 μg；電泳（65 V／30 min，120 V／90 min）；然后，200 mA／100 min（Aβ42120 mA／30 min）將凝膠中蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上；以5%脫脂奶粉室溫封閉1 h；加一抗，于4℃過夜；洗膜，加相應(yīng)二抗，室溫孵育1 h；洗膜，滴加化學(xué)發(fā)光試劑，最后用凝膠成像分析系統(tǒng)分析各免疫印跡條帶的光密度值（optical density，OD）。實驗中所使用的抗體及其稀釋濃度：β-actin（鼠單抗，1∶800）、APP（兔多抗，1∶4 000）、BACE1（兔多抗，1∶800）、Aβ42（兔多抗，1∶1 000）、二抗（羊抗鼠，1∶15 000；羊抗兔，1∶80 000）。

1．7 ELISA法檢測血清皮質(zhì)酮水平 應(yīng)激結(jié)束后4 h，對未進行水迷宮實驗的小鼠每組各取10只，眼球取血，分離血清，按照ELISA試劑盒的說明書進行血清皮質(zhì)酮水平的檢測。

1．8 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 15．0軟件進行分析，數(shù)據(jù)以±s表示。水迷宮實驗小鼠體重、逃避潛伏期和游泳距離的結(jié)果采用重復(fù)測量方差分析，其余結(jié)果均采用單因素方差分析，組間比較采用Bonferroni-t檢驗。

2 結(jié)果

2．1 產(chǎn)前慢性應(yīng)激進一步加劇子代慢性應(yīng)激所致的子鼠學(xué)習(xí)記憶能力損傷 體重監(jiān)測顯示在最后1周訓(xùn)練結(jié)束時，TT組小鼠較TC組和CC組體重減低（P＜0.05），CT組小鼠較TC組和CC組體重也減低（P＜0.05）。水迷宮試驗結(jié)果表明，隨實驗天數(shù)增加，4組小鼠的逃避潛伏期均明顯縮短（F＝90.299，P＜0.05），游泳距離明顯縮短（F＝80.531，P＜0.05），表明通過訓(xùn)練小鼠已逐漸學(xué)會尋找平臺，并對平臺的空間定位產(chǎn)生記憶能力。與CC組相比，CT組小鼠的逃避潛伏期和游泳距離延長（P＜0.05），平臺象限游泳時間和穿越平臺次數(shù)減少（P＜0.05），游泳速度差異無統(tǒng)計學(xué)意義。TT組較CT組小鼠的逃避潛伏期和游泳距離進一步延長（P＜0.05），平臺象限游泳時間和穿越平臺次數(shù)進一步減少（P＜0.05）。見圖2。

2．2 產(chǎn)前慢性應(yīng)激進一步加劇子代慢性應(yīng)激所致的子鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷 CC組和TC組小鼠海馬CA3區(qū)錐體細胞層神經(jīng)元染色清晰，數(shù)量較多，排列整齊緊密，呈錐體狀、圓球狀，細胞核呈圓形，核仁明顯；CT組和TT組神經(jīng)元排列疏松紊亂，數(shù)量較少，細胞體略小，細胞核濃染、固縮。見圖3。用Image-Pro Plus Image分析軟件計數(shù)海馬

CA3區(qū)神經(jīng)元總數(shù)和異常神經(jīng)元數(shù)目，結(jié)果顯示與CT組（101.33±7.62）、TC組（113.2±8.25）和CC組（116.2±8.74）比較，TT組（96.83±8.16）小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元總數(shù)明顯減少；與CT組（17.50 ±2.69）、TC組（8.67±1.63）、CC組（7.33± 1.03）比較，TT組（21.50±2.07）核固縮、濃染等退行性改變的異常神經(jīng)元數(shù)明顯增加，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2．3 產(chǎn)前慢性應(yīng)激進一步加劇子代慢性應(yīng)激所致的子鼠淀粉樣斑塊沉積 4組小鼠的前額葉皮質(zhì)均有觀察到明顯的橘紅色Aβ42沉積（箭頭所指），形狀不規(guī)則，呈斑塊狀，大小不一。TT組小鼠的前額葉皮質(zhì)的淀粉樣斑塊數(shù)量明顯多于CT組、TC組和CC組。見圖4。然而，4組小鼠的海馬組織中淀粉樣斑塊數(shù)量稀少，只在CT組和TT組的個別切片上觀察到。見圖5。

2．4 產(chǎn)前慢性應(yīng)激進一步加劇子代慢性應(yīng)激所致的子鼠海馬APP、BACE1和Aβ42表達 子代慢性應(yīng)激可增加海馬組織APP、BACE1和Aβ42的表達量（F＝173.959、114.965、248.272，P＜0.05），產(chǎn)前慢性應(yīng)激也可增加海馬組織APP、BACE1和Aβ42的表達量（F＝85.095、17.146、137.834，P＜0.05），且對于APP和Aβ42產(chǎn)前慢性應(yīng)激和子代慢性應(yīng)激存在交互效應(yīng)（FAPP＝12.829，F(xiàn)Aβ42＝16.424，P＜0.05）。與CT組相比，TT組小鼠海馬組織的APP 和Aβ42更多表達（P＜0.05）；至于海馬組織中BACE1的表達量，也有增多的趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＝0.055）。見圖6。

2．5 產(chǎn)前慢性應(yīng)激進一步加劇子代慢性應(yīng)激所致的子鼠血清皮質(zhì)酮水平升高 子代慢性應(yīng)激可增加血清皮質(zhì)酮水平（F＝67.332，P＜0.05），產(chǎn)前慢性應(yīng)激也可增加血清皮質(zhì)酮水平（F＝10.840，P＜0.05），且TT組小鼠較CT組有更高的血清皮質(zhì)酮水平（P＜0.05）。

3 討論

當(dāng)今社會競爭激烈，孕婦和其子代都有可能暴露于慢性應(yīng)激環(huán)境中，故產(chǎn)前慢性應(yīng)激對成年子代遭遇慢性應(yīng)激所致的認(rèn)知功能改變會產(chǎn)生怎樣的影響就成了一個有意義且實際的問題，其機制更是值得探討。本研究Morris水迷宮結(jié)果顯示CT組子代小鼠較CC組逃避潛伏期和游泳距離延長，平臺象限游泳時間和穿越平臺次數(shù)減少；TT組較CT組的逃避潛伏期和游泳距離進一步延長，平臺象限游泳時間和穿越平臺次數(shù)進一步減少；說明產(chǎn)前慢性應(yīng)激可加劇雄性子代小鼠因慢性應(yīng)激所致的學(xué)習(xí)記憶

損傷。

海馬是應(yīng)激反應(yīng)的靶部位，其CA3區(qū)與精確空間學(xué)習(xí)記憶的形成密切相關(guān)［12］；因此，該區(qū)域神經(jīng)元數(shù)量、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的改變必然會導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶能力的變化。本研究病理形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示，CT組子代小鼠較CC組海馬CA3區(qū)神經(jīng)元總數(shù)明顯減少，核固縮、濃染等退行性改變的異常神經(jīng)元明顯增多；TT組小鼠較CT組海馬CA3區(qū)神經(jīng)元總數(shù)進一步減少，異常神經(jīng)元數(shù)進一步增加，提示產(chǎn)前慢性應(yīng)激可加劇慢性應(yīng)激所致的雄性子代小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷，可能是TT組學(xué)習(xí)記憶能力下降的重要原因之一。

Aβ42容易聚集，是大腦組織中淀粉樣斑塊的主要組份［13］。研究［14］顯示Aβ42能降低細胞膜的流動性，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激，因而具有較強的細胞毒性和促凋亡作用。本研究提示產(chǎn)前慢性應(yīng)激加劇慢性應(yīng)激所致的雄性子代小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷，可能與其加劇子代小鼠海馬組織APP和BACE1表達進而增加Aβ42的生成有關(guān)。值得注意的是，在本實驗中4組小鼠的前額葉皮質(zhì)均有觀察到明顯的淀粉樣斑塊沉積（TT組數(shù)量明顯多于另外3組），而海馬組織中淀粉樣斑塊數(shù)量稀少（只在CT組和TT組的個別切片上觀察到），這可能有3個方面的原因：①小鼠只有6月齡，斑塊的產(chǎn)生很少；②樣本量有限；③前額葉皮質(zhì)的分化相對較晚［15］，因而其神經(jīng)元可能會在本實驗進行的產(chǎn)前慢性應(yīng)激期內(nèi)受損。

研究［16－17］表明，在APP和BACE1的啟動子區(qū)含有多個糖皮質(zhì)激素反應(yīng)元件。本研究結(jié)果顯示，TT組小鼠較其余3組有更高的血清皮質(zhì)酮水平，提示產(chǎn)前慢性應(yīng)激加劇子代海馬組織APP和BACE1表達可能與其提高子代血清皮質(zhì)酮水平，進而作用于APP和BACE1啟動子區(qū)的糖皮質(zhì)激素反應(yīng)元件有關(guān)。但確切機理還有待于進一步研究。

綜上所述，產(chǎn)前慢性應(yīng)激可加劇6月齡雄性APPswe／PS1dE9子代小鼠因慢性應(yīng)激所致的學(xué)習(xí)記憶損傷，這可能與其進一步提高子代血清皮質(zhì)酮水平，促進APP和BACE1表達，進而增加Aβ42生成，最終引起海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷有關(guān)。

參考文獻

［1］ McEwen B S．Central effects of stress hormones in health and disease，understanding the protective and damaging effects of stress and stress mediators［J］．Eur J Pharmacol，2008，583（2－3）：174－85．

［2］ 李 亞，陳亞靜，史建勛，等．慢性應(yīng)激對小鼠學(xué)習(xí)記憶功能影響及突觸作用［J］．中國公共衛(wèi)生，2012，28（12）：1602－4．

［3］ Arnsten A F．Stress signalling pathways that impair prefrontal cortex structure and function［J］．Nat Rev Neurosci，2009，10（6）：410－22．

［4］ Carroll J C，Iba M，Bangasser D A，et al．Chronic stress exacerbates tau pathology，neurodegeneration，and cognitive performance through a corticotropin-releasing factor receptor-dependent mechanism in a transgenic mouse model of tauopathy［J］．J Neurosci，2011，31（40）：14436－49．

［5］ Cuadrado-Tejedor M，Ricobaraza A，F(xiàn)rechilla D，et al．Chronic mild stress accelerates the onset and progression of the Alzheimer′s disease phenotype in Tg2576 mice［J］．J Alzheimers Dis，2012，28（3）：567－78．

［6］ Rothman S M，Herdener N，Camandola S，et al．3xTgAD mice exhibit altered behavior and elevated Aβ after chronic mild social stress［J］．Neurobiol Aging，2012，33（4）：830．e1－12．

［7］ Huang H J，Liang K C，Ke H C，et al．Long-term social isolation exacerbates the impairment of spatial working memory in APP／PS1 transgenic mice［J］．Brain Res，2011（1371）：150－60．

［8］ Sierksma A S，Prickaerts J，Chouliaras L，et al．Behavioral and neurobiological effects of prenatal stress exposure in male and fe-

male APPswe／PS1dE9 mice［J］．Neurobiol Aging，2012，34（1）：319－37．

［9］ Gutiérrez-Rojas C，Pascual R，Bustamante C．Prenatal stress alters the behavior and dendritic morphology of the medial orbitofrontal cortex in mouse offspring during lactation［J］．Int J Dev Neurosci，2013，31（7）：505－11．

［10］Glover V，Hill J．Sex differences in the programming effects of prenatal stress on psychopathology and stress responses：an evolutionary perspective［J］．Physiol Behav，2012，106（5）：736－40．

［11］程 娟，王濤濤，唐 偉，等．慢性復(fù)合應(yīng)激致老年小鼠學(xué)習(xí)記憶損傷及機制研究［J］．安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013，48 （12）：1466－9．

［12］Gilbert P E，Brushfield A M．The role of the CA3 hippocampal subregion in spatial memory：a process oriented behavioral assessment［J］．Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry，2009，33 （5）：774－81．

［13］Pimplikar S W．Reassessing the amyloid cascade hypothesis of Alzheimer′s disease［J］．Int J Biochem Cell Biol，2009，41（6）：1261－8．

［14］Peters I，Igbavboa U，Schütt T，et al．The interaction of beta-amyloid protein with cellular membranes stimulates its own production ［J］．Biochim Biophys Acta，2009，1788（5）：964－72．

◇藥學(xué)研究◇

［15］Kostovic I，Judas M，Petanjek Z，et al．Ontogenesis of goal-directed behavior：anatomo-functional considerations［J］．Int J Psychophysiol，1995，19（2）：85－102．

［16］Green K N，Billings L M，Roozendaal B，et al．Glucocorticoids increase amyloid-β and tau pathology in a mouse model of Alzheimer′s disease［J］．J Neurosci，2006，26（35）：9047－56．

［17］Sambamurti K，Kinsey R，Maloney B，et al．Gene structure and organization of the human β-secretase（BACE）promoter［J］．FASEB J，2004，18（9）：1034－6．

Chronic prenatal stress exacerbates learning and memory impairments in adult male APPswe／PS1dE9 offspring mice who also suffer chronic stress

Tang Wei，Wang Zhengyu，Cheng Juan，et al
（School of Public Health，Anhui Medical University，Hefei 230032）

AbstractObjective To determine whether chronic prenatal stress could exacerbate learning and memory impairments in 6-month-old male APPswe／PS1dE9 offspring mice who also suffer chronic stress，and if so，what the underlying mechanism is．Methods There were four groups：the prenatal control-offspring control group（CC group），the prenatal control-chronic offspring stress group（CT group），the chronic prenatal stress-offspring control group（TC group），and the chronic prenatal stress-chronic offspring stress group（TT group）．Morris water maze was used to investigate learning and memory impairments in mice，and the histopathologic changes in CA3 field of the hippocampus（HE stain and Congo red stain）in hippocampus were examined under a light microscope．Furthermore，western blot was used to observe the expression levels of amyloid precursor protein（APP），β-site APP-cleaving enzyme 1（BACE1）and amyloid-β protein（Aβ42）in hippocampus．Additionally，we also used ELISA to examine the serum levels of corticosterone in the offspring mice．Results Compared with the CC group，the results showed that CT group mice had more escape latency and swimming distance（P＜0.05），less number of crossing the platform site and swimming time in the quadrant of the platform（P＜0.05）．Furthermore，the neuropathological changes were characterized by the disintegrated pyramidal layered structure，decreased neuron number，worse cell morphology，soma condensation，nuclear pyknosis in the CA3 field of hippocampus in the CT group（P＜0.05）．Moreover，the expression of APP，BACE1 and Aβ42in hippocampus were increased，as well as the serum corticosterone concentration in the CT group（P＜0.05）．Noteworthy，the learning and memory impairments and neuropathological changes stated above were worse in TT group mice compared to CT group mice（P＜0.05）．Conclusion Chronic stress could exacerbate learning and memory impairments in 6-month-old male APPswe／PS1dE9 offspring mice who also suffer chronic stress，which may be related to chronic prenatal stress potentiate the production of Aβ42mediated by glucocorticoids through increasing expression of APP and BACE1 gene．

Key wordsprenatal stress；chronic stress；corticosterone；amyloid precursor protein；learning and memory

作者簡介：唐 偉，男，碩士研究生；姚余有，男，副教授，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：yaoanqi71＠yahoo．com．cn

基金項目：安徽省自然科學(xué)基金（編號：1208085MH145）；安徽高校省級自然科學(xué)研究項目（編號：KJ2011Z161）

文獻標(biāo)志碼A

文章編號1000－1492（2015）04－0466－06

中圖分類號R 338．64