DJ-1基因在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用分析

陳錦章　黃　維　鄭大勇　李愛民

·基礎(chǔ)研究·

DJ-1基因在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用分析

陳錦章黃維鄭大勇李愛民

【摘要】目的 探討DJ-1基因在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法選取肺鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1和HTB-182細(xì)胞株。構(gòu)建DJ-1siRNA，siRNA感染細(xì)胞。采用WB驗(yàn)證DJ-1siRNA的干擾情況，采用MTT檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力。觀察DJ-1 si RNA干擾情況、各組細(xì)胞的增殖能力。結(jié)果DJ-1 siRNA干擾組中DJ-1的蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著低于NC組和BC組，DJ-1 siRNA組細(xì)胞增殖速度顯著慢于NC組和BC組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論DJ-1基因能夠抑制肺鱗癌細(xì)胞增殖，阻礙相關(guān)蛋白的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】DJ-1基因；肺癌；作用

The Role of DJ-1 Gene in the Development of Lung Cancer

CHENJinzhang，HUANGWei，ZHENGDayong，etal.NanfangHospital，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou，510510

【Abstract】ObjectiveTo explore the role of DJ-1 gene in the development of lung cancer.MethodsSK-MES-1 and HTB-182 were selected.DJ-1siRNA and siRNA infection cells were structured.The interference of DJ-1siRNA were tested by WB，the cell proliferation were tested by MTT.The DJ-1siRNA interference and the cell proliferation were observed.ResultsThe protein expression of DJ-1 in DJ-1siRNA group was lower than those of NC group and BC group(P<0.05).The cell proliferation rate of DJ-1siRNA group was lower than those of NC group and BC group(P<0.05).ConclusionThe DJ-1 can inhibit lung squamous cancer cell proliferation，and hinder the related protein expression.

【Key words】DJ-1 gene；Lung cancer；Effects

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:0317～0319)

肺癌是一種對(duì)人體造成嚴(yán)重危害的惡性腫瘤之一，其高的發(fā)病率和死亡率對(duì)人們的健康造成嚴(yán)重威脅[1]。其中，男性肺癌的發(fā)病率和死亡率占所有惡性腫瘤中的首位，女性占據(jù)第二位。關(guān)于肺癌的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確，使得治療難度較高。大量的研究表明，肺癌的發(fā)病和長(zhǎng)期大量吸煙有著密切的聯(lián)系，患者越早開始吸煙，患肺癌的概率越高。另外，吸煙不僅對(duì)自身健康造成影響，還會(huì)使得周圍人群被動(dòng)吸煙，危及健康[2]。當(dāng)然，城市的環(huán)境污染也使得人們患肺癌的概率不斷增加。研究肺癌的發(fā)病機(jī)制對(duì)于開發(fā)新的高效藥物具有重要意義。DJ-1是PARK7基因編碼的屬于肽酶C56的蛋白質(zhì)家族的一個(gè)成員。關(guān)于DJ-1蛋白的精確的功能現(xiàn)階段還并未完全清楚[3]。其在機(jī)體的多方面機(jī)能中均表現(xiàn)出了一定的相關(guān)性。我院開展DJ-1基因在肺癌中的臨床價(jià)值，以其更進(jìn)一步研究肺癌的發(fā)病機(jī)制，為臨床治療提供依據(jù)?，F(xiàn)將研究?jī)?nèi)容報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1　材料

細(xì)胞株：肺鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1，HTB-182細(xì)胞株。

細(xì)胞株的培養(yǎng)：SK-MES-1，采取含10%FBS的MEM培養(yǎng)基于37℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)。HTB-182，采用含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基于37℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)。

載體：PNTAPB表達(dá)載體，PMD19T載體。

主要試劑：Primer，DNA Marker，PCR試劑盒，DNA提取試劑盒，質(zhì)粒提取試劑，Tris，尿素等。

主要儀器：離心機(jī)，水浴箱，紫外分光光度儀，酶標(biāo)儀等。

1.2　方法

構(gòu)建DJ-1siRNA，siRNA感染細(xì)胞。

采取WB驗(yàn)證DJ-1siRNA的干擾情況：用D-Han-ks液將細(xì)胞洗滌3次，刮下細(xì)胞，于1 000 rpm轉(zhuǎn)速下離心，離心時(shí)間為8 min，置于-70℃保存。使用時(shí)，將其裂解后，置于新的EP管中，記錄備用。測(cè)定蛋白濃度，制備分離膠，切膠，沖洗緩沖膜，熒光顯色。

MTT法：制備細(xì)胞懸液，稀釋細(xì)胞，培養(yǎng)完成后，比色。

分別設(shè)計(jì)DJ-1siRNA組、空質(zhì)粒組(NC)、空白對(duì)照組(BC)。

1.3　觀察指標(biāo)

觀察DJ-1 si RNA干擾情況、MTT檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2結(jié)果

2.1　DJ-1 si RNA干擾情況

研究結(jié)果表明，DJ-1 si RNA干擾組中DJ-1蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著低于NC組(空質(zhì)粒組)和BC組(空白對(duì)照組)。DJ-1 si RNA可以特異性抑制SK-MES-1、HTB-182細(xì)胞中的DJ-1表達(dá)，NC組對(duì)DJ-1的表達(dá)無(wú)影響，見圖1。

注：1為SK-MES-1；2為 DJ-1 siRNA SK-MES-1；3為 NC SK-MES-1；4為 HTB-182；5為DJ-1 siRNA HTB-182；6為NC HTB-182。

圖1DJ-1 si RNA干擾圖

2.2　MTT檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力結(jié)果

研究結(jié)果表明，經(jīng)病毒感染細(xì)胞株后，三組細(xì)胞增殖能力有一定差異。DJ-1 siRNA組細(xì)胞增殖速度顯著慢于NC組和BC組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。DJ-1具有抑制細(xì)胞增殖的能力，見表1(SK-MES-1細(xì)胞株)、表2(HTB-182細(xì)胞株)。

表1　各組細(xì)胞增殖能力比較±s)

注：*為與NC組、BC組比較，P<0.05。

表2　MTT檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力結(jié)果比較±s)

注：*為與NC組、BC組比較，P<0.05。

3討論

肺癌是我國(guó)常見惡性腫瘤，其高的發(fā)病率和死亡率對(duì)我國(guó)人口生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響。其中，非小細(xì)胞肺癌占肺癌的80%左右[4]。臨床數(shù)據(jù)顯示，肺癌的5年生存率僅為8.9%~15%[5]。造成患者死亡的主要原因是腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[6]。關(guān)于肺癌的形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)表型都比較復(fù)雜。臨床多通過(guò)細(xì)胞小學(xué)、核染色質(zhì)、蘇木素染色等對(duì)小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌進(jìn)行區(qū)別[7-11]。

隨著基因技術(shù)的發(fā)展，芯片技術(shù)得到了不斷的完善。芯片技術(shù)可以分析成千上萬(wàn)個(gè)基因，而現(xiàn)階段的技術(shù)，尚未實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)分析對(duì)肺癌的診斷。進(jìn)行肺癌的基因組分析對(duì)于更進(jìn)一步研究肺癌的發(fā)病機(jī)制，并為臨床治療提供有效的診斷依據(jù)[12]。已有研究表明，小細(xì)胞肺癌屬于典型的亞二倍體，非小細(xì)胞肺癌是超二倍體，甚至三倍體等[13]。關(guān)于腫瘤基因中染色體的非整倍性改變等，都和肺癌的發(fā)病機(jī)制有著密切的聯(lián)系。其中，肺鱗癌、肺腺癌等，都有著不同的特征性變化。超過(guò)90%的小細(xì)胞肺癌伴有染色體臂的缺失等情況。而且缺失的染色體臂不盡相同[14]。以17p13和13q14最為常見。多項(xiàng)研究表明，其和腫瘤抑制因子p53、RB的表達(dá)降低甚至失活有相關(guān)性[15]。通常情況下，某種基因的DNA獲得后，會(huì)使得該基因過(guò)表達(dá)。

研究和肺癌侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因和蛋白質(zhì)，對(duì)于研究肺癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制有著重要價(jià)值，對(duì)于肺癌的診斷、治療、遠(yuǎn)期生存率的提高有著重要意義。DJ-1基因是人染色體1P36.2-36.3位點(diǎn)，也叫做PARK7，長(zhǎng)24kb，有8個(gè)外顯子[16]。DJ-1基因在進(jìn)化方面屬于相當(dāng)保守的一種癌基因，在機(jī)體的多種器官中均存在[17]。關(guān)于其在肺癌方面的研究，相關(guān)報(bào)道較少。開展該方面的研究具有重要意義。

本文研究結(jié)果顯示，DJ-1 si RNA干擾組中DJ-1的蛋白質(zhì)表達(dá)顯著低于NC組和BC組，DJ-1 siRNA組細(xì)胞增殖速度顯著低于NC組和BC組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由此，DJ-1基因能夠抑制肺鱗癌細(xì)胞增殖，阻礙相關(guān)蛋白的表達(dá)，在肺癌相關(guān)診斷及治療方面，具有重要指導(dǎo)意義。

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(編輯：吳小紅)

(收稿日期2014-08-06修回日期 2014-10-16)

中圖分類號(hào)：R734.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2015)03-0317-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.03.001

通訊作者：李愛民

基金項(xiàng)目：廣東省自然科學(xué)基金(編號(hào)：S2012010009392)；南方醫(yī)院院長(zhǎng)基金(編號(hào)：2011C001)
作者單位：510515 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院腫瘤內(nèi)科(陳錦章，鄭大勇，李愛民)；528300 順德市第一人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科(黃維)